高效液相色谱法测定感冒软胶囊中对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬的含量

吴　谨，朱力生，余　立，汪胜峰，陈国儒，张　健，陈　俊

(麻城市人民医院药学部，湖北 麻城　438300)



高效液相色谱法测定感冒软胶囊中对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬的含量

吴谨*，朱力生#，余立，汪胜峰，陈国儒，张健，陈俊

(麻城市人民医院药学部，湖北 麻城438300)

目的：建立高效液相色谱法测定感冒软胶囊中对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬含量的方法。方法：色谱柱为Agilent Zorbax C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相A为乙腈，流动相B为缓冲液(pH=3.0)，梯度洗脱，流速为1.2 ml/min, 检测波长为275 nm，柱温为35 ℃，进样体积为20 μl。 结果：对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬的线性范围分别为2.62～26.23 μg/ml(r=0.999 9)、2.51～25.14 μg/ml(r=0.999 8)、5.68～56.78 μg/ml(r=0.999 9)；回收率分别为100.6%、101.1%、100.2%，RSD分别为0.4%、1.2%、0.4% (n=9)。结论：本方法操作简便快捷，结果准确可靠，可用于感冒软胶囊中对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬的含量测定。

高效液相色谱法； 感冒软胶囊； 乙酰氨基酚； 琥珀酸多西拉敏； 氢溴酸右美沙芬

感冒是最常见的呼吸系统疾病，用于治疗感冒的药物有许多种，多为复方制剂。对于西药而言，感冒药的组成主要包括以下几类药物：解热镇痛药、肾上腺素受体激动剂、抗组胺药、镇咳祛痰药、抗病毒药等[1]。感冒软胶囊包含3种主要成分，每颗胶囊含对乙酰氨基酚325 mg，琥珀酸多西拉敏6.25 mg，氢溴酸右美沙芬15 mg。有文献报道了用反向高效液相色谱法同时测定3种组分中1或2种组分的含量[2-5]，但同时测定3种组分的高效液相色谱法未见报道。本文采用反向高效液相色谱法，用梯度系统，在同一色谱条件下同时测定感冒软胶囊中乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬的含量，结果准确，可用于该制剂的质量控制。

1　材料

1.1仪器

Waters e2695型高效液相色谱仪(包括四元梯度泵，自动进样器，柱温箱等，色谱工作站为Empower 2)；Sartorious CP225D型电子天平；Milli-Q超纯水处理系统。

1.2药品与试剂

感冒软胶囊[人福普克药业(武汉)有限公司，批号：1000056, 1000057, 1000058，NDC：53345-006-01]；对乙酰氨基酚对照品(批号：100018-200408)、氢溴酸右美沙芬对照品(批号：100201-201003)均由中国食品药品检定研究院提供，琥珀酸多西拉敏对照品(批号：I2M407)为《美国药典》标准品；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钠及磷酸为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相A：乙腈，流动相B：磷酸缓冲溶液(20 mmol/L磷酸二氢钠，用稀磷酸调节pH至3.0)，梯度洗脱(洗脱程序见表1)。流速：1.2 ml/min；检测波长：275 nm；柱温：35 ℃；进样体积：20 μl。

表1　梯度洗脱程序Tab 1　Gradation elution program

2.2溶液的制备

2.2.1对照溶液的制备：分别准确称量对乙酰氨基酚对照品65 mg，琥珀酸多西拉敏对照品62.5 mg，氢溴酸右美沙芬对照品150 mg，置于100 ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取2.0 ml至100 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

2.2.2供试品溶液的制备：准确称量感冒软胶囊5颗，置于500 ml容量瓶中，加入水约400 ml，置于50 ℃水浴中并不时振摇至胶囊完全溶解，取出，冷却至室温，用水稀释至刻度，摇匀。精密移取10 ml至50 ml容量瓶中，用0.45 μm尼龙滤膜滤过，取续滤液作为琥珀酸多西拉敏及氢溴酸右美沙芬的测试溶液，称为供试品溶液A。精密移取供试品溶液A2.0 ml，置于100 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀作为对乙酰氨基酚的测试溶液，即供试品溶液B。

2.2.3阴性样品溶液的制备：根据感冒软胶囊的处方，配制不含对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬的空白储备溶液，精密称量适量(约相当于5颗胶囊的辅料量)，按“2.2.2”项下方法配制阴性样品溶液。

2.3系统适用性试验

取对照溶液重复进样6针，记录色谱图。在对照溶液记录的色谱中，各主峰之间完全分离，拖尾因子均<1.2；各组分峰面积之间的RSD(n=6)分别为0.6%、0.8%、0.3%，结果表明系统适用性良好。

2.4辅料干扰试验

分别取阴性样品溶液、对照溶液和供试品溶液进样分析，考察辅料对测定的干扰。结果表明，辅料不干扰乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬的测定，见图1。

2.5线性关系考察

精密称取对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏及氢溴酸右美沙芬对照品适量，用稀释溶剂溶解并稀释成每1 ml中含对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏及氢溴酸右美沙芬约为217、208、500 μg的混合溶液，精密移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml, 分别置于50 ml容量瓶中，用稀释溶剂稀释至刻度，摇匀。精密量取上述系列混合溶液各20 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。分别以对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏及氢溴酸右美沙芬对照品浓度(X，μg/ml)为横坐标、相应峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，得上述3种成分回归方程为Y=14 821 624X+755(r=0.999 9)、Y=9 299 830X-1 148(r=0.999 8)、Y=4 872 141X-632(r=0.999 9)。

2.6精密度试验

根据“2.2.2”项下方法平行配制供试品溶液各6份，测得对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬的平均含量分别为97.9%、99.6%、97.5%，RSD分别为0.3%、0.3%、0.3%。

2.7稳定性试验

取样品(批号：1000056)适量，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于室温(25 ℃)下放置0、24、48 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算含量。结果，样品溶液对乙酰氨基酚含量分别为97.5%，98.2%，97.8%；样品溶液琥珀酸多西拉敏含量分别为99.2%，98.6%，98.1%；氢溴酸右美沙芬含量为96.8%，96.2%，97.5%。表明含量测定供试品溶液48 h内稳定性良好(稳定性试验的测定时间节点可以适当增加，如0、12、24、36、48 h)。

2.8加样回收率试验

取样品适量，共9份，按80%、100%和120%比例分别精密加入对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬对照品适量，各3份，按“2.1”项下色谱条件测定并计算回收率。结果，对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬平均回收率分别100.6%、101.1%、100.2%，RSD分别为0.4%、1.2%、0.4%。加样回收率试验结果表明方法准确度良好。

2.9样品含量测定

取感冒软胶囊3批，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，每批样品2份，按“2.1”项下色谱条件测定含量，见表2。

表2　样品含量测定结果(n=6，%)Tab 2　Content determination results of samples(n=6，%)

3　讨论

溶剂的选择：采用水为溶剂，无毒环保，实验表明以水为溶剂满足测定需要。

检测波长的选择：供试品溶液中响应值最小的琥珀酸多西拉敏在275 nm有最大吸收[6-8]，故选择275 nm为检测波长。

测试溶液的配制：样品配制采用两种不同浓度测试液分别测定高低组分，各组分均在最佳定量范围；样品配制浓度和进样体积在满足定量需求的同时尽量减少了进样量，避免了反复高浓度进样对色谱柱的损害[9-12]。

pH对响应值的影响：实验考察过不同pH对色谱行为的影响，结果表明，pH越低，琥珀酸多西拉敏响应值越高，在pH=3.0时能满足分离的要求，同时琥珀酸多西拉敏也有较大的响应值。

专属性：对乙酰氨基酚在药品中远高于其他组分，主要降解杂质亦由对乙酰氨基酚产生，在本研究的色谱条件下，对乙酰氨基酚及其降解杂质与它组分有较好的分离了，避免了杂质对本研究结果的影响[13]。

综上所述，本方法操作简便快捷，结果准确可靠，可用于感冒软胶囊中对乙酰氨基酚、琥珀酸多西拉敏、氢溴酸右美沙芬的含量测定。

[1]幸云霞.常用抗感冒药成分分析与合理应用[J].基层医学论坛,2012,16(32):4321-4322.

A.阴性样品; B.对照品溶液; C.琥珀酸多西拉敏及氢溴酸右美沙芬测定供试品; D.对乙酰氨基酚测定供试品; 1.对乙酰氨基酚； 2.多西拉敏； 3.右美沙芬A.Negative samples; B.Reference standard solution; C.Test solution for doxylamine succinate and dextromethorphan hydrobromide; D.Test solution for acetaminophen; 1.Acetaminophen; 2.Doxylamine; 3.Dextromethorphan图1　高效液相色谱图Fig 1　HPLC chromatograms

[2]南楠，赵文.复方制剂珮夫人小儿咳露中主药成分的含量测定[J].中国药物依赖性杂志，2003，12(1):60-62.

[3]邓晓云.RP-HPLC测定感咳宁片中多个组分的含量[J].广东药学，2004，14(6):25-26.

[4]杜霞，刘晓放.HPLC测定美愈软胶囊中氢溴酸右美沙芬和愈创木酚甘油醚的含量[J].中国药学杂志，2005，40(5):388-389,392.

[5]乐建，洪战英.反相高效液相色谱法同时测定氨苯美敏片中4种成分的含量[J].中国新药杂志,2008,17(22):1957-1960.

[6]崔颖，吕凌.反相高效液相色谱法同时测定新复方感冒片中5种成分的含量[J].中国新药与临床杂志,2009,1(28):48-50.

[7]俞颖，胡云珍，谢先吉，等.高效液相色谱法测定咳愈口服液中愈创木酚甘油醚、右美沙芬等四组分的含量[J].药品评价,2010，7(22):45-47.

[8]谢所.HPLC法测定愈美甲麻敏糖浆中四组分的含量[J].安徽医药，2011，15(9):1071-1073.

[9]刘永逸.RP-HPLC测定感冒安片中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量[J].广西中医药大学学报,2014,17(3):47-49.

[10]赵惠茹.高效液相色谱法测定复方氨酚美沙糖浆中盐酸甲基麻黄碱、愈创甘油醚、氢溴酸右美沙芬的含量[J].安徽医药,2014,18(8):1437-1439.

[11]董超琪.HPLC法测定对乙酰氨基酚滴剂的含量[J].海峡药学,2014,26(5):52-54.

[12]廖文榕.HPLC法同时测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量[J].海峡药学,2015,27(3):76-78.

[13]王蕾,仇其原.HPLC-ELSD法测定感愈胶囊中盐酸金刚烷胺及对乙酰氨基酚的含量[J].首都食品与医药,2015,22(18):70-71.

Content Determination of Acetaminophen, Doxylamine Succinate, Dextromethorphan Hydrobromide in Soft Capsule by HPLC

WU Jin, ZHU Lisheng, YU Li, WANG Shengfeng, Chen Guoru, Zhang Jian, Chen Jun

(Dept.of Pharmacy, People’s Hospital of Ma Cheng, Hubei Macheng 438300, China)

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of acetaminophen, doxylamine succinate, dextromethorphan hydrobromide in Soft capsule by HPLC. METHODS: Separation was carried out on a Agilent Zorbax C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)column with mobile phase A of acetonitrile, mobile phase B of buffer solution(pH=3.0) in gradient elution at a flow rate of 1.2 ml/min, the detection wavelength was 275 nm, the column temperature was 35 ℃, and the injection volume was 20 μl. RESULTS: The linearity range of acetaminophen, doxylamine succinate, dextromethorphan hydrobromide were 2.62-26.23 μg/ml(r=0.999 9), 2.51-25.14 μg/ml(r=0.999 8)and 5.68-56.78 μg/ml(r=0.999 9), respectively. The average recovery rates were 100.6%, 101.1% and 100.2%, withRSDof 0.4%, 1.2% and 0.4%(n=9), respectively. CONCLUSIONS: The method is simple, rapid, and accurate in the content determination of acetaminophen, doxylamine succinate, dextromethorphan hydrobromide in Soft capsule.

HPLC; Soft capsule; Acetaminophen; Doxylamine succinate; Dextromethorphan hydrobromide

2015-10-22)

主管药师。研究方向：临床药学、药物制剂、药事管理。E-mail：309669453@qq.com

R927.2

A

1672-2124(2016)07-0956-03

10.14009/j.issn.1672-2124.2016.07.035

*副主任药师。研究方向：临床药学、医院药学、药物制剂。E-mail：313068787@qq.com