栗属植物总苞鞣质含量的测定*

张小慧　刘　霞　牛艳艳　席啸虎



【方药纵横】

栗属植物总苞鞣质含量的测定*

张小慧1刘霞1牛艳艳2席啸虎1

目的测定栗属植物干燥总苞的鞣质含量。方法收集不同产地的栗属植物总苞如板栗壳、茅栗壳、锥栗壳、日本栗壳，根据《中国药典》附录ⅩA磷钼钨酸-干酪素法测定鞣质含量，采用紫外-可见分光光度法，在760nm波长处测定总酚与不被吸附的多酚的吸光度。结果板栗壳和茅栗壳鞣质含量较高，日本栗壳及锥栗壳鞣质含量较低。结论建立的鞣质含量测定方法准确，可为栗属资源总苞利用提供依据。

栗属；板栗壳；鞣质；含量测定

栗属(Castanea Miller)是壳斗科(Fagaceae)中较小的属，全世界有7种，广泛分布于北半球温带地区[1]。其中，亚洲分布有4种：板栗(C.mollissima Bl.)、茅栗(C.seguinii Dode)和锥栗(C.henryi Rehd.& Wils.)分布在中国大陆，日本栗(C.crenata Sieb. &Cuce)分布在日本和朝鲜半岛，在中国有引种。我国栗属资源丰富，其果实及加工品享誉海内外，而留下的带刺总苞却成废弃物，未有效利用。古籍记载栗壳治消渴、痰火头疬、火核、丹毒红肿及小儿百日咳，《中药辞海》记载，栗属植物总苞有2种能入药[2]，做为药材使用的主要为板栗总苞(即板栗壳)。1977年版《中国药典》首次收载板栗壳，并记载其性味归经为：甘、涩，平，归肺经。板栗壳化学成分主要有黄酮(或其苷类)、鞣质、糖、多糖(或苷类)、有机酸等，其中黄酮类成分如棕色素有抗氧化和清除自由基作用[3]。板栗壳还具有降血糖功能[4]，改善高脂糖尿病模型大鼠的糖脂代谢紊乱[5]，有抗菌活性[6]，这些活性多认为与鞣质类物质有关，有文献报道从板栗壳分离出的鞣质为没食子酸及其乙酯[7]，而鞣质一般认为与“涩”味相关，符合中医学对板栗壳的性味归经。因鞣质具有多方面生物活性，如抗肿瘤、止血、止泻、治烧伤等，鞣质具有多方面的重要活性，而栗属植物总苞的鞣质含量未见报道，鉴于此，笔者收集了不同产地的栗属植物总苞，按照2010年版《中国药典》一部附录ⅩB方法测定其鞣质含量，为进一步研究利用栗属资源总苞提供依据。

1　材料

1.1药材板栗壳、茅栗壳、锥栗壳、日本栗壳各2批，分别为秋季果实成熟时采摘。本文样品的收集根据栗壳总苞基底疤痕数目：板栗壳斗多纵向裂开成2～4瓣，基底有2～3个坚果脱落后的疤痕；茅栗壳斗较小，基底有2～3个坚果脱落后的疤痕；锥栗壳基底有1个坚果脱落后的疤痕；日本栗壳总苞有3～7个坚果脱落后的疤痕，日本栗壳较板栗壳大，其横切面厚度较板栗壳小。样品信息见表1。

1.2试剂没食子酸：中国药品生物制品检定所，批号：0831-9501；干酪素：中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号：98032；碳酸钠、钨酸钠、 钼酸钠、硫酸锂、盐酸、磷酸、溴均为分析纯。

1.3仪器752N紫外可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司。

2　方法与结果

2.1试剂配制①磷钼钨酸试液：取钨酸钠100 g，钼酸钠25 g，加水700ml使溶解，加盐酸100ml、磷酸50ml，加热回流10小时，放冷，再加硫酸锂150 g，水50ml和溴0.2ml，煮沸除去残留的溴(约15分钟)，冷却，加水稀释至1000ml，滤过，即得。本液不得显绿色(如放置后变为绿色，可加溴0.2ml，煮沸除去多余的溴即可)。②10% ( 质量浓度) Na2CO3溶液：取无水碳酸钠10.5 g，加水使溶解成100ml，即得。

2.2没食子酸对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品50mg，置100ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含没食子酸0.05mg)

2.3标准曲线的制备分别精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，分别置25 ml 棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1ml，再分别加水11.5、11.0、10.0、9.0、8.0、7.0 ml，用10%(质量浓度)Na2CO3溶液稀释至刻度，摇匀，放置30 min。以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在760 nm波长处测定其吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，没食子酸质量浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=120.87C+ 0.0625，r=0.998。

2.4供试品溶液的制备取栗壳粉末1 g，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加水60ml，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置使沉淀，滤过，弃去初滤液30ml，精密量取续滤液20ml，置100ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5样品测定法2批板栗壳、2批茅栗壳，2批日本栗壳，2批锥栗壳粉末，按“2.4”项下方法分别制备供试品溶液，并测定总酚和不被吸附的多酚质量，以计算鞣质质量分数。每个样品平行处理两次，结果取平均值。

2.6总酚的测定精密量取供试品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1ml”起，加水10ml，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中没食子酸的质量(mg)，计算即得。

表1　栗属植物总苞鞣质含量测定结果

3　讨论

目前对栗属植物带刺总苞的研究存在化学成分研究较少、有效部位不明确、药效研究不充分的问题，已有的药效研究认为其功效主要与鞣质有关，本文初步测定了其鞣质含量，结果显示栗属植物的板栗壳与茅栗壳含有较高的鞣质含量，这为提取纯化鞣质，用较纯的部位进一步研究该属植物鞣质特有的功效提供依据。

[1]Johnson G P. Revision of Castanea sect. Balanocastanon(Fagaceae)[J]. J Arn Arb, 1988, 69(1): 25-49.

[2]中药辞海编审委员会.中药辞海第二卷[M].北京:中国医药科技出版社,1996:2014-2015.

[3]刘平,李云雁,罗渊,等.板栗壳棕色素对活性氧自由基的清除作用[J].食品科技，2008，2(2):175-178.

[4]刘海鑫,蒋卫国,宋成武,等.板栗对糖尿病小鼠降血糖作用的研究[J].数理医药学杂志，2012,25(1):57-60.

[5]陈思玉,刘玉军.板栗壳斗总酚对高脂糖尿病大鼠血糖和血脂水平的影响[J].心理医生杂志，2012，4(214):456-457.

[6]吴龙云,凌桂生, 许振朝.板栗壳浸膏的抗菌抗炎作用及对胃肠平滑肌运动的影响[J].广西中医药，2002, 25(4):54-56.

[7]吴龙云,凌桂生,许学健,等.板栗毛壳的抗菌活性成份[J].中草药，1991,22(8):370-371.

房事不远，则耗其精。劳动不戒，则耗其力。言语不省，则耗其气，此邪之自内受者也。起居不谨则风露侵，饮食不节则肠胃损，此邪之自外入者也。健人有此，不免于病。

——明·王绍隆《医灯续焰·病家须知》

Determination on the Content of Tannin in Castanea Mill Involucre

ZHANG XiaohuiLiu xiaNIU YanyanXi Xiaohu

(1.Pharmacy Department, Shanxi Province Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shanxi, Taiyuan 030012, China;2.Central Laboratory, Shanxi Province Institute of Traditional Chinese Medicine, Shanxi, Taiyuan 030012, China)

ObjectiveTo determine the tannins content of dry involucre in plants of Castanea Mill. MethodsCollecting involucre of four kinds of plants C. mollissima Bl., C. seguinii Dode, C. henryi Rehd. & Wils, C. crenata Sieb. & Cuce from different growing area, visible spectrophotometry was used to determine the tannin content. ResultsC. mollissima shell and C. seguinii Dode shell had high tannin content, and C. crenata Sieb. &Cuce and C. henryi Rehd.& Wils. had low tannin content. ConclusionThe method of deterring tannin content is accurate. It can provide basis for use chestnut resources involucre.

Castanea Mill; Chestnut shell; Tannin; Content determination

山西省中药材、中药饮片地方标准研究(No.2013004A)

1.山西省中医院药剂科(太原 030012)；2.山西省中医药研究院中心实验室(太原 030012)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.14.066

1003-8914(2016)-14-2126-02

(本文校对：王世伟2015-11-14)