利肺片中五味子醇甲和五味子甲素含量测定方法研究

胡东梅　张　瑞（马鞍山市食品药品检验中心　马鞍山　243000）

利肺片中五味子醇甲和五味子甲素含量测定方法研究

胡东梅张瑞（马鞍山市食品药品检验中心马鞍山243000）

目的：建立同时测定利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法。方法：样品用甲醇超声提取，过滤，取续滤液，用RP-HPLC直接测定，十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为甲醇∶水（梯度洗脱），检测波长254nm。结果：五味子醇甲和五味子甲素分别为1.636～16.36μg（r=1.000）和1.636～16.36μg（r=0.9990）范围内线性关系良好。平均加样回收率（n=6）分别为97.6%～101.8%、98.9%～101.5%，RSD分别为1.6%、1.0%。结论：该方法快速简便，可以用于利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的含量测定。

HPLC五味子醇甲 五味子甲素 利肺片

利肺片收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十一册（WS3-B-2152-96），由百部、百合、五味子、枇杷叶、白及、牡蛎、甘草、冬虫夏草和蛤蚧粉组成，具有驱痨补肺、镇咳祛痰的作用，用于治疗咳嗽咯痰、咯血哮喘、慢性气管炎等症。该标准中只有性状和片剂通则检查其质量，没有含量测定方法，某些含五味子的中成药中五味子醇甲和五味子甲素的含量测定方法已有报道，利肺片中有效成分含量测定方法未见报道，《中国药典》2015年版一部中收载的五味子的药材及饮片中，含量测定项下仅测五味子醇甲，文献报道五味子有效成分主要含有联苯环辛烯类物质，有五味子甲素、乙素、丙素，醇甲等，本文建立了HPLC法测定利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的含量方法。

1　仪器和试药

高效液相色谱仪（德国戴安）配DAD检测器；AL-104电子天平（梅特勒-托利多上海公司）；BP211D电子天平（德国赛多利斯公司）。五味子醇甲（批号：110857-201513）五味子甲素对照品（批号：110764-201513）购自中国食品药品检定研究院。利肺片为市售品（批号：20140801、20150201、20150302）。所用试剂均为分析纯，水为纯化水，液相用水为去离子水，甲醇为色谱纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱:德国戴安公司，十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱AcciaimTM120（150mm×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-水（梯度洗脱程序见表1）。流速：1mL/min，检测波长：254nm，进样量：20μL，柱温：35℃。

表1　梯度洗脱程序

2.2样品溶液的制备：取利肺片约10g，研细，混匀。精密称取每种批号的供试品各1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理（功率250w，频率20kHz）30min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀。过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3对照品溶液的制备：精密称取五味子醇甲对照品16.36mg和五味子甲素对照品17.52mg，分别置于50mL容量瓶中用甲醇稀释并定容至刻度，分别取5mL置50mL容量瓶中用甲醇定容至刻度作为对照品储备液，分别取两种溶液各2mL置10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度即得混合对照品溶液。

2.4阴性样品溶液的制备：根据利肺片的处方制备不含五味子药材的阴性样品，照供试品溶液的制备项下同法操作，即得。

3　结　果

3.1系统适应性试验：分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液，自动进样20μL，记录色谱图，可见对照品溶液两个峰能够完全分离，阴性样品溶液在该处无吸收峰见图1。

3.2精密度及稳定性试验：精密吸取混合对照品溶液20μL连续进样6次，记录色谱图，五味子醇甲、五味子甲素的峰面积相对标准偏差（RSD）分别为0.1%、0.3%。

精密吸取混合对照品溶液在0、2、4、8、12、24h进样，五味子醇甲、五味子甲素的峰面积RSD分别为0.2%、0.4%。

3.3线性范围与检出限：取“2.2”项下对照品储备液，精密吸取0.5、1、1.5、2、3、5mL分别置于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μL进样，记录色谱图，以色谱图峰面积（Y）对相应对照品的含量（x）进行线性回归，结果显示，五味子醇甲在1.636～16.36μg，五味子甲素在1.752～17.52μg范围内呈良好的线性关系，五味子醇甲的回归方程为Y=0.637x+ 0.010，r=1.000，检出限为0.02μg；五味子甲素的回归方程为Y= 0.488x-0.066，r=0.9990，检出限为0.01μg。3.4回收率试验：准确称取已知含量的样品粉末6份，每份约0.5g，分别加入五味子醇甲和五味子甲素对照品储备液1mL，置10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度。过滤，精密吸取20μL进样，记录色谱图，加标回收率结果见表2。

表2　五味子醇甲和五味子甲素加标回收率（n=6）

3.5样品测定：精密称取不同厂家的三批样品，照“2.2”项下制备样品溶液，精密吸取20μL进样，记录色谱图，结果见表3。

表3　不同厂家的三批样品含量测定结果

4　试验条件的选择

4.1测定波长的选择：经高效液相DAD光谱扫描，五味子醇甲、五味子甲素的最大吸收波长分别为254nm和220nm，220nm波长处溶剂吸收强，干扰大，故选择254nm作为测定波长。

4.2提取溶剂及条件的选择：分别对提取溶剂（甲醇、乙醇）和提取方式（超声和回流）及溶剂比例（100%甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇）进行考察，结果发现100%甲醇提取效率最高，以甲醇超声30min和回流提取30min，结果发现二者无较大差异，故选择100%甲醇超声30min，简便快速。

4.3流动相的选择：首先采用流动相为甲醇-水（65∶35）等度洗脱，发现五味子甲素出峰时间太长（约30min），采用流动相为甲醇-水（75∶25），发现五味子醇甲出峰时间太短（约3min），5min之前的杂质峰太大，干扰大，选择梯度洗脱，五味子醇甲的保留时间为6min，五味子甲素的保留时间为17min，无干扰，分离度良好，故选择梯度洗脱。

5　讨论

作者采用高效液相色谱法建立了同时测定利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的方法。经过方法学验证，建立的定量分析方法简便、准确、重复性好，为全面评价利肺片的质量提供了依据。由于3种批号的样品来自3个厂家，2种活性成分含量存在较大的差异，标准的处方中五味子用70%乙醇提取，提取效率低，没有完全将活性成分提出，导致制剂中含量低。建议优化处方工艺，提高提取效率。

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R927.2

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1672-8351（2016）02-0020-02