变应性鼻炎患者血清抗交叉反应性糖类决定簇IgE水平与血清IgE水平和皮肤点刺试验的关联性分析

2016-07-27闫津津冯珍如王全桂王美玲闫存玲李志艳郑新芝

中国全科医学 2016年21期

关键词：变应原变应性关联性

闫津津，冯珍如，王全桂，王美玲，闫存玲，李志艳，郑新芝

·论著·

变应性鼻炎患者血清抗交叉反应性糖类决定簇IgE水平与血清IgE水平和皮肤点刺试验的关联性分析

闫津津，冯珍如，王全桂，王美玲，闫存玲，李志艳，郑新芝

鼻炎,变应性；抗交叉反应性糖类决定簇IgE；免疫球蛋白E；皮肤点刺试验

闫津津，冯珍如，王全桂，等.变应性鼻炎患者血清抗交叉反应性糖类决定簇IgE水平与血清IgE水平和皮肤点刺试验的关联性分析[J].中国全科医学，2016，19(21)：2499-2504.[www.chinagp.net]

YAN J J,FENG Z R,WANG Q G,et al.Correlation of anti-CCDIgE level with serum IgE level and skin prick test of patients with allergic rhinitis[J].Chinese General Practice，2016，19(21)：2499-2504.

吸入性变应原通过气管进入人体，可引起包括鼻黏膜、气管、皮肤等多器官的变态反应病，主要包括花粉、真菌、螨、宠物皮屑、昆虫等，是一些相对较大、含有多种成分的颗粒，其中仅有一部分有抗原性，诱发机体发生变态反应的特异性抗原一般为含有糖基的蛋白质。结合皮肤点刺试验(skin prick test，SPT)和血清特异性IgE(specific IgE，sIgE)检测可极大提高变应原检出率。由于存在相同或/和相似的抗原决定簇间的交叉反应，血清sIgE阳性对确定变应原较困难。根据国外相关报道，大多数交叉反应导致的假阳性不是因蛋白表位的交叉反应，而是由于机体产生的抗交叉反应性糖类决定簇IgE(anti-cross reactive carbohydrate determinants IgE，anti-CCDIgE)会结合与其有相同表位的变应原所导致的[1]。研究证实，膜翅目毒液和蜜蜂毒液之间的交叉反应大多是由N-糖基链(CCDs)引起的，而不是蛋白之间的交叉反应[1]。研究估计，15%～30%的变态反应病患者会产生针对糖基的sIgE，即anti-CCDIgE[2]。41%对花粉过敏的患者产生了针对糖基的sIgE即CCDs，而其SPT显示为阴性[3]。本研究主要目的是调查anti-CCDIgE在变应性鼻炎患者中的表达情况，通过问诊相关因素包括人口学和蜜蜂叮咬等情况，分析变应性鼻炎患者血清anti-CCDIgE表达情况与血清IgE水平和SPT结果的关联性。

1　对象与方法

1.1纳入与排除标准纳入标准：变应性鼻炎患者主诉有变应性鼻炎病史或接触常见变应原后出现相关变态反应病症状，SPT(推荐试验)或/和sIgE阳性；非变应性鼻炎患者主诉变应性鼻炎病史不明显、接触常见变应原后无变态反应病相关症状，SPT和总IgE(total IgE，tIgE)均为阴性或tIgE升高明确为非变态反应病引起。排除标准：妊娠期女性；有系统性疾病，如糖尿病、恶性肿瘤、肝炎、自身免疫性疾病等；1个月内进

行过外科手术者。

1.2研究对象选取2012年1月—2013年7月北京大学第一医院确诊且符合纳入标准的变应性鼻炎患者和非变应性鼻炎患者161例为研究对象。其中男71例，女90例；年龄3～82岁，平均年龄37.8岁；变应性鼻炎121例(变应性鼻炎组)，非变应性鼻炎40例(对照组)。本研究经伦理委员会审批通过(伦理批准号：2012[533])，患者均签署知情同意书。

1.3主要仪器与试剂EUROBlotMaster免疫印迹法自动操作仪(德国欧蒙医学实验诊断股份公司)；抗特应性变应原(中国组合)IgE 10类检测试剂盒(版本号：DP_3713_A_CN_C03，批准日期：2011年2月25日，德国欧蒙医学实验诊断股份公司)；佳能CanoScan LiDE 100扫描判读系统〔佳能(中国)有限公司〕；ImmunoCAP250系统(赛默飞世尔有限公司-瑞典Phadia公司)；AllergoTM阿罗格吸入性变应原20类(东莞劲芳生物医药孵化器有限公司，见表1)。

1.4研究方法

1.4.1收集一般资料包括性别、年龄、蜜蜂叮咬情况等。

1.4.2斑点免疫印迹法(dot-immunoblotting test，dot-IBT)检测血清sIgE及anti-CCDIgE表达情况采用EUROBlotMaster免疫印迹法自动操作仪检测血清sIgE〔sIgE特应性变应原包括混合树木(柳树/杨树/榆树)、豚草、葎草、艾蒿、户尘、混合尘螨(屋尘螨/粉尘螨)、混合霉菌(点青霉/分枝孢酶/烟曲霉/交链孢酶)、蟑螂、狗毛、猫毛〕及anti-CCDIgE表达情况，操作严格按抗特应性变应原(中国组合)IgE 10类检测试剂盒说明书步骤进行：(1)加样：清晨空腹抽取3 ml血，静置10 min，3 000 r/min离心10 min(离心半径10 cm)，取血清冷藏于-80 ℃冰箱，1周后复融冷藏血清至室温，充分混匀后取100 μl血清加入至预先加有1.0 ml通用缓冲液及检测膜条的温育槽内，摇床温育16 h；(2)清洗：吸取温育槽内液体，用1.0 ml通用缓冲液清洗膜条3次，5 min/次；(3)加酶结合物：各温育槽加入1.0 ml酶结合物，摇床温育60 min，重复上述清洗步骤1次；(4)加底物：各温育槽中加入1.0 ml底物，避光摇床温育10 min后终止反应；(5)取出检测膜条自然风干，采用佳能CanoScan LiDE 100扫描判读系统根据条带着色强度自动判读结果。sIgE结果判读标准：条带着色强度<3为阴性，≥3为阳性，着色强度越深，表示sIgE水平越高；anti-CCDIgE结果判读标准：条带着色强度<1为阴性，≥1为阳性，着色强度越深，表示anti-CCDIgE水平越高。

表1　AllergoTM阿罗格吸入性变应原20类的构成

1.4.3荧光酶联免疫法(fluorescence enzyme immunoassay，FEIA)检测phadiatop、tIgE表达情况ImmunoCAP250系统使用纤维素固相载体，该固相载体是装存小胶囊内的亲水性的多聚纤维素，经溴化氰活化后与变应原共价结合，变应原预先结合在固相帽状物的ImmunoCAP250系统中，37 ℃孵育，如患者血清中有针对该变应原的sIgE，即形成抗此变应原抗体复合物，洗脱，加酶标记的兔抗人IgE抗血清(酶标二抗)，形成固相载体-变应原-sIgE-酶标二抗的结合物，再次洗脱，加入底物，产生酶催化荧光产物，终止液终止反应；测定荧光吸光度。phadiatop结果判读标准：荧光吸光度<0.35 KU/L为阴性，≥0.35 KU/L为阳性；tIgE结果判读标准：荧光吸光度≤100 KU/L为阴性，>100 KU/L为阳性。

1.4.4SPT将变应原液点于患者前臂屈侧皮肤，持点刺针将针尖垂直点压在液滴中，一液一针，不重复使用，破皮而不出血，且深度一致。点刺20 min后观察变应原的皮肤反应。以组胺为阳性对照，0.9%氯化钠溶液为阴性对照，根据AllergoTM阿罗格吸入性变应原20类变应原液的使用说明，变应原风团反应范围与阴性对照风团反应范围相同为阴性；变应原风团反应范围为阳性对照风团反应范围的1/4、1/2、1倍、2倍为阳性(强度分别为+、++、+++、++++)。

2　结果

2.1一般资料比较两组患者性别、年龄、蜜蜂叮咬情况比较，差异无统计学意义(P>0.05，见表1)。

表1　两组患者一般资料比较

注：a为t值；b为对照组有2例患者、变应性鼻炎组有9例患者记不清蜜蜂叮咬情况，未计入

2.2sIgE、anti-CCDIgE表达情况比较变应性鼻炎组患者sIgE、anti-CCDIgE阳性表达率分别为86.8%(105/121)、72.7%(88/121)，对照组分别为40.0%(16/40)、55.0%(22/40)。变应性鼻炎组患者sIgE、anti-CCDIgE阳性表达率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=35.228，P<0.001；χ2=4.365，P=0.037)。

2.3phadiatop、tIgE表达情况比较变应性鼻炎组患者phadiatop、tIgE阳性表达率分别为56.2%(68/121)、37.2%(45/121)，对照组分别为0、10%(4/40)。变应性鼻炎组患者phadiatop、tIgE阳性表达率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=34.031，P<0.001；χ2=10.497，P=0.001)。

2.4SPT结果比较变应性鼻炎组患者SPT阳性率为99.2%(120/121)，对照组为2.5%(1/40)。变应性鼻炎组患者SPT阳性率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=150.467，P<0.001)。

2.5变应性鼻炎患者anti-CCDIgE表达情况与性别、年龄、蜜蜂叮咬情况、sIgE特应性变应原表达情况、phadiatop表达情况、tIgE表达情况、SPT吸入性变应原表达情况的关联性分析anti-CCDIgE表达情况与性别，年龄，sIgE特应性变应原中的混合树木、葎草、艾蒿、户尘、混合尘螨、混合霉菌、蟑螂、狗毛、猫毛表达情况，phadiatop表达情况，SPT吸入性变应原中的树1、杂草、云杉属、葎草、树2、禾本科/谷、艾蒿、刺槐、松、粉尘螨、户尘螨、烟曲霉菌、白假丝酵母菌、蟑螂、禾本科、霉菌1、霉菌2、动物毛表达情况无关联性(P>0.05)；anti-CCDIgE表达情况与蜜蜂叮咬情况，sIgE特应性变应原中的豚草表达情况，tIgE表达情况，STP吸入性变应原中的藜、大豚草表达情况存在关联性(P<0.05，见表2)。

表3变应性鼻炎患者SPT结果与年龄、性别、phadiatop表达情况、tIgE表达情况的关联性分析

Table 3Association of SPT results with age,gender,phadiatop and tIgE sensitization of patients with allergic rhinitis

项目SPT结果阳性阴性χ2值P值性别0.1130.737 男3816 女4918年龄(岁)9.7330.021 未成年(≤18)68 青年(19～35)3511 中年(36～59)3616 老年(≥60)90phadiatop表达情况4.3350.037 阳性5414 阴性3320tIgE表达情况<0.0010.995 阳性3213 阴性5422

3　讨论

变应原的确定对变应性鼻炎的诊断治疗意义重大。评估病情时，未经治疗的变应性鼻炎通常可通过血清sIgE、tIgE及SPT联合检查测得阳性结果，根据IgE水平评估过敏情况，经系统治疗后，IgE水平常有所下降[4]。评估脱敏治疗效果时，经脱敏治疗后相应的sIgE级别降低，甚至为阴性，结合血清特异性IgG检测，血清保护性抗体IgG，特别是血清IgG4水平明显升高[4]。通过检测血清IgG4的动态变化，可了解患者脱敏治疗的效果。但由于anti-CCDIgE对变应原确诊干扰，影响了变应性鼻炎患者变应原的确定及其脱敏治疗的选择。故本研究调查anti-CCDIgE在变应性鼻炎患者中的表达情况，分析anti-CCDIgE表达情况与人口学、蜜蜂叮咬、sIgE表达情况和SPT结果等相关因素的关联性。

表2变应性鼻炎患者anti-CCDIgE表达情况与性别、年龄、蜜蜂叮咬情况、sIgE特应性变应原表达情况、phadiatop表达情况、tIgE表达情况、SPT吸入性变应原表达情况的关联性分析

Table 2Association of anti-CCDIgE with gender，age,history of hymenoptera stings,sIgE atopic allergens,phadiatop,tIgE and SPT inhaled allergens

项目anti-CCDIgE表达情况阳性阴性χ2值P值性别0.0890.765 男4014 女4819年龄(岁)0.9900.804 幼年(≤18)113 青年(19～35)3511 中年(36～59)3616 老年(≥60)63蜜蜂叮咬情况a12.0520.001 有81 无3271sIgE特应性变应原混合树木0.3200.572 阳性3515 阴性5318豚草3.6530.043 阳性388 阴性5025葎草3.1780.075 阳性1611 阴性7222艾蒿0.0700.791 阳性3514 阴性5319户尘0.4460.504 阳性4218 阴性4615混合尘螨1.3440.246 阳性6320 阴性2513混合霉菌1.6330.201 阳性3417 阴性5416蟑螂0.0670.795 阳性4317 阴性4516狗毛1.4770.224 阳性2714 阴性6119猫毛1.3440.246 阳性2513 阴性6320phadiatop表达情况0.0500.822 阳性5018 阴性3815tIgE表达情况7.0190.008 阳性396 阴性4927SPT吸入性变应原树11.5000.221 阳性138 阴性7525杂草0.9000.343 阳性179 阴性7124

(续表2)

藜5.3030.021 阳性1110 阴性7723云杉属1.9390.164 阳性86 阴性8027大豚草10.0830.001 阳性1012 阴性7821葎草0.5690.451 阳性95 阴性7928树21.5000.221 阳性138 阴性7525禾本科/谷0.9000.343 阳性179 阴性7124艾蒿0.0970.755 阳性198 阴性6925刺槐2.5240.112 阳性97 阴性7926松1.3910.238 阳性75 阴性8128粉尘螨0.0670.795 阳性4516 阴性4317户尘螨0.0500.823 阳性4215 阴性4618烟曲霉菌0.0620.803 阳性155 阴性7328白假丝酵母菌0.6750.411 阳性133 阴性7530蟑螂0.2100.647 阳性2310 阴性6523禾本科0.1400.709 阳性134 阴性7529霉菌12.5210.112 阳性139 阴性7524霉菌20.0900.764 阳性146 阴性7427动物毛0.2110.646 阳性136 阴性7527

注：a为有9例患者记不清蜜蜂叮咬情况，未计入；anti-CCDIgE=抗交叉反应性糖类决定簇IgE

本研究结果显示，变应性鼻炎组患者sIgE、anti-CCDIgE、phadiatop、tIgE阳性表达率、SPT阳性率均高于对照组。在意大利，变态反应病患者anti-CCDIgE阳性表达率为23%(>0.4 KU/L)[5]，提示anti-CCDIgE在变态反应病人群中处于较高流行率。笔者之前研究报道，北京地区健康人群anti-CCDIgE阳性表达率为23.7%[6]，在西班牙，报道的健康乡村人口anti-CCDIgE阳性表达率为5.6%(≥0.35 KU/L)[7]，说明anti-CCDIgE在变应性鼻炎患者和一般健康人群中均普遍存在，其水平较低，一般不会引起临床表现。

本研究结果显示，anti-CCDIgE表达情况与性别、年龄无关联性，与蜜蜂叮咬情况存在关联性。婴儿从一出生就开始接触各种不同的变应原，体内一开始就对外界含有糖基的物质产生低水平的anti-CCDIgE，其会增加tIgE水平，但是一般不会产生临床症状[7]。anti-CCDIgE阳性的高危人群包括变应性鼻炎患者，尤其是被蜜蜂叮咬过的患者，蜜蜂叮咬后会产生抗脂蛋白磷脂酶A2(anti-phospholipase A2，anti-PLA2)IgE，与anti-CCDIgE存在一定的交叉反应[5]。有文献报道，428例被调查者中，anti-CCDIgE阳性表达率为10.3%，anti-PLA2 IgE阳性表达率高达8.6%[7]。有研究报道，anti-CCDIgE阳性表达率最高的是被蜜蜂叮咬的患者，特别是被蜜蜂和黄蜂一起叮咬的患者[5]。

本研究结果显示，anti-CCDIgE表达情况与大部分变应原(混合树木、葎草、艾蒿、户尘、混合尘螨、混合霉菌、蟑螂、狗毛、猫毛)无关联性，国外亦尚未见anti-CCDIgE表达情况与某种sIgE特应性变应原明显相关的报道，说明anti-CCDIgE可能与临床引起过敏的变应原关系不大。anti-CCDIgE表达情况与phadiatop表达情况无关联性，说明anti-CCDIgE可能不仅存在于吸入性变应原中，也可能存在于食入性或接触性变应原中，anti-CCDIgE抗体亲和力较小、易解离，一般不引起相关变应原的临床症状，推断其在体内的主要形式可能以游离为主，有少量来自含有糖基的sIgE上的抗原决定簇，从而影响sIgE结果。早前对于sIgE与anti-CCDIgE相关性研究显示，疑似变态反应病组和健康组与问卷主诉不符合者之间、疑似变态反应病组与问卷主诉符合者和与问卷主诉不符合者之间均无差异，因此推断这种不符可能与anti-CCDIgE的异质性(heterogeneity)有关，因交叉反应性糖类决定簇(cross reactive carbohydrate determinants，CCD)不仅存在于变应原的糖蛋白结构中，亦存在于非变应原糖蛋白成分中[8]。

西方发达国家变态反应病的主要变应原是花粉[9]，我国部分地区环境污染严重，变应性鼻炎患病率逐年上升，主要变应原是尘螨[10]。北京地区健康人群anti-CCDIgE和sIgE均阳性表达时，sIgE特应性变应原阳性表达率前两位分别是屋尘(44.6%)、蟑螂(33.9%)[11]。本研究结果亦显示，anti-CCDIgE阳性表达的变应性鼻炎患者中，sIgE特应性变应原阳性表达率前两位分别为混合尘螨、蟑螂；SPT吸入性变应原阳性表达率前3位分别是粉尘螨、户尘螨和蟑螂。

本研究结果显示，SPT结果与性别、tIgE表达情况无关联性，与年龄、phadiatop表达情况存在关联性，SPT阳性率随年龄的增加而增大，说明随年龄增长，anti-CCDIgE对变应性鼻炎患者的干扰减小，确定变应原的几率越大，为下一步的脱敏治疗提供可靠的实验数据。

本研究尚有一定的局限性,所选用的是dot-IBT中包被的多种变应原组合膜条,对于其他检测系统的anti-CCDIgE表达阳性率如何,需进一步深入探讨。

综上所述，变应性鼻炎患者anti-CCDIgE水平与血清IgE(sIgE、tIgE)水平、SPT结果有一定的关联性，anti-CCDIgE表达情况对确诊变应原的SPT和sIgE试验有一定干扰，在分析试验结果时应予以注意。

作者贡献：闫津津、冯珍如进行试验设计与实施；闫津津、王全桂、王美玲、郑新芝进行资料收集整理；闫津津进行撰写论文、成文并对文章负责；闫津津、闫存玲进行试验实施、评估、资料收集；冯珍如、李志艳进行质量控制及审校。

本文无利益冲突。

[1]JAPPE U,Raulf-HEIMSOTH M,HOFFMANN M,et al.In vitro hymenoptera venom allergy diagnosis: improved by screening for cross-reactive carbohydrate determinants and reciprocal inhibition[J].Allergy,2006,61(10):1220-1229.

[2]COMMINS S P,PLATTS-MILLS T A.Anaphylaxis syndromes related to a new mammalian cross-reactive carbohydrate determinants[J].J Allergy Clin Immunol,2009,124(4):652-657.

[3]VAN DER VEEN M J,VAN REE R,AALBERSE R C,et al.Poor biologic activity of cross-reactive IgE directed to carbohydrate determinants of glycoproteins[J].J Allergy Clin Immunol,1997,100(3):327-334.

[5]MARI A.IgE to cross-reactive carbohydrate determinants: analysis of the distribution and appraisal of the in vivo and in vitro reactivity[J].Int Arch Allergy Immunol,2002,129(4):286-295.

[6]闫津津,冯珍如,王美玲,等.北京地区人群血清抗交叉反应性糖类决定簇IgE检测与分布特征分析[J].中国全科医学,2013,16(21):2520-2522.

YAN J J,FENG Z R,WANG M L,et al.Distribution characteristics of serum IgE to carbohydrate cross-reactive determinants in Beijing[J].Chinese General Practice,2013,16(21):2520-2522.

[8]龙彦,王美玲,冯珍如,等.交叉反应性糖类决定簇IgE对血清特异性IgE检测的影响[J].临床检验杂志,2012,30(2):100-102.

LONG Y,WANG M L,FENG Z R,et al.Influences of IgE to carbohydrate cross-reactive determinants on detection of serum specific IgE[J].Chin J Clin Lab Sci,2012,30(2):100-102.

[9]KOCHUYT A M,VAN HOEYVELD E M,STEVENS E A.Prevalence and clinical relevance of specific immunoglobulin E to pollen caused by sting-induced specific immunoglobulin E to cross-reacting carbohydrate determinants in Hymenoptera venoms[J].Clin Exp Allergy,2005,35(4):441-447.

[10]田芳洁，李雪盛，李进让,等.北京地区变应性鼻炎的吸入性变应原调查[J].空军医学杂志,2015,31(2):109-114.

TIAN F J,LI X S,LI J R,et al.Reaserch of aeroallergens of allergic rhinitis in Beijing[J].Medical Journal of Air Force,2015,31(2):109-114.

[11]VAN DER VEEN M J,VAN REE R,AALBERSE R C,et al.Poor biologic activity of cross-reactive IgE directed to carbohydrate determinants of glycoproteins[J].J Allergy Clin Immunol,1997,100(3):327-334.

(本文编辑：崔丽红)

Correlation of Anti-CCDIgE Level With Serum IgE Level and Skin Prick Test of Patients With Allergic Rhinitis

YANJin-jin,FENGZhen-ru,WANGQuan-gui,etal.

DepartmentofLaboratoryMedicine,PekingUniversityFirstHospital,Beijing100034,China