HPLC法测定丹酚酸B中己内酰胺残留

陈鸿楠　邓　颖　郭秀娟　华国栋（北京中医药大学东方医院药学部　北京　100078）

HPLC法测定丹酚酸B中己内酰胺残留

陈鸿楠邓颖郭秀娟华国栋*（北京中医药大学东方医院药学部北京100078）

目的：建立丹酚酸B原料药中己内酰胺残留的测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定。实验仪器为：安捷伦1200型高效液相色谱仪，Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）。色谱条件：乙腈∶水=11∶89（v/v），等度洗脱；检测波长210nm；流速1.0mL·min-1；柱温25℃；进样体积10μL。结果：己内酰胺同其他物质可以达到基线分离。测得己内酰胺在0.00123～0.0502g·L-1线性关系良好。己内酰胺平均回收率为100.28%，RSD为1.63%（n=9）。结论：该法操作简便，重现性好，结果准确可靠，可以用于丹酚酸B原料药中残留己内酰胺的测定。为丹酚酸B质量控制提供了可靠的数据。

丹酚酸B原料药 己内酰胺残留 高效液相色谱法

丹酚酸B是唇形科植物丹参中的主要成分，具有对心肌缺血-再灌注损伤的保护、对心脏微血管内皮细胞的延迟保护、对动脉粥样硬化及血栓防治功效、对脑缺血损伤的保护和抗衰老、抗肿瘤等多种药理活性［1～2］。在制备丹酚酸B过程中主要使用了柱层析的方法，使用了聚酰胺填料进行纯化。聚酰胺在聚合时仍有大量单体未参与反应，因此在柱层析过程中会有大量己内酰胺单体被洗脱进而进入产品，原料药中可能有己内酰胺残留。己内酰胺对人身体有不良作用［3］，因此在使用时需要控制己内酰胺残留量。本文参考有关文献［4］建立了高效液相色谱法对3批丹酚酸B存在的己内酰胺残留进行测定，现报道如下。

1　仪器与试药

1200型高效液相色谱仪，配有DAD检测器、四元泵、自动进样器，美国安捷伦公司；Zorbax SB-C18色谱柱（250mm× 4.6mm，5μm），美国安捷伦公司；Metter Toledo xS5分析天平。丹酚酸B（原料药，纯度大于98%，批号20130819、20131025、20131216，由北京康悦药业有限公司提供）；乙腈、甲醇均为色谱纯，纯化水使用Milli-Q（美国Millipore公司）制备；己内酰胺为分析纯，纯度为99%，购自国药集团化学试剂有限公司。

2　方法与结果

2.1色谱条件：乙腈∶水=11∶89（v/v），等度洗脱；检测波长210nm；流速1.0mL·min-1；柱温25℃；进样体积10μL。

2.2对照溶液的配制

对照品储备液的配制：精密称定5.02mg己内酰胺，用甲醇溶解并定容至10mL，得己内酰胺对照品储备液。

对照品工作液的配制：精密移取1mL储备液定容至10mL即得含有己内酰胺50.2μg·mL-1的对照品工作溶液。

2.3供试品溶液的配制：精密称定50.08mg丹酚酸B，用甲醇溶解并定容至10mL即得含有丹酚酸B 5.01g·L-1的溶液。

2.4系统适用性试验：将“2.2”中对照品工作溶液和“2.3”中供试品溶液按“2.1”中色谱条件进行测定，记录色谱图，己内酰胺的分离度大于1.5，理论塔板数均大于2000。对照品和供试品色谱图见图1。

2.5线性：分别取“2.2”中储备溶液1、0.5、0.25、0.1、0.05、0.025mL，分别用甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中，按“2.1”中色谱条件进行测定。以己内酰胺的峰面积为纵坐标（Y），浓度为横坐标（x），进行线性回归。得到己内酰胺在1.23～50.2μg·mL-1的线性方程为：Y=10.3630x-0.1967（R2=0.9999）。

结果表明，在1.23～50.2μg·mL-1己内酰胺峰面积与浓度均呈良好的线性关系。

2.6回收率：精密称取批号为20130819的供试品50mg置于10mL容量瓶中，再从“2.2”中对照品储备液中分别精密量取0.8、1.0、1.2mL至容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得低中高三个浓度的加样回收测定溶液，按“2.1”中色谱条件每个浓度平行测定3次，测得己内酰胺回收率为100.28%，RSD为1.63% （n=9）。

2.7精密度：取“2.2”中对照品工作溶液，按“2.1”中色谱条件重复进样测定6次，记录色谱图，得到己内酰胺峰面积RSD为0.29%。

2.8重复性：精密称取批号为20130819的供试品50mg，按“2.3”中方法进行处理，共处理6份。分别按“2.1”中色谱条件进行测定，记录色谱图，使用“2.2”中工作溶液作为外标定量。测得己内酰胺的平均含量为0.11%，RSD为2.70%（n=6）。

2.9检测限和定量限：精密吸取“2.5”中含有己内酰胺1.23μg· mL-1的溶液用甲醇逐级稀释制成测定溶液。分别取各个溶液1mL，按“2.1”中条件检测。

当信噪比为10∶1时样品浓度为定量限，此时己内酰胺浓度为0.41μg·mL-1。当信噪比为3∶1时样品浓度为检测限，此时己内酰胺浓度为0.14μg·mL-1。

2.10样品测定：取3批样品各50mg，精密称定，按“2.3”中供试品溶液制备项下方法进行处理，在“2.1”中色谱条件下进行测定，按照外标法计算各溶剂的含量，得批号为20130819、20131025、20131216 3批样品中己内酰胺的含量分别为0.11%、0.08%、0.12%（n=3）。

3　讨　论

3.1液相色谱条件的选择和优化：经过筛选发现，丹酚酸B和己内酰胺在甲醇中均具有良好的溶解性，且丹酚酸B在甲醇中溶解速度较快，因此选择甲醇作为溶剂。

前期分别考察了检测波长分别为203nm、210nm、254nm下测定结果。发现在波长为210nm下己内酰胺具有最大吸收波长，信噪比最高，检测效果最好。而在203nm下己内酰胺信噪比较低，在254nm己内酰胺吸收太弱，均不利于测定。因此选择254nm作为检测波长。

本品仅需要检测己内酰胺残留，己内酰胺同丹酚酸B极性差异较大，故选用等度洗脱法。经过条件和文献查阅摸索，确定洗脱条件为乙腈∶水=11∶89（v/v）。

［1］杜冠华，张均田.丹参现代研究概况与进展（续一）［J］.医药导报，2004，23（6）：0355-0361.

［2］李认书，李永强.丹酚酸的研究进展［J］.时珍国医国药，2003，14 （6）：371-373.

［3］刘君动，叶正良，李德坤，等.丹参多酚酸中己内酰胺和低聚物的残留测定［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（5）：62-65.

［4］张琳，王民生.低浓度己内酰胺对作业工人健康影响的调查［J］.化工劳动保护（工业卫生与职业病分册），1998，19（3）：98-101.

Determination of Residual Caprolactam in Salvianolic Acid B Bulk Drug by HPLC

Chen Hongnan Deng Ying Guo xiujuan Hua Guodong*（Dept.of Pharmacy，Dongfang Hospital of Beijing University of TCM，Beijing 100078，China）

Objective：To establish a method to determine residual caprolactam in Salvianolic acid B bulk drug.Methods：The HPLC was performed on a Agilent 1200 chromatographic instrument with Zorbax SB-C18column.The chromatographic condition was described as below：the mobile phase was acetonitrile-water=11∶89（v/v）at 1.0mL·min-1，the data was recorded at 210nm，the column was maintained at 25℃，the inject volume was 10μL.Result：Caprolactam can be separated completely with good linear relationship between 0.00123～0.0502g·L-1.The average recovery of caprolactam was 100.28%with RSD=1.63% （n=9）.Conclusion：This method is simple，reproducible and accurate enough for determination of residual caprolactam in salvianolic acid B bulk drug.

Salvianolic acid B bulk drug Residual caprolactam HPLC

R284.1

A

1672-8351（2016）02-0018-02