高效液相色谱法测定伤风停胶囊中橙皮苷的含量

李子华，张伟伟

(阜阳市食品药品检验检测中心，安徽 阜阳　236015)



高效液相色谱法测定伤风停胶囊中橙皮苷的含量

李子华，张伟伟

(阜阳市食品药品检验检测中心，安徽 阜阳236015)

摘要：目的建立测定伤风停胶囊中橙皮苷含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用Waters C18柱(5 μm，150 mm×4.6 mm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(18∶82)，流速：1.0 mL·min-1，检测波长283 nm。结果橙皮苷在9.58～95.76 mg·L-1范围内，其峰面积与浓度呈良好的线性关系Y=0.231 9X-0.021 7，R=0.999 9，回收率为99.2%，RSD为0.60%。结论该方法结果准确，重现性好，可用于测定伤风停胶囊中橙皮苷的含量。

关键词：色谱法,高压液相;橙皮苷;回收率

伤风停胶囊用于外表风寒，恶寒发热，头痛，闭塞等见上述证候者。处方中有麻黄、荆芥、白芷、苍术、陈皮、甘草等中药材，其中陈皮中主要成分橙皮苷为二氢黄酮类化合物，具有理气健脾、燥湿化痰、抗炎，抗病毒等多种药理作用[1-2]，本文通过HPLC法测定该药中橙皮苷的含量，经方法学考察，结果比较满意。

1　仪器与试药

1.1仪器Thermo UItiMate3000高效液相色谱仪，DAD3000检测器，变色龙7.2软件工作站，梅特勒XPE205DR电子天平(0.01 mg)，ELMA-E100H超声清洗仪。

1.2试药橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110721-201115，含量：95.3%)；伤风停胶囊(规格：标示装量每粒装0.35 g，批号：WXGA1517,WXGA1410,WXJA1324)；甲醇为色谱纯，水为纯化水，磷酸为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性实验Waters C18柱(5 μm，4.6 mm×150 mm)色谱柱；流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液(18∶82)，流速：1.0 mL·min-1；检测波长：283 nm柱温30℃，进样量10 μL。理论板数按橙皮苷计不低于3 000，橙皮苷保留时间约为16.7 min。

2.2对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品25.12 mg置25 mL量瓶中加甲醇使其溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.9576 g·L-1的溶液作为储备液。

2.3供试品溶液的制备取样品20粒，倾出内容物，精密称取装量差异项的内容物约1 g精密加入甲醇50 mL超声30 min使溶解，放冷，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.4阴性对照溶液的制备按处方和制法制备不含橙皮苷的阴性样品，再按制备供试品溶液同法制备阴性对照溶液。

2.5专属性试验分别取对照品溶液，供试品和阴性对照溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图。样品与对照品在同一保留时间有相同的峰，阴性对照溶液无相应的峰，表明阴性对照溶液对测定无干扰(图1)。

2.6线性关系考察精密量取2.2项下的对照品储备液1 mL分别置100、50、25、20、10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。取上述5个浓度的对照品溶液10ul分别注入液相色谱仪，测定峰面积，浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，橙皮苷的回归方程为Y=0.231 9X-0.021 7，R=0.999 9。 橙皮苷在9.58～95.76 mg·L-1范围内峰面积与浓度线性关系良好。

A.对照品 tR=16.767

B.样品 tR=16.773

C.阴性对照溶液 图1　HPLC色谱图

2.7精密度试验取对照品溶液，按相同的色谱条件，连续进样5次，按峰面积算结果橙皮苷RSD为0.71%，精密度良好。

2.8重复性试验取同一批号(批号：WXGA1517)样品6份分别按2.3项制备供试品溶液，分别进样6次，测定峰面积，结果橙皮苷含量分别为：2.05、2.10、2.08、2.09、2.06、2.09 mg·g-1，RSD为0.93%，重复性良好。

2.9稳定性试验取同一批号(批号：WXGA1517)供试品溶液，分别在0、2、6、8、24 h进样测定峰面积，结果RSD为1.1%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

表1　回收率测定结果

表2　样品含量测定结果(mg/粒)

2.10回收率试验取样品适量9份(约相当橙皮苷1 mg)(批号：WXGA15172含量为0.73 mg/片)置50 mL量瓶中，分别加2.2对照品储备液各1.7、2.0、2.5 mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，按色谱条件测定其含量，计算回收率，见表1。

2.11样品测定按2.2项制备供试品及对照品溶液，各取10 μL进入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算含量。见表2。

3　讨论

在流动相选用上查阅相关文献[3]并试用了甲醇-水-醋酸(35∶61∶4)和乙腈-0.1%磷酸(21∶79)，甲醇-水-醋酸(35∶61∶4)有前拖尾现象，峰型不理想，柱效低，可能与该品种其他成分干扰有关，有待分析。综合考虑本文选乙腈-0.1%磷酸水溶液(18∶82)作为流动相保留时间稳定，无拖尾，柱效高。

在测定波长的选择上采用DAD光谱扫描，发现在283nm有最大吸收，，与文献[4-6]报道一致，选择283作为测定波长。

样品提取[7-8]选用甲醇-水(68∶22)，乙醇-水(68∶22)及甲醇的采用超声15、20和30 min处理，发现在30 min甲醇提取含量更高。

参考文献

[1]吴芙蓉，姜玲，何晓丽，等.橙皮苷对化学性肝纤维化大鼠的保护作用[J].中药材，2015,38(11)：2390-2393.

[2]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2015：191.

[3]丁毅，弓晓东，谈瑄忠，等.HPLC法同时测定通腑理气颗粒中、柚皮苷、橙皮苷、和新橙皮苷的含量[J].中国中医药信息杂志，2012,19(5)：53-55.

[4]张丽君，田军，刘永.HPLC法同时测定痛经贴剂中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].安徽医药，2015,19(10):1877-1880.

[5]苏家辉，林炳国，吴声振，等.高效液相色谱法测定中药陈皮中橙皮苷的含量[J].中医临床研究，2014,6(12)：131-132.

[6]彭春梅，杨宏晰.高效液相色谱法测定活血应痛丸中橙皮苷含量[J].中国药业，2014,23(4)：45-47.

[7]胡志军，陈建秋.HPLC法测定不同基元陈皮药材中橙皮苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012,18(10):95-97.

[8]郭琦丽，率吴清，曾莉萍，等.HPLC法测定陈皮枳壳药对提取物中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012,18(20):100-103.

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.07.017

(收稿日期：2016-03-08，修回日期：2016-05-11)

Determination of hesperidin in Shangfengting Capsules by HPLC

LI Zihua,ZHANG Weiwei

(FoodandDrugInspectionandTestingCenter,Fuyang,Anhui236015,China)

Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of hesperidin in Shangfengting Capsules.MethodsWaters C18column (5 μm，150 mm× 4.6 mm)was adopted with mobile phase of acetonitrile -0.1% phosphoric acid(18∶82).The flow rate was 1.0 mL· min-1,and the detection wavelength was 283 nm.ResultsHesperidin had a good linear relationship in the range between 9.58 mg·L-1and 95.76 mg·L-1.The coefficient of recovery was 99.2% and RSD was 0.60%.ConclusionThe method is accurate,reproducible and can be used to determine the content of hesperidin in Shangfengting capsules.

Key words:Chromatography,high pressure liquid;Hesperidin;Retrieving rate