决明子破壁饮片对小肠推进及急性毒性的研究

程翔燕杨泽锐邓　雯成金乐*黄芝瑛（　广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心，岭南中药资源教育部重点实验室，广州　50006；　中山市中智药业集团有限公司，中山　5847；　中山大学药学院，广州　50006）

决明子破壁饮片对小肠推进及急性毒性的研究

程翔燕1杨泽锐1邓雯2成金乐2*黄芝瑛3
（1广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心，岭南中药资源教育部重点实验室，广州510006；2中山市中智药业集团有限公司，中山528437；3中山大学药学院，广州510006）

目的 研究决明子破壁饮片对小鼠小肠的推进作用和对小鼠的急性毒性作用。方法 通过考察碳末在小鼠小肠内的推进率，评价决明子破壁饮片对小肠的推进作用；采用最大给药量法评价决明子破壁饮片的毒性。结果 临床等效剂量的决明子破壁饮片和常规饮片均可明显促进小鼠小肠对碳粉的推进（P＜0.05），常规饮片的临床等效剂量约相当于1/2破壁饮片剂量的效果；决明子破壁饮片对小鼠无明显急性毒性反应。结论 决明子破壁饮片具有促进小肠推进的作用且无急性毒性反应。关键词：决明子；破壁饮片；小肠推进作用；急性毒性；中药药理

决明子为豆科一年生草本植物决明（Cassia obtusifolia）或小决明（Cassia tora）的干燥成熟种子。其功能主要为清肝，明目，通便，常用于头痛眩晕，目赤昏花，大便秘结［1］。本实验是通过小鼠小肠推进作用评价决明子破壁饮片和常规饮片对胃肠蠕动的影响，为决明子的合理开发应用提供新的途径和依据。

1　材料与方法

1.1动物 ①小肠推进作用实验选用SPF级昆明种小鼠，体重18～22 g，无性别之分，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号为：SCXK（粤）2008-0020。②急性毒性实验选用SPF级昆明小鼠，雌雄各半。雌性：18.1～21.7 g；雄性，18.5～23.5 g，由中山大学实验动物中心提供，实验动物质量监测合格证号为：粤监证字2008A020（广东省实验动物监测所签发）；实验动物质量合格证号：№0040568。

1.2药品与试剂 ①小肠推进作用实验受试药：决明子破壁饮片（制成1 g/ml浓缩液）、常规饮片（制成1 g/ml浓缩液）均由中山市中智药业集团有限公司提供，生产批号分别为：090901-3和090901-4。阿拉伯胶 （广州威佳科技有限公司）；活性炭 （广州威佳科技有限公司）。②急性毒性实验受试药：决明子破壁饮片（制成2.5 g/ml浓缩液）、常规饮片（制成2.5 g/ml浓缩液）均由中山市中智药业集团有限公司提供，生产批号均为：20090901。

1.3实验器材 电子天平（PL202-S），made by mettlertoledo group；尺子等。

1.4小鼠小肠推进试验

1.4.1剂量设置 通过体表面积折算法，对小肠推进作用实验剂量设计如下：决明子常规饮片临床等效剂量为：2.5 g/kg；决明子破壁饮片剂量分别为2.5 g/kg；1.25 g/kg；0.63 g/kg；0.31 g/kg。

1.4.2方法 取体重18～22 g的SPF级昆明小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，分别为：正常对照组（给予生理盐水），常规饮片临床等效剂量组，破壁饮片临床等效剂量组、破壁饮片1/2临床等效剂量组、破壁饮片1/4临床等效剂量组、破壁饮片1/8临床等效剂量组。各组按0.2 ml/10 g的体积灌胃给药，每天1次，连续3天，末次给药前12 h禁食，末次给药后30 min，各自均灌碳末混悬液（阿拉伯胶10%、活性炭5%）0.2 ml/只，20 min后脱颈椎处死，剖开腹腔并快速取出整个胃肠道于干净玻璃板上，小心剥离，铺直后测量幽门至碳末前沿的距离及幽门至回盲部全长，以幽门至碳末前沿的距离占幽门至回盲部全长的百分率为碳末推进的百分率［2-6］。

1.5急性毒性试验 取小鼠30只，雌雄各半，均分为3组：空白对照组、决明子常规饮片组 （生药量100 g/ kg）、决明子破壁饮片组 （生药量100 g/kg）。给药前禁食14～16 h，给药后禁食4 h，不禁水。实验时单次经口给药，给药容积为40 ml/kg，其中空白对照组给予等容量的蒸馏水。给药后立即观察动物的反应情况，并持续观察4小时，以后每天观察1次，连续观察7天。观察内容包括动物体重、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物等变化，中毒症状观察内容参照《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》中附录Ⅱ。记录动物的死亡情况、中毒症状及中毒反应的起始时间、严重程度、持续时间等。分别在给药前（D0）、给药后第3天（D3）、给药后第5天（D5）称量动物体重［7-9］。

1.6统计学处理 所有实验数据均以表示。计量数据采用SPSS统计分析软件进行方差分析和组间检验（T-test）。

2　结果

2.1决明子破壁饮片对小鼠小肠的推进作用与正常对照组比较，破壁饮片临床等效剂量组可明显促进小鼠小肠碳粉推进（P＜0.05）。破壁饮片1/2临床等效剂量组和常规饮片临床等效剂量组均有一定促进小鼠小肠碳末推进的作用，但与对照组比较无明显统计学差异，其效果相接近。见表1。

表1　对正常小鼠小肠推进的影响（第一批结果）（±s，n=10）

表1　对正常小鼠小肠推进的影响（第一批结果）（±s，n=10）

注：与对照组比较：*P＜0.05**P＜0.01

组别　剂量（g/kg）　小肠长度（cm）　炭黑长度（cm）正常对照组常规饮片组破壁等效剂量破壁1/2剂量破壁1/4剂量破壁1/8剂量-2.5 2.5 1.25 0.62 0.31 44.04±4.63 48.38±2.33 47.73±3.62 49.71±2.80**45.47±5.98 48.20±4.86 25.07±2.62 30.36±5.96*32.02±3.53**30.64±5.50**27.93±4.81 28.54±5.62炭末推进率（%）57.39±7.56 62.56±10.59 67.36±8.43*61.76±11.47 61.43±6.25 59.92±14.06

与正常对照组比较，常规饮片临床等效剂量组以及破壁临床等效剂量均能明显促进小鼠小肠碳粉推进（P＜0.05）。破壁饮片1/2临床等效剂量组的效果接近于常规饮片临床剂量组的效果。见表2。

表2　对正常小鼠小肠推进的影响（第二批结果）　（±s，n=8）

表2　对正常小鼠小肠推进的影响（第二批结果）　（±s，n=8）

注：与对照组比较：*P＜0.05**P＜0.01

组别　剂量（g/kg）　小肠长度（cm）　炭黑长度（cm）正常对照组常规饮片组破壁等效剂量破壁1/2等效剂量-2.5 1.25 0.63 22.55±1.97 25.76±4.70 25.89±3.81*22.99±4.63 48.6±3.07 46.19±3.97 45.30±3.99 44.18±4.66*炭末推进率（%）46.54±4.85 55.81±9.54*57.53±4.01*52.33±11.11

与正常对照组比较，破壁临床等效剂量组、破壁饮片1/2临床等效剂量组和常规饮片临床等效剂量组均有一定促进小鼠小肠碳粉推进的作用，但与对照组比较无明显统计学差异。破壁饮片1/2临床等效剂量组效果接近于常规饮片临床等效剂量组的效果。见表3。

表3　对正常小鼠小肠推进的影响（第三批结果）　（±s，n=8）

表3　对正常小鼠小肠推进的影响（第三批结果）　（±s，n=8）

注：与对照组比较：*P＜0.05**P＜0.01

组别　剂量（g/kg）　小肠长度（cm）　炭黑长度（cm）正常对照组常规饮片组破壁等效剂量破壁1/2等效剂量-2.5 1.25 0.63 25.30±1.98 29.38±4.68 31.27±5.71*29.94±5.53 45.18±4.22 47.00±3.76 46.79±1.41 49.38±4.25炭末推进率（%）55.79±8.38 62.25±6.56 66.76±11.40 60.50±9.35

2.2急性毒性实验 ①给药后4 h内动物反应情况及给药后一周一般状况观察结果：空白对照组动物给予蒸馏水后4 h内及一周内未见明显异常反应。决明子常规饮片组给药后，动物均出现活动减少、呼吸加深和腹部收缩明显的现象，其中4例（4/10）动物还出现行动迟缓，随后1例（♀4）动物还出现自主活动增多的现象，40 min内动物恢复正常。其后一周内未见明显异常反应、所有动物未出现死亡状况。决明子破壁饮片组给药后，动物均出现呼吸加深、腹部收缩明显的现象，其中7例（7/ 10）动物出现活动减少，6例（6/10）动物出现行动迟缓的现象。30分钟内恢复正常。其后一周内动物未见明显异常现象、所有动物未出现死亡状况。

②动物体重情况：决明子常规饮片组雌性动物给药后第3天体重和第3天、第5天体重增重与空白对照组比较，差异有显著性意义；与决明子破壁饮片组比较，差异无显著性意义。其余各组动物体重呈正常增长现象，详见表4。

表4　小鼠体重增长情况　（g，±sD，n=10）

表4　小鼠体重增长情况　（g，±sD，n=10）

注：1、*P＜0.05，与空白对照组比较，差异有显著性意义。2、破壁饮片组与常规饮片组比较，差异无显著性意义

组别　D0　D3　　△（D3-D0）D5♀♂空白对照决明子常规饮片决明子破壁饮片空白对照决明子常规饮片决明子破壁饮片19.86±1.28 19.90±1.05 19.77±1.15 20.06±1.38 20.53±2.04 20.22±1.63 23.33±0.89 21.88±0.85*22.20±1.56 21.64±2.61 23.11±2.67 21.81±1.69 3.47±0.91 1.98±0.80*2.43±1.00 1.59±1.70 2.58±1.02 1.59±1.51 23.96±1.08 22.54±1.28 23.39±1.37 22.16±3.22 24.47±2.63 23.15±1.81△（D5-D0）4.10±1.01 2.65±0.93*3.63±0.33 2.10±2.72 3.94±0.79 2.94±1.72

3　讨论

临床等效剂量的决明子破壁饮片或常规饮片均可明显促进小鼠小肠对碳末的推进作用，等剂量相比，破壁饮片优于常规饮片，常规饮片临床等效剂量约相当于破壁饮片1/2临床等效剂量的效果。由此可见，破壁饮片具有一定的优越性，可节约大量药材。且决明子破壁饮片组和常规饮片组对昆明种小鼠并无发生急性毒性反应。决明子破壁饮片是通过现代高速气流粉碎技术，将传统中药饮片加工成D90＜45 μm的微粉，经专利成型技术，即不添加任何赋形剂，利用药材自身的黏性制成30～100目的均匀干燥颗粒状饮片，该项技术既保留了常规饮片的全成分属性，且大大提高了有效成分的利用率。破壁饮片无需煎煮，由于其打破了植物细胞壁，有效成分在水中易崩解分散，提高了药材的生物利用度。方邦江等［10］认为破壁饮片有几个特点：利于保留生物活性成分，提高了药材溶出率；减少了因人体吸收差异而形成的药效差异；采用超细微粉技术得到的生药制剂与用传统粉碎工艺得到的生物制剂相比，可明显提高药效；节省了药材资源，便于应用。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：135.

［2］徐叔云.药理实验方法学［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2002.

［3］陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社［M］.1993：335、861.

［4］冯所安.便秘通通便作用的药效学研究［J］.中草药，1997，28（5）：290.

［5］黄世福.黄厚排气颗粒对胃肠运动调节作用的实验研究［J］.中国中医药科技，2005，12（6）：347-349.

［6］肖振球，何国交，钟正贤.安肠胶囊的药效学研究［J］.中国实验方剂学杂志，2005，11（2）：63-66.

［7］国家食品药品监督管理局.药物非临床研究质量管理规范（局令第2号）［S］. 2003年8月6日颁布.

［8］《中药、天然药物急性毒性试验技术指导原则》课题研究组.中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则［S］.2005年3月.

［9］袁伯俊，王治乔.新药临床前安全性评价与实践［M］.北京：军事医学科学出版社，1997：32.

［10］方邦江，陈浩，郭全曹.中药超微粉的优势及应用前景［J］.中国中医药现代远程教育，2010，8（17）：208-209.

Study on the Effect of the Ultrafine Granular Powder of Semen Cassiae on the Intestinal Transit and Acute Toxicity Test

CHENG Xiangyan1，YANG Zerui1，DENG Wen2，CHENG Jinle2，HUANG Zhiying3
（1.Research Center of Chinese Medicinal Resource Science and Engineering，Guangzhou University of Chinese Medicine，Key Laboratory of Chinese Medicine Resources from Lingnan（Ministry of Education），Guangzhou，510006，China；2.ZEUS Medicine Group，Guangdong Province，Zhongshan 528437，China；3.School of Pharmaceutical Sciences，Sun Yat-sen University，Guangzhou 510006，China）

Objective To study the effect of the ultrafine granular powder of semen cassiae on the intestinal transit and acute toxicity test in mice.Methods The effect of the ultrafine granular powder of semen cassiae on the intestinal transit was evaluated by the small intestinal carbon transit rate，whose toxicity was detected by maximum dosage test.Results The clinical equivalent dose of the ultrafine granular powder of semen cassiae and its conventional decoction pieces showed a prominent promotion effect on intestinal transit（P＜0.05）.Half dose of the ultrafine granular powder worked equally to its conventional decoction pieces.And no acute toxicity in mice occurred.Conclusion The ultrafine granular powder of semen cassiae exhibits a beneficial effect on intestinal transit with no acute toxicity.

semen cassiae；ultrafine granular powder；the effect on intestinal transit；acute toxicity；pharmacology of Chinese medicine

科研进展 Scientific Research Progress

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.15.064

1672-2779（2016）-15-0144-02

gdcjl9@126.com

（本文编辑：李海燕 本文校对：梁燕玲2016-04-26）