VEGF多态性与吸烟在急性冠状动脉综合征中交互作用研究

叶　鸿,周青山



VEGF多态性与吸烟在急性冠状动脉综合征中交互作用研究

叶鸿,周青山*

武汉大学人民医院重症监护科,武汉 430071

[摘要]目的探讨VEGF-1154C/T(rs1570360)位点单核苷酸多态性与急性冠状动脉综合征(ACS)遗传易感性关联性及与吸烟交互作用。方法采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析298例ACS患者和636例对照进行rs1570360基因分型,非条件Logistic分析rs1570360急性冠状动脉综合征发病易感性之间关联性;利用非条件Logistic分析rs1570360与吸烟的交互作用。结果与VEGF rs1570360位点非T基因携带者(CC)相比,T基因携带者(TT/CT)的急性冠状动脉综合征罹患风险明显增加(OR=1.64,95%CI:1.48,1.86,P=0.003;校正OR=1.61,95%CI:1.44,1.81,P=0.001)。用非条件Logistic校正腰围、BMI、TG、LDL-C、HDL-C,分析表明，携带rs1570360 TT/CT基因型有吸烟史个体急性冠状动脉综合征罹患风险是携带CC基因非吸烟个体的3.33倍(OR=3.33,95%CI:2.01,5.39,P<0.001)。结论rs1570360与急性冠状动脉综合征患病罹患风险紧密相关,rs1570360与吸烟在急性冠状动脉综合征发病中具有协同效应。

[关键词]VEGF;多态性;急性冠状动脉综合征;交互作用

0　引言

急性冠状动脉综合征(Acute coronary syndrome,ACS)是心脏冠状动脉粥样出现粥样硬化时,在各种诱因下冠脉完全或不完全闭塞性血栓,表现出心前区疼痛等综合征[1]。近年来随着人们生活水平改善和工作节奏加快,急性冠状动脉综合征发病率明显增高。现已明确急性冠状动脉综合征发病主要与氧化应激以及炎症反应等因素紧密相关[2-4]。国内外研究表明,急性冠状动脉综合征呈现家族集聚现象,提示遗传因素在其发病过程中起着重要的作用[5]。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种促进血管内皮细胞通透性改变的分子,VEGF可调节氧化应激以及炎症反应等生物学效应[6]。研究发现,吸烟不仅加剧机体炎症反应水平,同时可导致机体氧化应激水平增加[7]。而调节氧化应激以及炎症反应是冠脉综合征发病的重要危险因素[2]。为此,本研究通过采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应，了解VEGF rs1570360多态性与急性冠状动脉综合征易感性的关系。本文亦着重探讨rs1570360与吸烟在急性冠状动脉综合征中的交互作用。

1　对象与方法

1.1研究对象选取2012年10月至2014年9月于黄石中心医院老年科住院的急性冠脉综合征患者，年龄20～70岁，急性冠状动脉综合征诊断标准符合中华医学会心血管分会颁布的《非ST段抬高急性冠状动脉综合征诊断与治疗指南》。健康对照组选取体检中心健康个体。所有纳入对象若罹患免疫风湿性疾病、严重肝肾疾病、恶性肿瘤、慢性消耗性疾病,严重感染性疾病或近3个月无服用免疫抑制剂、激素史将被排除。

1.2研究方法

1.2.1一般资料的收集通过询问及形态学测量，收集受试者的年龄、性别以及血压、体重、腰围、身高等一般资料。近1年来,每天至少吸烟1根定义为吸烟。

1.2.2生化指标检测抽取受试者空腹静脉血,全部采用罗氏日立7600全自动生化分析仪测定所有受试者的血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)。

1.2.3rs1570360性检测采取经典酚-氯仿法提取外周血基因组DNA。根据VEGF以及VEGF基因的核苷酸序列设计各个位点的扩增引物使用PCR扩增目的基因片段。PCR扩增引物序列：rs1570360上游5′-CTTCCTAGGCTGGTCCTTACTGA-3′,下游：5′-CTGAGACCTGAAGA CCTAAAGAGCT-3′ PCR反应体系(25 μL)包含100 ng提取DNA,1.0 U Taq酶(Takara,Dalian,China),2 μL上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反应条件:94 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s，30个循环；58 ℃(rs1570360),72 ℃ 45 s; 72 ℃ 10 min。采用XspI(rs1570360)限制性内切酶进行酶切，酶切产物进行3%琼脂糖电泳;EB染色成像,以此判定基因型。

2　结果

2.1一般情况一般临床资料如表1所示。与健康对照组相比，急性冠状动脉综合征组(病例组)在性别、年龄、TC等资料上差异无统计学意义，而腰围、BMI、TG、LDL-C、HDL-C、吸烟等变量两组差异有统计学意义。

表1　ACS与健康对照组一般临床资料

2.2rs1570360与急性冠状动脉综合征易感性rs1570360在病例组以及健康对照组基因型频率分布如表2所示,健康对照组和病例组均符合Hardy-Weinberg平衡法(rs1570360:χ2=0.14,P=0.710,χ2=0.16,P=0.688)。利用非条件Logistic校正腰围、BMI、TG、LDL-C、HDL-C、吸烟等变量后,与VEGF rs1570360基因型CC个体相比,CT个体罹患急性冠状动脉综合征风险增加(OR=1.32,95%CI:1.00～1.73,P=0.048)；TT基因型个体罹患急性冠状动脉综合征风险增加(OR=1.61,95%CI:1.02～2.47,P=0.034);与非T基因携带者(CC)相比,T基因携带者(TT/CT)的急性冠状动脉综合征罹患风险明显增加(OR=1.43,95%CI:1.08～1.90,P=0.012;校正OR=1.51,95%CI:1.05～1.81,P=0.021)。

表2　rs1570360与ACS易感性关联性分析

注：a:腰围,BMI,LDL-C,HDL-C

表3　rs1570360与吸烟在急性冠状动脉综合征中交互作用

注：a:校正腰围、BMI、TG、LDL-C、HDL-C等变量;Padd:相加交互作用P值;Pmulti:相乘交互作用P值

3　讨论

近年来，流行病学证实遗传因素在急性冠状动脉综合征发病中发挥着重要作用[8]。从遗传易感性角度确定ACS高危人群，对易感人群有针对性的预防是目前降低ACS风险的有效措施之一。本文通过病例对照实验分析发现，VEGF rs1570360位点T基因携带者(TT/CT)与非T基因携带者(CC)的急性冠状动脉综合征罹患风险明显增加,为排除腰围、BMI、TG、LDL-C、HDL-C、吸烟等变量等混杂因素对研究的影响,本文采用非条件Logistic回归分析予以校正。排除上述因素后结果亦未见明显变化。迄今为止,关于rs1570360与急性冠状动脉综合征易感性关联性研究鲜见报道。我国学者发现，广州地区VEGF rs2010963多态性与冠心病风险密切相关[9];而印度学者发现，rs1570360与冠心病发病无明显相关性[10]。

急性冠状动脉综合征是一种由遗传与环境因素及其相互作用所致的复杂疾病。现已明确吸烟明显增加ACS罹患风险[11-13]。为探讨基因与吸烟在急性冠状动脉综合征的交互作用，本文亦将吸烟作为环境因素纳入研究,探讨rs1570360与吸烟在急性冠状动脉综合征中的交互作用，Rothman认为，基于相加模型的RERI、API、S三项指标在生物学交互作用评价中具有重要的公共卫生学意义。RERI与Index S评价两因素同时存在时的联合作用与单独存在之和的差别;API则评价两因素同时存在的病例中可归因于两因素交互作用的病例所占的比例。非条件Logistic回归分析表明，携带rs1570360 TT/CT基因型有吸烟史个体急性冠状动脉综合征罹患风险是携带CC基因非吸烟个体的3.33倍(OR=3.33,95%CI:2.01,5.39,P<0.001)。RERI、API、S三项指标结果提示，rs1570360与吸烟在急性冠状动脉综合征有协同作用,然而机制难以阐明。目前有关rs1570360与环境交互作用在急性冠状动脉综合征中交互作用机制尚未明确。近年来文献报道，VEGF多态性与吸烟在类风湿关节炎以及食道癌中亦存在交互作用[14-15]。本研究存在一定不足,最显著的是健康对照组并非绝对意义的“健康”,部分对照组对象携带其他代谢性疾病。其次,本研究仅仅将吸烟这一环境因素纳入,而忽略了其他环境因素的影响。最后,研究中样本量较小,需要进一步扩大样本量。

总之,VEGF rs1570360与急性冠状动脉综合征罹患风险密切相关,rs1570360和吸烟在急性冠状动脉综合征发病中发挥着协同作用。本研究提示，携带rs1570360 TT/CT,特别是有吸烟史个体属急性冠状动脉综合征高危险人群，在急性冠状动脉综合征防治方案中应加以重视。本研究亦存在一定不足,为更好地研究rs1570360在急性冠状动脉综合征的易感性以及与急性冠状动脉综合征的交互作用，尚需要开展更大样本量、设计更严谨的研究。

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收稿日期：2015-11-06

基金项目：湖北省自然基金资助项目(2013CDZ029)

*通信作者

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201603011

Study on interaction between VEGF polymorphism and smoking in acute coronary syndrome

YE Hong,ZHOU Qing-shan*

(1.Desect1ment of Intensive Care,People′s Hospital of Wuhan University,Wuhan 430071,China)

【Abstract】ObjectiveTo study whether vascular endothelial growth factor (VEGF)-1154C/T (rs1570360) polymorphism is associated with susceptibility in acute coronary syndrome (ACS) and its interaction with smoking.MethodsTotally 298 patients with ACS and 636 healthy control subjects were genotyped by polymerase chain reaction-based restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP).The unconditional logistic regression (ULR) was performed to assess the association between rs1570360 and ACS risk.Gene-environment interactions on the risk of ACS was explored by unconditional logistic regression methods.ResultsThe case-control analysis indicated that increased risk of ACS which was found in patients with VEGF rs1570360.The data from ULR method indicated that smoking-positive subjects with genotype CT/TT had 3.33 times risk of ACS compared to smoking-negative subjects with genotype CC(OR=3.33,95%CI:2.01-5.39,P<0.001) after adjusting for covariates.ConclusionVEGF rs1570360 is associated with risk of ACS,and that rs1570360 together with smoking has synergistic effects on risk of ACS.

Key words：VEGF;Polymorphism;ACS;Interaction