双波长薄层色谱扫描法测定刺糖中蔗果三糖的含量

谢　睆， 施　洋， 常军民

(新疆医科大学1药学院; 2学报编辑部, 乌鲁木齐　830011)



·药学研究·

双波长薄层色谱扫描法测定刺糖中蔗果三糖的含量

谢睆1， 施洋2， 常军民1

(新疆医科大学1药学院;2学报编辑部, 乌鲁木齐830011)

目的建立双波长薄层色谱扫描法测定不同时间、产地刺糖中蔗果三糖(GF2)含量。方法以GF2为标准品，采用双波长薄层扫描分析，展开剂为冰乙酸-三氯甲烷-95%乙醇(9∶11∶11)，显色剂为二苯胺-苯胺-丙酮-磷酸(1∶1∶50∶5), 最大吸收波长510 nm，参比波长610 nm。结果蔗果三糖(GF2)在0.642 8～15.975 2 μg范围内线性关系良好，r=0.999 2，平均回收率为102.5%，RSD为1.55%。不同产地刺糖中GF2含量为在12.957 3～36.328 1 mg/g。结论双波长薄层色谱扫描法分离效果好，操作简便，可用于刺糖中GF2的定性及定量分析。

刺糖； 蔗果三糖； 双波长薄层扫描法

刺糖(Alhagi-honey)为豆科植物骆驼刺(Alhagipseudlhagi.Desv)枝叶分泌的糖液凝结而成的颗粒，色黄，味甜，略具黏性，是维吾尔医常用药材，用于治疗痢疾、腹泻、血尿等疾病[1]。维吾尔族民间常将其与牛奶一起服用，称其性热而燥，可以开塞通窍、强壮身体。刺糖药材的主要成分为糖类，包括多糖和低聚果糖[2]。低聚果糖(Fructooligosaccharides，FOS)主要成分是蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)。低聚果糖具有降血糖、增强免疫力、抗肿瘤、保护肝脏、调节肠道功能、保护牙齿等作用[3-5]。本研究对刺糖中GF2进行了分离纯化及含量测定，为进一步开发利用维药刺糖奠定了理论基础。

1　仪器与试药

1.1仪器Camag Scanner 3型薄层扫描仪(瑞士卡玛),Camag Linomat5型半自动动点样仪(瑞士卡玛),AG-135电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司),薄层色谱展开缸(上海信谊仪器厂),硅胶G板(青岛海洋化工集团公司),注射器(江西侨明医疗器械有限公司),AS超声波清洗器(天津奥特塞恩斯仪器有限公司),循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸优先公司),RE-5299旋转蒸发仪(上海爱郎仪器有限公司),JA-4003N分析天平(上海箐海仪器有限公司)。

1.2试药刺糖药材经新疆医科大学天然药物化学教研室帕丽达教授鉴定为刺糖(Alhagi-honey),刺糖药材批次及产地见表1。对照品GF2 (Wako Pure，批号：292-73411),冰乙酸、氯仿、95%乙醇、无水乙醇、磷酸(天津市富宇精细化工有限公司),苯胺、二苯胺(天津市福晨化学试剂厂),丙酮(天津市风船化学试剂科技有限公司),试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。

表1　不同时间产地刺糖药材

2 方法与结果

2.1药材前处理称取干燥的刺糖药材100 g，按药材-石油醚(1∶3)进行脱脂，药材脱脂后挥干溶剂，按药材-乙醇(1∶3)加热回流，以除去醇溶物，药材挥干溶剂，保存备用[6]。

2.2试剂溶液的配置

2.2.1对照品溶液取对照品GF2适量，精密称定，置于10 mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，摇匀，制得浓度为2.010 0 mg/mL的对照品储备液。

2.2.2供试品溶液取前处理过的刺糖药材1适量，精密称定，加入50 mL磨口三角瓶中，料液比为1∶20，应用超声波辅助提取30 min，过滤，滤渣按同法重复提取1次，合并2次滤液，浓缩，定容至5 mL，摇匀，备用[7]。

2.3薄层色谱条件展开剂：冰乙酸-氯仿-95%乙醇(9∶11∶11)，显色剂：二苯胺-苯胺-磷酸，在此条件下展层及显色效果较好，见图1。

1： GF2对照品；2：蔗糖对照品；3：刺糖药材1；A与C为GF2；B与D为蔗糖

图1标准单糖样品与刺糖样品薄层色谱图

2.4双波长薄层扫描定量吸取GF2对照品溶液点样于硅胶G薄层板上，将点样后的薄层板于展开缸中饱和30 min后展开，直立展开距上沿1 cm拿出，挥干溶剂，用喷雾器将显色剂均匀喷洒在薄层板上，置于烤板器上95～100℃显色5 min，取下至冷却。将薄层板置于薄层扫描仪工作台上，进行全波长扫描确定最大吸收波长为510 nm及参比波长为610 nm，利用得到的波长进行双波长检测，对样品进行定量测定[5]。10批次药材薄层色谱图相似性较大，但斑点深浅不同，经双波长薄层扫描10批次刺糖药材的峰位、峰数一致，说明10批药材含糖种类一致，通过峰高不同说明各糖含量高低差异较大，品质存在一定差异，见图2、3。

2.5方法学考察

2.5.1线性关系考察分别精密吸取GF2对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、8.0 μL，点于同一硅胶板上，按“2.4”项下方法测定，以对照品溶液点样量(μL)为横坐标，峰面积为纵坐标计算GF2含量的回归方程：Y=3 216.3X+4 430，r=0.999 2,结果表明GF2在0.642 8～15.975 2 μg范围内线性关系良好。

2.5.2精密度试验精密吸取GF2对照品溶液3 μL，在同一薄层板上平行点样6次，按“2.4”项下方法测定GF2含量。结果GF2峰面积积分值分别为14 364.1、14 373.8、14 059.2、13 810.2、14 089.7、13 651.7， RSD=2.06%，表明精密度良好。

2.5.3稳定性试验每隔10 min对同一斑点进行扫描测定GF2峰面积值。结果峰面积值分别为13 909.7、14 084.1、14 303.8、14 848.6、14 612.8、14 242.7， RSD=2.40%，表明样品斑点在60 min内稳定性良好。

2.5.4重复性试验取同一批样品，分别精密称取6份，每份1 g，按照“2.2.2”项下供方法制备储备液，并稀释10倍，点样量为2 μL，按照“2.4”项下方法分别测定GF2含量，峰面积积分值分别为9 893.5、10 808.1、9 987.0、10 788.5、11 000.8、10 442.2，RSD=4.39%。

2.5.5加样回收率精密吸取刺糖药材1储备液1 mL于10 mL容量瓶，定容。并从稀释后的储备液中精密吸取1 mL于炮弹管，共9份，每3份为1组，按高、中、低3个水平分别精密加入一定量对照品，点样量为2.0 μL，按“2.4”项下方法测定GF2的含量， GF2平均回收率=102.5%，RSD=1.55%，见表2。

表2　GF2加样回收率结果

2.6不同时间、产地刺糖GF2含量测定分别精密吸取10批刺糖药材储备液，点样量为2.0 μL，按上述方法进行薄层展开和扫描定量分析，药材产地吐鲁番的刺糖蔗果三糖含量明显高于巴基斯坦，并且同产地刺糖药材中GF2的含量随产出时间改变，药材保存时间越长则GF2含量越少，见表3。

表3　不同时间、产地刺糖GF2含量测定结果

3　讨论

本实验共考察5种展开系统，展开剂系统Ⅰ为冰醋酸-氯仿无-水-乙醇-水=9∶11∶11∶2,展开剂系统Ⅱ为正丁醇-异丙醇-水-乙酸=7∶5∶4∶2,展开剂系统Ⅲ为正丁醇-乙酸乙酯-异丙醇-冰乙醇-水=2∶6∶6∶4∶1,展开系统Ⅳ为正丁醇-乙酸乙酯-异丙醇-冰乙醇=2∶6∶6∶4,展开系统Ⅴ为冰乙酸-氯仿-95%乙醇=9∶11∶11，展开系统Ⅴ效果好。所选用显色剂为苯胺-二苯胺-磷酸[8-9]，苯胺暴露于空气或日光下易氧化变色，若将显色后的薄层板长时间置于日光下板面则会变为藏蓝色，对实验结果的测定有影响。因此配置好的显色剂需避光保存，显色后的薄层板要在1 h内测定，并且避光保存。实验中点样所使用的仪器为半自动动点样仪(Camag Linomat 5型)，可控制点样量，实验证明样品点样量>0.5 μL时效果较好。

通过对刺糖药材低聚果糖的定性定量研究，利用薄层色谱法建立了不同产地刺糖药材的质量标准，经实验发现产地为吐鲁番的刺糖药材GF2含量较高， GF2含量随药材产出时间增加而减少。本方法操作简便，斑点清晰，分离度高，重现性好，可用于刺糖中糖类化合物的快速鉴别及刺糖药材品质优劣的判断。

[1]菅丽君,常军民,李改茹.柱前衍生毛细管电泳法测定刺糖多糖的单糖组成[J]．中国新药杂志,2012,21(5):78-81.

[2]程煜凤.维药刺糖化学成分的基础研究[D].乌鲁木齐:新疆医科大学,2010.

[3]Mabel MJ,Sangeetha PT,Kalpana P,et al.Physicochemical characterization of fructooligosaccharides and evaluation of their suitability as a potential sweetener for diabetics[J].Carbohydrate Res,2008,3(1):56-59.

[4] Jackson CL,Dreaden TM,Theobald LK,et al.Pectininduces apoptosis inhuman prostate cancer cells: correlation of apoptotic function with pectin structure[J]. Glycobiology,2007,17(8):805-819.

[5]陈亚非,罗琦珊,葛亚中.低聚果糖调节机体免疫功能作用的研究进展[J].现代食品科技,2005,21(4):83-87.

[6]吴晶,李改茹,常军民,等.刺糖中多糖的提取工艺研究[J].中成药,2011,33(5):902-904.

[7]郑杰,李改茹,程煜凤,等.HPLC/ESI-MS法测定刺糖中低聚果糖的含量[J].中药新药与临床药理,2015,28(5):671-675.

[8]李继民,王彦吉,邹宁,等.薄层色谱扫描法测定复印纸中单糖的研究[J].分析试验室,2008,27(11):451-455.

[9]达丽.维药刺糖中糖类化合物的分离与鉴定[J].健康必读,2012,11(8):95-96.

(本文编辑施洋)

Determination of GF2 in Alhagi-honey by dual wavelength TLC-scanning

XIE Huan1, SHI Yang2, CHANG Junmin1

(1CollegeofPharmacy,XinjiangMedicalUniversity;2DepartmentofEditorial,JournalofXinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011)

ObjectiveTo establish the method for the determination of kestose in different time and origin of Alhagi-honey by Dual Wave length TLC-Scanning. MethodsDual Wavelength TLCS canner was selected with GF2 as standard substance. The developing solvent was glacial acetic acid-trichloromethane -95% ethanol (9∶11∶11). The color developing agent was diphenylamine-aniline-acetone-phosphoric acid (1∶1∶50∶5); λS=510 nm, λR=610 nm. ResultsThe calibration curve was liner in range of 0.642 8-15.975 2 μg for kestose (r=0.999 2). The average recovery was 102.5%, and RSD was 1.55%. The content of GF2 from different places of origin habitats in Alhagi-honeywere between 12.957 3-36.328 1 mg/g. ConclusionThe established method has a good separation effect and simple operation, so can be used for the qualitative and quantitative analysis of kestose from Alhagi-honey.

Alhagi-honey; GF2; dual wavelength TLC-Scanning

新疆医科大学创新基金(XJDCX201407); 新疆维吾尔自治区科技援疆计划(201491172)

谢睆(1994-)，女，在读本科，研究方向：药物分析。

施洋，男，硕士,编辑,研究方向：药物分析，E-mail: 47668429@qq.com。

通信作者： 常军民，男，博士，教授，博士生导师，研究方向：药物分析，E-mail: 1617265908@qq.com。

R914

A

1009-5551(2016)09-1163-04

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.09.021

2016-4-6]