HPLC法测定万通炎康片中苦玄参苷ⅠA的含量

翟金燕（广西万通制药有限公司，广西 南宁　530003）

HPLC法测定万通炎康片中苦玄参苷ⅠA的含量

翟金燕
（广西万通制药有限公司，广西 南宁530003）

［目的］建立万通炎康片中苦玄参苷ⅠA的含量测定方法。［方法］采用HPLC法，色谱柱为Wondasil GL Sciences C18柱（5.0μm，250 mm×4.6 mm）；流动相为乙腈-0.3%磷酸（35∶65）；流速为1.0 m l/min，检测波长为264 nm；进样量为10μl；柱温为30℃。［结果］苦玄参苷ⅠA在0.2338～1.4028μg间与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9992），加样回收率为98.27%，RSD= 1.52%（n=6）。［结论］本法操作简便，精密度好，可作为万通炎康片的质量控制方法之一。

万通炎康片；苦玄参苷ⅠA；HPLC

万通炎康片由苦玄参、肿节风组成，具有疏风清热、解毒消肿功效，用于外感风热所致的咽部红肿、牙龈红肿、疮疖肿痛［1］。苦玄参苷ⅠA是苦玄参的有效成分［2］，本实验采用HPLC测定万通炎康片中苦玄参苷ⅠA的含量，为控制该品的质量提供依据。现报道如下。

1　　仪器与试药

1.1仪器LC-10ATVP高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SPD-10AVP紫外检测器；SB3200超声震荡器（上海必能信公司）；BS210S电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.2试药苦玄参苷ⅠA对照品（供含量测定用，批号：11745-200501）；万通炎康片为广西万通制药有限公司产品（批号：130618）；乙腈、甲醇为色谱纯试剂（美国Fisher公司）；水为二次重蒸蒸馏水；其余试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：WondasilGLSciencesC18柱（5.0μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈-0.3%磷酸（35∶65）；检测波长：264 nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；理论塔板数按苦玄参苷ⅠA峰计算应不低于3 500。

2.2对照品溶液的制备精密称取苦玄参苷ⅠA对照品适量，加甲醇制成每1m l含90μg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，超声处理1 h，放冷，滤过，滤液置25m l量瓶中，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性溶液的制备按处方比例制备缺苦玄参药材的阴性对照样品，研细，取约0.5 g，精密称定，按2.3项供试品溶液的制备方法进行提取，制成阴性溶液。

2.5系统适应性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性溶液各10μl，按2.1项色谱条件分析，色谱图见图1。由图1可见，供试品中苦玄参苷ⅠA与其它杂质峰达到基线分离，分离度大于1.5，按苦玄参苷ⅠA计算理论塔板数不低于3 500。在与苦玄参苷ⅠA相应位置上，阴性样品无干扰。

2.6线性关系考察取苦玄参苷ⅠA对照品，精密称定为29.22 mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取0.5ml、1.0 ml、1.5m l、2.0m l、2.5ml、3.0ml对照品溶液，分别置于25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl，按上述色谱条件测定峰面积值，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，见图2。并求得标准曲线回归方程为：Y=363675X-328.73，r= 0.9992；表明苦玄参苷ⅠA在0.2338～1.4028μg之间呈良好的线性关系。

图2　　苦玄参苷ⅠA标准曲线

2.7精密度试验取苦玄参苷ⅠA对照品溶液（93.504μg/ml）分别连续进样6次，测得峰面积分别为337 166、331 630、333 327、330 231、321 619、324 701，平均峰面积值为329 779，RSD=1.73%（n=6）。相对偏差＜2%，表明仪器精密度良好。

2.8稳定性试验取同一批供试品（批号：130618），按2.3项方法制得供试品溶液，分别于0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h后精密吸取供试品溶液10μl进样，测得峰面积分别为：636 108、612 140、616 686、618 911、612 027、613 247、618 186，平均峰面积值为636 108，RSD=1.49%（n=7），结果表明苦玄参苷ⅠA在6 h内保持稳定。

2.9重复性试验取同一批供试品（批号：130618）适量，研细，分别取6份，每份重约0.5 g，精密称定，按样品测定方法进行提取，测定，计算，结果见表1。

表1　　重复性试验结果　　（n=6）

2.10加样回收率试验取已知含量的样品（批号：130618；8.3366 mg/g）6份，各0.25 g，精密称定，分别精密加入苦玄参苷ⅠA对照品溶液2ml（浓度为1.0044mg/ml），按供试品制备方法提取，测定，结果见表2。

2.11样品测定取10批不同批号的供试品，按供试品溶液的制备项下方法进行提取，再按2.1项色谱条件测定苦玄参苷ⅠA含量，结果见表3。

序号　取样量（g）　原有量（mg）　对照品加入量（mg） 平均峰面积　测出量（mg） 回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）1　0.2501　2.0852　2.0088　2864941　4.0594　98.27 2　0.2504　2.0871　2.0088　2862066　4.0791　99.16 3　0.2501　2.0853　2.0088　2852707　4.0648　98.54 4　0.2502　2.0862　2.0088　2874677　4.0748　98.99 5　0.2506　2.0893　2.0088　2878607　4.0849　99.34 6　0.2505　2.0880　2.0088　2823411　4.0027　95.32 98.27　1.52

表2加样回收试验结果（n=6）

表3 10批样品中苦玄参苷ⅠA含量测定结果　　（n=2）

3　结论

3.1提取方法的考察本实验分别采用加热回流1 h和超声处理1 h处理样品，结果显示，提取的有效成分差别不大，所以本研究选取较为便捷的超声处理方式。

3.2色谱柱的选择实验中比较了3根不同色谱柱的分离效果：大连依力特C18柱（5μm，4.6mm×250mm），德国MNC18柱（5μm，4.6mm×250 mm），Wondasil GL Sciences C18柱（5μm，4.6mm×250mm）；结果表明，Wondasil GL Sciences C18柱分离效果良好，供试品中苦玄参苷ⅠA与其它杂质峰达到基线分离，分离度大于1.5，按苦玄参苷ⅠA计算理论塔板数不低于3 500。

3.3限度的制定根据10批样品测定结果，样品中苦玄参苷ⅠA含量最高为11.1636mg/g（即3.729mg/片），最低为6.9714 mg/g（即2.333mg/片），考虑到不同药材的来源苦玄参苷ⅠA含量不一，以及工业化生产的损失，故将样品中苦玄参苷ⅠA含量的限度适当降低，暂规定苦玄参苷ⅠA含量限度为每片不得低于1.0mg。

［1］方宏，梁小燕.苦玄参药材中苦玄参苷ⅠA和ⅠB的含量分析［J］.广西植物，28（5）：708-710.

［2］潘小姣，曾金强，韦志英，等.从苦玄参中制备苦玄参苷ⅠA的实验研究［J］.广西中医药，2008，31（4）：49-50.

（编辑陈明伟）

R284.1

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2095-4441（2016）02-0070-03

2016-01-23