外周血Septin-9基因表达变化在评估卵巢上皮癌患者预后的意义

王甲涛，王雁冰，王　敏

(1.山东省日照市妇幼保健院妇产科，山东 日照276826；2.山东省日照市人民医院，山东 日照 276826；3.中国医科大学第四医院，辽宁 沈阳110000)



外周血Septin-9基因表达变化在评估卵巢上皮癌患者预后的意义

王甲涛1，王雁冰2，王敏3

(1.山东省日照市妇幼保健院妇产科，山东 日照276826；2.山东省日照市人民医院，山东 日照 276826；3.中国医科大学第四医院，辽宁 沈阳110000)

目的探讨卵巢上皮性癌患者外周血Septin-9基因表达变化及在评估患者预后中的意义。方法选取98例卵巢癌患者、27例卵巢交界性上皮性肿瘤、25例卵巢良性上皮肿瘤和50例健康体检妇女(健康对照组)，利用实时荧光定量PCR技术检测患者外周血Septin-9基因表达，利用受试者工作特征曲线(ROC曲线)法评估患者外周血Septin-9 mRNA表达量在诊断卵巢癌中的价值，以卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量P25值作为界值，将患者分为高表达组(n=73)和低表达组(n=25)，利用Kaplan-Meier生存分析法分析患者外周血Septin-9 mRNA表达量对患者生存时间的影响。结果卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量(1.47±0.32)显著高于卵巢交界性上皮性肿瘤(1.21±0.25)、卵巢良性上皮肿瘤(1.23±0.27)和健康对照组(1.24±0.23)，差异有统计学意义(F=10.393，P<0.001)；卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量与淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05)；ROC曲线分析显示，外周血Septin-9 mRNA表达量在区别卵巢癌患者时曲线下面积0.705(95%CI：0.633～0.778)，当ROC曲线界值为1.35时，灵敏度为71.4%，特异度为62.7%；Kaplan-Meier生存分析显示，低表达组患者中位生存时间39.0个月，高表达组患者中位生存时间24.0个月，差异有统计学意义(χ2=9.636，P=0.002)。结论Septin-9基因在卵巢癌患者外周血中呈高表达，可作为早期临床诊断及判定患者预后的潜在指标。

卵巢上皮性癌；外周血；Septin-9基因；预后

[Key words]epithelial ovarian cancer; peripheral blood; Septin-9 gene; prognosis

卵巢上皮性癌(卵巢癌)作为卵巢恶性肿瘤主要病理类型，约占卵巢恶性肿瘤的86%～90%[1]，由于卵巢癌恶性程度高、侵袭转移力强，多数患者确诊时已处于晚期，虽然现有的治疗手段已取得一定疗效，但患者5年生存率依然较低，是病死率最高的妇科恶性肿瘤[2]。Septin-9作为一种肿瘤相关蛋白，具有细胞骨架GTP酶活性，在细胞分裂增殖过程中发挥重要作用[3]，研究表明，Septin-9与乳腺癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤发生及进展有关[4-5]。本研究拟利用实时荧光定量PCR技术检测卵巢癌患者外周血Sptin-9基因表达变化，分析其与患者临床病理特征之间的关系，探讨其表达水平对患者预后的影响。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2010年2月至2012年2月在日照市妇幼保健院住院治疗的卵巢癌患者98例，年龄22～74岁，平均年龄(58.3±10.2)岁，所有患者均经病理学检查确诊，均未接受放化疗治疗。根据2014年国际妇产科联盟(FIGO)分期标准：Ⅰ期11例，Ⅱ期12例，Ⅲ期63例，Ⅳ期12例；病理学类型：浆液性囊腺癌72例，其他26例(黏液性癌16例，透明细胞癌6例，子宫内膜样腺癌4例)；病理分级：34例为G1～G2，64例为G3；出现淋巴结转移28例，出现远处转移39例。所有研究对照随访至2015年2月28日，11例患者出现死亡。同期，选取卵巢交界性上皮性肿瘤27例，平均年龄(38.5±5.8)岁，卵巢良性上皮肿瘤25例，平均年龄(44.8±8.3)岁，以及健康体检妇女50例作为健康对照组，平均年龄(45.8±8.6)岁。本研究通过医院伦理委员会批准，所有研究对象均行知情同意。

1.2方法

1.2.1血标本采集及处理

所有研究对象均留取晨起空腹静脉血6mL，30min内于4℃条件下，1 500g离心力下离心15min，取上层血浆分装保存于-80℃冰箱以备检。

1.2.2利用实时荧光定量PCR技术检测患者外周血Septin-9基因表达

使用Trizol总RNA提取试剂盒(购自美国Invitrogen 公司)对血浆中总RNA进行提取，用紫外分光光度计(购自上海谱元仪器有限公司)检测RNA纯度，取A260/A280≥1.80样本完成后续实验操作。利用逆转录试剂盒(购自美国Promiga公司)将RNA逆转录为第一模板链cDNA，以cDNA为模板利用PCR试剂盒(购自宝生物工程(大连)有限公司)完成PCR。Septin-9基因序列及内参引物均由上海生工公司设计合成，引物序列分别为：Septin-9基因：上游：5'-CAGAGCG￣GCTTGGGTAAATCC-3'，下游：5'-CTCCTCAATATC￣GTGCGTGATGG-3'；β-actin引物：上游：5'-CCGGGACCTG￣ACTGACTACCTC-3'，下游：5'-TGCTGTCGCCTTCACC￣GTTC-3'。PCR反应条件：94℃ 60s，92℃ 45s，56℃ 30s，74℃ 30s，连续进行38个循环，每个样品均设置3个平行反应复孔。以内参为参照，用2-△△Ct法计算外周血Septin-9 mRNA表达量。

1.3统计学方法

2结果

2.1不同研究对象外周血Septin-9 mRNA表达量比较

卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量(1.47±0.32)，显著高于卵巢交界性上皮性肿瘤(1.21±0.25)、卵巢良性上皮肿瘤(1.23±0.27)和健康对照组(1.24±0.23)，差异有统计学意义(F=10.393，P<0.001)，而卵巢交界性上皮性肿瘤、卵巢良性上皮肿瘤和健康对照组患者外周血Septin-9 mRNA表达量无差异(F=2.163，P=0.120)。

2.2卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量与临床病理特征之间的关系

卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量与年龄、肿瘤家族史、病理类型、病理分级、病理分期无关(P>0.05)，而与淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05)，见表1。

指标例数(n)Septin-9mRNA表达量tP年龄(岁)0.0240.490 ≥55471.44±0.29 <55511.49±0.35肿瘤家族史0.0400.484 有321.46±0.30 无661.48±0.34病理类型1.2800.102 浆液性721.43±0.27 其他261.51±0.41病理分级1.3830.085 G1～G2341.45±0.31 G3641.50±0.38病理分期1.5740.062 Ⅰ～Ⅱ期231.42±0.31 Ⅲ～Ⅳ期751.49±0.36淋巴结转移3.7580.000 有281.57±0.33 无701.32±0.30远处转移5.9670.000 有391.61±0.36 无591.28±0.26

2.3外周血Septin-9 mRNA表达量在诊断卵巢癌中的价值

ROC曲线分析显示，外周血Septin-9 mRNA表达量在区别卵巢癌患者时曲线下面积0.705(95%CI：0.633～0.778)，当ROC曲线界值为1.35时，灵敏度为71.4%，特异度为62.7%，见图1。

2.4卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量对患者预后的影响

以卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量P25值1.25作为界值，将患者分为高表达组(n=73)和低表达组(n=25)，Kaplan-Meier生存分析显示，低表达组患者中位生存时间39.0个月，高表达组患者中位生存时间24.0个月，Log-Rank检验显示，两组患者生存时间差异有统计学意义(χ2=9.636，P=0.002)，见图2。

图1外周血Septin-9 mRNA表达量在诊断卵巢癌中的价值

Fig.1Value of the expression levels of Septin-9 mRNA in diagnosis of ovarian cancer

图2不同Septin-9 mRNA表达量水平的卵巢癌患者生存时间的Kaplan-Meier生存曲线

Fig.2Kaplan-Meier survival curves of the survival time of ovarian cancer patients with different expression levels of Septin-9 mRNA

3讨论

3.1 Septin-9基因在卵巢癌患者外周血中呈高表达

卵巢癌患者由于早期缺乏典型临床症状，且肿瘤易发生侵袭、转移，约超过2/3的患者临床确诊时已处于晚期，导致患者预后不佳，病死率较高[6]。目前，该肿瘤病因不明，发生机制尚未完全清楚，因此，积极寻找早期有效、敏感肿瘤标志物以早期确诊患者对改善预后具有重要意义。Septin-9基因可编码Septin-9蛋白而参与多项生物学功能，定位于人17q25.3染色体中，而该染色体区段常在散发性卵巢癌及乳腺癌发生时出现杂合性丢失[7]，有研究指出，Septin-9在多种恶性肿瘤中出现异常表达，参与调控肿瘤发生过程[8]。亦有研究表明，Septin-9在结肠癌患者血浆中表达上调，可作用患者早期诊断的标志物[9]。mRNA作为具有多种生物学功能的小分子RNA，可稳定存在于外周血中，不易受外界条件的干扰，已被用于多种恶性肿瘤早期诊断指标[10]。本研究利用实时荧光定量PCR技术检测卵巢癌患者外周血中Septin-9基因表达，结果显示，卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量显著高于卵巢交界性上皮性肿瘤、卵巢良性上皮肿瘤和健康对照组，说明Septin-9在卵巢癌患者外周血中表达升高，可能是潜在的卵巢癌血浆肿瘤标志物。

3.2外周血中Septin-9基因表达可作为潜在的卵巢癌血浆肿瘤诊断标志物

新近的研究表明，Septin-9基因可能作为潜在的原癌基因而参与肿瘤发生及进展过程[11]。本研究结果显示，卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量与淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05)，发生淋巴结转移和远处转移的卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量升高，提示Septin-9基因可能参与了卵巢癌侵袭、转移过程，与吕讷男等[12]研究结论相同。ROC曲线分析显示，外周血Septin-9 mRNA表达量在区别卵巢癌患者时曲线下面积0.705(95%CI：0.633～0.778)，当ROC曲线界值为1.35时，灵敏度为71.4%，特异度为62.7%，提示外周血Septin-9 mRNA表达量可作为潜在的卵巢癌血浆肿瘤诊断标志物。

3.3外周血中Septin-9基因表达可作为预测卵巢癌患者预后的指标

在分析Septin-9基因表达对卵巢癌患者预后的影响时，以卵巢癌患者外周血Septin-9 mRNA表达量P25值1.25作为界值，将患者分为高表达组和低表达组，结果显示，低表达组患者中位生存时间长于高表达组，说明Septin-9基因在卵巢癌患者外周血表达水平与患者预后密切相关，可作为预测患者预后的参考指标。

综上所述，卵巢癌患者外周血中Septin-9基因呈高表达，与卵巢癌淋巴结转移和远处转移有关，可作为早期临床诊断及判定患者预后的潜在指标。

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[12]吕讷男, 姚洪文, 肖汀, 等. 卵巢上皮性癌患者外周血中septin-9和clusterin蛋白的表达及其意义[J].中华妇产科杂志, 2015, 50(9):679-684.

[专业责任编辑： 张冠军]

Significance of expression changes of Septin-9 gene in peripheral blood in assessing prognosis of patients with epithelial ovarian cancer

WANG Jia-tao1, WANG Yan-bing2, WANG Min3

(1.Department of Obstetrics and Gynecology, Child Health Hospital of Rizhao City, Shandong Rizhao 276826, China;2. People’s Hospital of Rizhao City, Shandong Rizhao 276826, China;3. The Fourth Affliated Hospital of China Medical University, Liaoning Shenyang 110000, China)

Objective To investigate the expression changes of Septin-9 gene in peripheral blood of patients with epithelial ovarian cancer and their significance in assessing prognosis. Methods Ninety-eight cases of ovarian cancer, 27 cases of borderline ovarian tumors, 25 cases of benign epithelial ovarian cancer and 50 healthy women (healthy control group) were selected. The expressions of Septin-9 gene in peripheral blood of patients were detected by using real-time fluorescence quantitative PCR. The value of the expressions of Septin-9 mRNA in peripheral blood of patients in the diagnosis of ovarian cancer was analyzed by using receiver operating characteristic curve (ROC curve). With the P25 value of the expression level of Septin-9 mRNA in peripheral blood of patients with ovarian cancer being the dividing value, the patients were divided into high expression group (n=73) and low expression group (n=25). The effects of the expression of Septin-9 mRNA in peripheral blood of patients on their survival time were analyzed with Kaplan-Meier survival method. Results The expression level of Septin-9 mRNA in peripheral blood of patients with ovarian cancer was 1.47±0.32,It was significantly higher than that of patients with borderline ovarian epithelial tumors, those with benign epithelial ovarian tumor and the healthy control group, which was 1.21±0.25, 1.23±0.27 and 1.24±0.23, respectively. The differences were statistically significant (F=10.939,P<0.001). The expression level of Septin-9 mRNA in peripheral blood of patients with ovarian cancer was related to lymph node metastasis and distant metastasis (P<0.05). The ROC curve analysis showed that the area under the curve for the expression level of Septin-9 mRNA in peripheral blood in distinguishing ovarian cancer was 0.705 (95%CI: 0.633-0.778). When the dividing value of the ROC curve was 1.35, the sensitivity was 71.4% and the specificity was 62.7%. Kaplan-Meier survival analysis showed that the median survival time was 39.0 months in the low expression group and 24.0 month in the high expression group, and the difference was statistically significant (χ2=9.636,P=0.002). Conclusion Septin-9 gene is highly expressed in peripheral blood of patients with ovarian cancer. It might be used as a potential indicator for early clinical diagnosis and determining the prognosis.

2016-03-02

辽宁省自然科学基金资助项目2013021040

王甲涛(1975-)，女，主治医师，主要从事妇科肿瘤的临床规范化治疗工作。

王敏,副主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.08.009

R737.31

A

1673-5293(2016)08-0930-03