壮阳作用药酒中枸橼酸西地那非非标研究

何　涛　胡　佳　张　韬　于世海



壮阳作用药酒中枸橼酸西地那非非标研究

何涛1胡佳1张韬1于世海2

目的研究并建立高效液相色谱法及薄层色谱法测定壮阳作用药酒中枸橼酸西地那非非法添加方法。方法高效液相色谱法及薄层色谱法。结果薄层色谱法：GF254薄层板，以正己烷-乙醇-氨水(30∶70∶1)为展开剂，在碘蒸汽中熏5分钟后，置254nm紫外灯下检视。高效液相色谱法：C18柱，流动相为0.05mol/L磷酸三乙胺(取7ml三乙胺用水稀释至1000ml,用磷酸调至3.0)-甲醇-乙腈(58∶25∶17)，检测波长290nm。结论此高效液相色谱法及薄层色谱法测定壮阳作用药酒中枸橼酸西地那非可靠有效。

枸橼酸西地那非; 非法添加; 高效液相色谱法; 薄层色谱法

有壮阳作用药酒，宣称纯中药制成，无西药添加，用过的人几小时之内起效居多，怀疑有西药添加，所以首先选择枸橼酸西地那非进行排查。枸橼酸西地那非也叫万艾可，中文简称“伟哥”，它是西地那非的枸橼酸盐，一种对环磷酸鸟苷(cGMP)特异的5型磷酸二酯酶(PDE5)选择性抑制剂[1]。 作用机制：阴茎勃起的生理机制涉及性刺激过程中阴茎海绵体内一氧化氮(NO)的释放。NO激活鸟苷酸环化酶导致环磷酸鸟苷(cGMP)水平增高，使海绵体内平滑肌松弛，血液充盈。西地那非(Sildenafil，Viagra,万艾可) 是高度选择性磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂，PDE5在阴茎海绵体中高度表达，而在其它组织中(包括血小板、血管和内脏平滑肌、骨骼肌)表达低下。西地那非通过选择性抑制PDE5，增强一氧化氮(NO)-cGMP途径，升高cGMP水平而导致阴茎海绵体平滑肌松弛，使勃起功能障碍患者对性刺激产生自然的勃起反应。勃起反应一般随西地那非剂量和血浆浓度的增加而增强[2]。实验显示，药效可持续至4小时，但反应较2小时时弱[3]。本文通过高效液相色谱法及薄层色谱法鉴别及测定壮阳作用药酒中枸橼酸西地那非含量，证明此壮阳作用药酒中有枸橼酸西地那非非法添加。

1　仪器与试药

CPA-225D型电子天平，LC-2010CHT型高效液相色谱，有壮阳作用药酒，三乙胺(分析纯)，磷酸(分析纯)，甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，甲酸(分析纯),过氧化氢(分析纯),氨水(分析纯)，正己烷(分析纯)，乙醇(分析纯)，枸橼酸西地那非对照品(中国药品生物制品检定研究院，批号101400-201301)，水为纯化水。

2　方法与结果

2.1薄层色谱

2.1.1供试品溶液制备取本品，以每分钟3000转离心15分钟，取10ml上清液，以混合制剂[甲醇-水-氨水(75∶25∶1)]稀释至100ml摇匀，作为供试品溶液。

2.1.2对照品溶液制备另取枸橼酸西地那非对照品约10mg,置20ml量瓶中，加上述混合制剂溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液，照薄层色谱试验，取上述两种溶液各5μl,分别点于同一GF254薄层板上，以正己烷-乙醇-氨水(30∶70∶1)为展开剂，层析缸预先以展开剂饱和20分钟。展开后晾干，在碘蒸汽中熏5分钟后，置254nm紫外灯下检视[4]。

2.1.3结果供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。(见图1)

1.对照品　2.供试品图1　薄层色谱图

2.2高效液相色谱法

2.2.1色谱条件色谱柱为Symmetry C18柱(150mm ×4.6mm，54um)；流动相为0.05mol/L磷酸三乙胺(取7ml三乙胺用水稀释至1000ml,用磷酸调至3.0)-甲醇-乙腈(58∶25∶17)；检测波长：290nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：25℃。

2.2.2供试品溶液制备[5]取本品，以每分钟6000转离心10分钟，取上清液10ml，置于20ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3对照品溶液制备精密称取枸橼酸西地那非对照品约10mg,置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取2ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

2.2.4方法学考察

2.2.4.1专属性试验取2.2.2项下的供试品溶液和2.2.3项下的对照品溶液，按拟定色谱条件进行测定，色谱图见图2、图3。结果表明，药酒中其他成分及辅料对枸橼酸西地那非的测定无干扰，方法专属性好，枸橼酸西地那非的保留时间约为8.8分钟，分离度为2.56，理论板数为5625。

图2　对照品溶液色谱图

图3　供试品溶液色谱图

2.2.4.2精密度考察取对照品溶液，连续进样6次，每次20μl，测定峰面积积分值，结果RSD为0.5%。

2.2.4.3稳定性试验精密吸取上述对照品溶液，在0、2、4、6、8小时进样，共五次，每次20μl，测定峰面积积分值，结果RSD为0.7%，表明枸橼酸西地那非在8小时内稳定。

2.2.4.4重复性试验取样品，按供试品溶液制备方法制备6个，测定结果进行评价(n=6)，按上述色谱条件测定，结果RSD为1.0%。

2.2.4.5回收率试验取已测含量样品，平行6份，分别精密加入枸橼酸西地那非对照品适量，按供试品溶液制备方法制备和测定，计算6次的回收率，分别为99.5%，99.4%，99.6%，99.4%，99.5%,99.5%，平均回收率为99.5%，RSD为0.1%。

2.2.5样品含量测定按上述供试品之辈方法处理，进样分析，测定样品中枸橼酸西地那非的含量结果见表1。

表1　枸橼酸西地那非含量

3　讨论

通过薄层色谱法及高效液相色谱法，鉴别及测定壮阳作用药酒中枸橼酸西地那非含量，方法安全可靠。

[1]国家药典委员会.国家药品标准[S].北京：中国医药科技出版社，2011.

[2]黄力,杨宁,刘海英,等.壮阳类中药中枸橼酸西地那非的检出[J].中国中医药资讯,2010，2(2)：42.

[3]戚亮，崔琳.HPLC法测定枸橼酸西地那非的含量[J].黑龙江医药，2013, 26(5)：755-757.

[4]魏尊喜.HPLC与TLC测定保健品中枸橼酸西地那非含量[J].安徽医药, 2007，11(12):1097-1098.

[5]杨德忠，黄惠宏.HPLC法测定枸橼酸西地那非片的含量[J].解放军药学学报,2002，18(4):235-236.

1.辽宁省锦州市食品药品检验所(锦州 121000); 2.辽宁康辰药业有限公司(丹东 118301)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.14.022

1003-8914(2016)-14-2039-02

(本文校对：李盈2015-12-03)