复方元胡片质量标准研究

赵　昕，张广春，陈明明，苑振廷，廖格斯



复方元胡片质量标准研究

赵昕1，张广春1，陈明明1，苑振廷2，廖格斯1

1.沈阳军区联勤部药品仪器检验所，沈阳 110026；2.沈阳军区第二三零医院，丹东 118000

[摘要]目的建立复方元胡片的质量标准。方法采用薄层色谱法定性鉴别处方中的香附、延胡索，采用HPLC法测定延胡索乙素的含量。色谱柱为C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，乙腈-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH值至6.0)(40∶60)作为流动相，柱温为30 ℃，流速为1.0 mL/min，检测波长为280 nm。结果该质量标准薄层色谱法斑点清晰，分离度好，阴性对照无干扰；延胡索乙素在192～912 ng范围内呈良好的线性关系，回归方程：y=1.108 9 x-20.546，r=0.999 6，平均回收率为100.82%，RSD为1.27%(n=6)。结论本方法可有效控制复方元胡片的质量。

[关键词]复方元胡片；薄层色谱法；HPLC法；延胡索乙素

0　引言

复方元胡片是中国人民解放军沈阳军区第230医院配制的非标准制剂，由海螵蛸、枯矾、香附、元胡和曼陀罗叶等五味中药组成，具有甘热胃温、止酸收敛的功效，临床上主要用于治疗胃酸过多，胃炎及十二指肠溃疡等疾病。其君药元胡(延胡索)味辛、苦，性温，归肝、脾经，具有活血、散瘀、行气、止痛的功效。现代研究表明，延胡索乙素作为延胡索的主要有效成分之一，具有镇痛、镇静、催眠等作用[1-3]。本文对香附与元胡(延胡索)进行了显微鉴别；对海螵蛸进行了化学鉴别；采用薄层色谱法(TLC)对处方中的元胡(延胡索)、香附进行了定性鉴别；采用HPLC法测定制剂中延胡索乙素的含量，为建立复方元胡片的质量标准提供了依据。

1　仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪(1260系列，Aglient公司)，紫外可见分光光度计(JASCO-930，大连远洋仪器有限公司)；超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；AG204电子天平(美国梅特勒公司)。

1.2试剂甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，磷酸(分析纯)，三乙胺(分析纯)，重蒸水(自制)。对照品：α-香附酮(中检院，批号：110748-201312)；延胡索乙素(中检院，批号：110726-201414)。样品：复方元胡片(由沈阳军区第二三零医院提供，批号：140414、140415、140416)。阴性对照样品为自制。

2　方法与结果

2.1香附与元胡(延胡索)的显微鉴别取本品，研细，置显微镜下观察，表皮细胞多角形，常带有下皮纤维及厚壁细胞。下皮纤维成束，深棕色或红棕色(香附)；糊化淀粉粒团块淡黄色或近无色(延胡索)。见图1。

图1　显微鉴别图

2.2海螵蛸的化学鉴别取本品2片，研碎，滴加稀盐酸，产生气泡。见图2。

图2　海螵蛸化学反应鉴别图

2.3TLC鉴别

2.3.1元胡(延胡索)溶液的制备：①对照药材溶液及对照品溶液：取延胡索对照药材1 g，加甲醇50 mL，超声30 min，过滤后所得滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，用浓氨试液调至碱性，再加入二氯甲烷10 mL振摇提取，同法3次，合并提取液，蒸干，得残渣加甲醇1 mL使溶解，即得对照药材溶液；取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得对照品溶液。②样品溶液：取本品10片，研细，取2 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加浓氨试液调至碱性，用二氯甲烷10 mL振摇提取，同法3次，合并提取液，蒸干，得残渣加甲醇1 mL使溶解，即得。③阴性溶液：按复方元胡片的制备方法制成缺元胡(延胡索)的片剂，再按上述“样品溶液”制备方法制得阴性溶液。

TLC鉴别：吸取上述4种溶液各10 μL，点于硅胶G薄层板上，展开剂为甲苯-丙酮(4∶1)，展开，晾干后置碘缸中，约3 min后取出，挥尽板上吸附的碘，置365 nm紫外光灯下检视。样品色谱与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上的荧光斑点显相同颜色，阴性对照无干扰。见图3、图4。

图3　元胡薄层色谱鉴别(专属性)

图4　元胡薄层色谱鉴别(重复性)

2.3.2香附溶液的制备：①对照品溶液：取α-香附酮对照品适量，加乙酸乙酯制成每1 mL含1 mg的溶液，即得；②样品溶液：取本品20片，研细，取粉末5 g，加二氯甲烷30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为样品溶液。③阴性溶液：按复方元胡片的制备方法制成缺香附的片剂，再按上述“样品溶液”制备方法制得阴性溶液。

TLC鉴别：吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，展开剂为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(90∶1∶1∶0.1)，展开，取出，晾干，置254 nm紫外灯光下检视。样品溶液色谱中，在与对照品溶液相应的位置上显相同的深蓝色斑点，阴性对照无干扰。见图5、图6。

图5　香附薄层色谱鉴别(专属性)

图6　香附薄层色谱鉴别(重复性)

2.4含量测定

2.4.1色谱条件色谱柱：C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH值至6.0)(40∶60)；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样体积：10 μL。理论板数按延胡索乙素峰计算不低于2 000。

最大吸收波长的选择：精密称取延胡索乙素对照品适量，以流动相为溶剂制成每1 mL含延胡索乙素48 μg的溶液，作为对照品溶液。将其置JASCO-530型紫外可见分光光度计下进行全波长扫描，结果对照品溶液在280 nm左右处有最大吸收。同时参考《中国药典》2010版相关延胡索乙素含量测定的色谱条件[4]，本实验选定280 nm为测定波长。紫外光谱图见图7。

图7　延胡索乙素紫外光谱图

2.4.2溶液的制备①对照品溶液：精密称取延胡索乙素对照品适量，加入甲醇制成每1 mL含延胡索乙素48 μg的溶液。②样品溶液：取本品20片研成细粉，精密称取约4.0 g，加浓氨试液-甲醇(1∶20)50 mL，称定重量，冷浸1 h后，超声30 min，放冷，用浓氨试液-甲醇(1∶20)补足重量，蒸干过滤后所得滤液，残渣加甲醇溶解、定容于5 mL容量瓶，摇匀，取过滤后的续滤液，即得。③阴性样品溶液：按复方元胡片的制备方法制成缺元胡(延胡索)的片剂，再按上述“样品溶液”制备方法制得阴性溶液。

2.4.3专属性试验精密称取“2.4.2”项对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪测定，见图8。结果表明，延胡索乙素的保留时间约为27 min，阴性对照样品不干扰延胡索乙素的测定，延胡索乙素与其他成分或杂质的分离度>1.5，理论板数按延胡索乙素峰计算应均不低于2 000，试验表明此法专属性强。

图8　延胡索乙素高效液相色谱图

2.4.4标准曲线的制备精密吸取不同体积的浓度为48 μg/mL延胡索乙素对照品溶液，注入液相色谱仪，按“2.4.1”项操作，以测定峰面积值为纵坐标、对照品进样量(ng)为横坐标，得回归方程：y=1.108 9 x-20.546，r=0.999 6(对照品进样量在192～912 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系)。

2.4.5精密度试验精密吸取“2.4.2”对照品溶液10 μL，按“2.4.1”项操作，连续进样得峰面积RSD为1.92%(n=5)。

2.4.6稳定性试验取复方元胡片(批号：140416)，按照“2.4.2”制备样品溶液，按“2.4.1”项操作，分别在0、2、4、6、8 h测定延胡索乙素峰面积，测得其RSD为1.46%(n=5)，表明本溶液在8 h内未曾分解，稳定性良好。

2.4.7重复性试验取复方元胡片(批号：140416)6份，按照“2.4.2”制备样品溶液，按“2.4.1”项操作，测得延胡索乙素平均含量为43.3 μg/g，RSD为1.62%(n=6)，符合要求。

2.4.8回收率试验取复方元胡片(批号：140416)6份，每份约精密称取2.0 g，分别加入延胡索乙素对照品溶液(48 μg/mL)各2.0 mL，按照“2.4.2”制备样品溶液，制成回收率用样品溶液，再按“2.4.1”操作台，测定样品中延胡索乙素含量，算得平均回收率为100.82%，RSD为1.27%(n=6)，符合要求。结果见表1。

表1　回收率试验

2.4.9样品测定取复方元胡片(批号：140414、140415、140416)，按照“2.4.2”制备样品溶液，按“2.4.1”项操作，分别测定其中延胡索乙素的含量。结果见表2。

表2　三批样品含量测定结果

3　讨论

3.1样品制备延胡索乙素为叔胺类生物碱，呈弱碱性，在碱性环境下以分子形式存在，易溶于有机相[5-6]，在样品溶液制备过程中，考察了超声提取与回流2种提取方法，结果显示，超声提取方法既简便且提取效果最好。比较了甲醇、乙醇、60%甲醇、60%乙醇、浓氨-甲醇(1∶20)等不同提取溶剂，结果以浓氨-甲醇(1∶20)提取最为完全。故最终确定样品处理方法为浓氨-甲醇(1∶20)超声提取。

3.2流动相的选择对流动相的种类进行了考察，选取了甲醇-水(55∶45)、甲醇-0.1%磷酸(三乙胺调pH值至6.0)(55∶45)、乙腈-0.1%磷酸(三乙胺调pH值至6.0)(55∶45)、乙腈-水(40∶60)、乙腈-0.1%磷酸(三乙胺调pH值至6.0)(40∶60)，最终选用乙腈-0.1%磷酸(三乙胺调pH值至6.0)(40∶60)为流动相能够使延胡索乙素与杂质完全分离，峰形好。

参考文献：

[1]贺凯,高建莉,赵光树.延胡索化学成分、药理作用及质量控制研究进展[J].中草药,2007,38(12):1909-1912.

[2]陈德利,马霖,曹玉,等.HPLC法测定蒲元胃康胶囊中延胡索乙素的含量[J].中国药房,2009,20(9):690-691.

[3]魏良兵,吴溪,杜红芳,等.枳壳健胃颗粒的质量控制研究[J].中国中医药信息杂志,2013,20(1):54-56.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社,2010:130-131.

[5]王曙东,汤淏,崔恩忠.高效液相色谱法测定胃乐舒颗粒中延胡索乙素的含量[J].医学研究生学报,2010,23(6):634-636.

[6]费改顺,马慧萍,贾正平,等.高效液相色谱法测定胃疡散中延胡索乙素含量[J].医药导报,2012,31(2):241-243.

收稿日期：2015-08-12

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201603022

Study on quality standard for compound Yuanhu tablet

ZHAO Xin1，ZHANG Guang-chun1，CHEN Ming-ming1，YUAN Zhen-ting2,LIAO Ge-si1

(1.Institute for Drug and Instrument Control of Shenyang Military Region,Shenyang 110026,China; 2.No.230 Hospital of PLA,Dandong 118000,China)

【Abstract】ObjectiveTo establish the quality standard for compound Yuanhu tablet.MethodsRhizoma cyperi and Corydalis Rhizoma in the tablet were identified by TLC.The content of tetrahydropalmatine was determined by HPLC.A C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)was used with the mobile phase consisting of acetonitrile-0.1% phosphoric acid (adjusting pH to 6.0 with triethylamin) (40∶60) at the column temperature of 30 ℃.The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 280 nm.ResultsThe method of TLC had good resolution with clear spots and had interference from negative control.The good linearity was obtained within the range of 192～912 ng (y=1.108 9 x-20.546，r=0.999 6) for tetrahydropalmatine and the average recovery was 100.82% (RSD=1.27%,n=6).ConclusionThe established method is simple,accurate and sensitive,and can be applied in the quality control of compound Yuanhu tablet.

Key words：Compound Yuanhu tablet; TLC; HPLC; Tetrahydropalmatine