胃癌组织中Vav3表达与肿瘤侵袭转移的关系及临床意义研究

温 转，王 晓，檀碧波，李 勇，刘庆伟，贾 楠



·论著·

胃癌组织中Vav3表达与肿瘤侵袭转移的关系及临床意义研究

温 转，王 晓，檀碧波，李 勇，刘庆伟，贾 楠

目的探讨胃癌组织中Vav3表达与肿瘤侵袭转移的关系及其临床意义。方法选取2014年5月—2015年5月于河北医科大学第四医院外三科住院并行肿瘤切除的胃癌患者92例。收集患者胃癌组织及癌旁正常组织(距肿瘤边缘>3 cm，镜检无癌细胞)的石蜡标本，采用免疫组化法检测Vav3、RelA、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达；分析胃癌组织中Vav3表达强度与临床病理特征的关系；Vav3、RelA、PCNA、MMP-2表达之间的关系采用Spearman秩相关分析。结果胃癌组织中Vav3的阳性表达率为78.3%(72/92)，高于癌旁正常组织的40.2%(37/92)(χ2=27.572，P<0.001)；胃癌组织中RelA的阳性表达率为88.0%(81/92)，高于癌旁正常组织的52.2%(48/92)(χ2=28.242，P<0.001)；胃癌组织中PCNA的阳性表达率为73.9%(68/92)，高于癌旁正常组织的47.8%(44/92)(χ2=13.143，P<0.001)；胃癌组中MMP-2的阳性表达率为69.6%(64/92)，高于癌旁正常组织的48.9%(45/92)(χ2=8.125，P=0.004)。Vav3强表达患者性别、年龄、浸润深度、远处转移情况与Vav3弱表达比较，差异无统计学意义(P>0.05)；Vav3强表达患者肿瘤分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移程度与Vav3弱表达比较，差异有统计学意义(P<0.05)。Vav3表达与RelA、PCNA、MMP-2表达均呈正相关(rs=0.338，P<0.001；rs=0.225，P=0.031；rs=0.267，P=0.010)；RelA表达与PCNA表达呈正相关(rs=0.336，P=0.001)；RelA表达与MMP-2表达无直线相关关系(rs=0.176，P=0.094)；PCNA表达与MMP-2表达无直线相关关系(rs=0.188，P=0.072)。结论胃癌组织中Vav3存在过表达现象，Vav3表达增强与肿瘤转移及进展有关。Vav3可能通过调节RelA、PCNA、MMP-2表达而参与胃癌侵袭转移。

胃肿瘤；肿瘤浸润；肿瘤转移；Vav3蛋白

温转，王晓，檀碧波，等.胃癌组织中Vav3表达与肿瘤侵袭转移的关系及临床意义研究[J].中国全科医学，2016，19(21)：2509-2512，2521.[www.chinagp.net]

WEN Z,WANG X,TAN B B,et al.Relation between Vav3 expression and tumor invasion and metastasis in gastric cancer tissue and the clinical significance[J].Chinese General Practice，2016，19(21)：2509-2512，2521.

胃癌的发病率和病死率一直居我国恶性肿瘤的前列，对人们健康危害极大。胃癌恶性程度较高，且进展迅速，多数患者就诊时已处于进展期，存在淋巴结转移甚至远处转移[1]。胃癌患者的治疗效果常较差，即使接受手术和放化疗等综合治疗，预后亦不理想，进展期胃癌患者5年生存率约30%[2-3]。胃癌侵袭转移迅速是多种基因共同作用的结果，但该领域研究一直无突破性进展[4-5]。近年来发现Vav3与恶性肿瘤关系密切，在乳腺癌、口腔癌、皮肤癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中异常表达[6-9]。也有研究发现，Vav3在胃癌中存在过表达现象[10]。本课题组前期研究也发现，在胃癌细胞株中Vav3表达增高，抑制Vav3表达后肿瘤细胞的增殖能力和侵袭能力均明显降低[11-12]。本研究为了解Vav3在胃癌组织中表达情况与肿瘤侵袭转移的关系，检测了临床患者胃癌组织中Vav3、核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)蛋白家族的主要成员RelA、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)的表达情况，并分析了Vav3与胃癌侵袭转移的关系及可能机制，从临床实验角度为了解胃癌侵袭转移机制提供依据。

本研究要点：

Vav3具有原癌基因的特征，在胃癌等恶性肿瘤中表达增高。本课题组前期体外研究也发现，Vav3在胃癌细胞株中表达增高，抑制该基因后肿瘤细胞的增殖、凋亡等过程均出现改变。但这些体外研究的证据与临床组织结果有较大差距，故本研究以临床组织为样本，分析了Vav3与患者临床病理特征的关系，并探讨了Vav3与胃癌侵袭转移相关基因之间可能存在的调控关系。本研究从临床角度证实了Vav3参与胃癌的侵袭转移，也为今后的体外实验及体内试验的开展提供了方向。

1　资料与方法

1.1一般资料选取2014年5月—2015年5月于河北医科大学第四医院外三科住院并行肿瘤切除的胃癌患者92例。其中男68例，女24例；年龄21～86岁，平均年龄(59.7±10.5)岁；中高分化腺癌63例，低分化腺癌29例；术后分期：I～Ⅱ期28例，Ⅲ～Ⅳ期64例。纳入标准：有完整的临床病理资料，术前未接受过放化疗、生物治疗等与肿瘤相关的治疗；有明确的病理学诊断；通过手术切除了原发病灶，有完整的临床病理资料。排除标准：未行手术或手术未能切除原发病灶；合并其他恶性肿瘤；术前接受过放化疗等治疗；肿瘤复发再次手术的胃癌患者。本研究取得所有患者的知情同意，并经河北医科大学第四医院医学伦理委员会批准。

1.2免疫组化法检测Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达收集患者胃癌组织及癌旁正常组织(距肿瘤边缘>3 cm，镜检无癌细胞)的石蜡标本，采用免疫组化法检测Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达，操作严格按免疫组化试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)说明书进行。结果均由两位病理专业医师进行评分。判断标准：Vav3、MMP-2以细胞质及细胞膜出现黄色或棕色颗粒为阳性表达；RelA、PCNA以细胞核出现黄色或棕色颗粒为阳性表达。参照文献[13]对各蛋白的染色强度进行计分：0分记为阴性(-)、1～2分记为弱阳性(+)、3～4分记为阳性(++)、5～6分记为强阳性(+++)，(+)、(++)、(+++)均计为阳性表达；同时以(-)和(+)为弱表达，(++)和(+++)为强表达。

1.3统计学方法使用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析。患者胃癌组织Vav3表达强度与临床病理特征的关系采用χ2检验；Vav3、RelA、PCNA、MMP-2表达之间的关系采用Spearman秩相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌组织及癌旁正常组织的表达胃癌组织中Vav3的阳性表达率为78.3%(72/92)，高于癌旁正常组织的40.2%(37/92)，差异有统计学意义(χ2=27.572，P<0.001)；胃癌组织中RelA的阳性表达率为88.0%(81/92)，高于癌旁正常组织的52.2%(48/92)，差异有统计学意义(χ2=28.242，P<0.001)；胃癌组织中PCNA的阳性表达率为73.9%(68/92)，高于癌旁正常组织的47.8%(44/92)，差异有统计学意义(χ2=13.143，P<0.001)；胃癌组织中MMP-2的阳性表达率为69.6%(64/92)，高于癌旁正常组织的48.9%(45/92)，差异有统计学意义(χ2=8.125，P=0.004，见图1、2，本文图1、2彩图见本刊官网 www.chinagp.net电子期刊相应文章附件)。

2.2Vav3表达强度与临床病理特征的关系Vav3强表达患者性别、年龄、浸润深度、远处转移情况与Vav3弱表达比较，差异无统计学意义(P>0.05)；Vav3强表达患者肿瘤分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移程度与Vav3弱表达比较，差异有统计学意义(P<0.05，见表1)。

2.3相关性分析Vav3表达与RelA、PCNA、MMP-2表达均呈正相关(rs=0.338，P<0.001；rs=0.225，P=0.031；rs=0.267，P=0.010)；RelA表达与PCNA表达呈正相关(rs=0.336，P=0.001)；RelA表达与MMP-2表达无直线相关关系(rs=0.176，P=0.094)；PCNA表达与MMP-2表达无直线相关关系(rs=0.188，P=0.072)。

3　讨论

近年来，胃癌的综合治疗已取得很大进展，但胃癌患者总体生存率仍不能令人满意[2-3]。胃癌存在进展快、易发生淋巴结转移、治疗后易复发等特点，均是导致其综合治疗效果不佳的主要原因。本课题组前期研究发现，Vav3在胃癌细胞株存在表达增高现象，而抑制胃癌细胞株中Vav3表达对胃癌细胞的增殖、侵袭、耐药能力均有积极影响[11-12,14]。本研究检测了Vav3在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达情况，结果显示，胃癌组织中Vav3阳性表达率高于癌旁正常组织，表明Vav3与胃癌的发生有关。Vav3强表达患者肿瘤分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移程度与Vav3弱表达间存在差异，提示Vav3在促进胃癌侵袭转移中发挥了重要作用，通过Vav3检测可对胃癌侵袭转移情况进行预测。但本研究也发现，Vav3与肿瘤浸润深度、远处转移无关。分析其原因一方面可能为胃癌侵袭转移是一个复杂的过程，多种基因共同作用导致胃癌进展，Vav3表达仅发挥了部分作用；另一方面可能为本研究样本较少，还应扩大样本量进行深入探索。

注：PCNA=增殖细胞核抗原，MMP-2=基质金属蛋白酶2

图1Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在胃癌组织中的表达(免疫组化染色，×400)

Figure 1Expression of Vav3,RelA,PCNA,MMP-2 protein in gastric cancer tissue

图2　Vav3、RelA、PCNA、MMP-2在癌旁正常组织中的表达(免疫组化染色，×400)

Table 1Relationship between Vav3 expression in gastric cancer tissue and clinicopathologic features

临床病理特征Vav3强表达(n=72)Vav3弱表达(n=20)χ2值P值性别0.4910.484 男52(72.2)16(80.0) 女20(27.8)4(20.0)年龄(岁)1.1100.292 ≥6041(56.9)14(70.0) <6031(43.1)6(30.0)肿瘤分化程度5.4840.019 中高分化45(62.5)18(90.0) 低分化27(37.5)2(10.0)肿瘤直径(cm)15.947<0.001 ≥547(65.3)3(15.0) <525(34.7)17(85.0)浸润深度4.3820.223 T14(5.6)4(20.0) T217(23.6)4(20.0) T317(23.6)5(25.0) T434(47.2)7(35.0)淋巴结转移程度18.853<0.001 N05(6.9)5(25.0) N15(6.9)7(35.0) N238(52.8)6(30.0) N324(33.4)2(10.0)远处转移0.2250.635 M064(88.9)17(85.0) M18(11.1)3(15.0)

注：T1=肿瘤侵犯黏膜或黏膜下层，T2=肿瘤侵犯固有肌层，T3=肿瘤穿透浆膜下层结缔组织但未侵犯脏层腹膜或邻近结构，T4=肿瘤侵犯浆膜或邻近组织，N0=无区域淋巴结转移，N1=1～2个区域淋巴结转移，N2=3～6个区域淋巴结转移，N3=≥7个区域淋巴结转移，M0=无远处转移，M1=存在远处转移

RelA是NF-κB蛋白家族的5个成员之一，NF-κB蛋白家族作为重要的信号转导通路，在肿瘤的进展中发挥了重要作用[15-16]。PCNA存在于细胞核内，为DNA聚合酶δ的辅助蛋白，在增殖旺盛的肿瘤细胞内表达明显增高，是反映细胞增殖状态的蛋白质[17-18]。MMP-2是基质金蛋白酶(MMPs)家族的重要成员，对促进肿瘤细胞侵袭转移有重要作用。目前认为，MMP-2在肿瘤细胞破坏细胞间基质及突破基底膜的过程中发挥了重要作用[19-20]。本研究结果显示，胃癌组织中RelA、PCNA、MMP-2阳性表达率均高于癌旁正常组织，表明这些蛋白在胃癌癌变过程中发挥了作用。

有研究发现，Vav3可增强NF-κB信号转导通路的活性[21]。本课题组前期研究发现，Vav3具有上调PCNA、MMP-2表达的作用[10-11]。本研究结果显示，Vav3表达与RelA、PCNA、MMP-2表达均呈正相关，提示Vav3可能通过调控这些蛋白促进了肿瘤的侵袭转移。

综上所述，Vav3在胃癌组织中存在过表达现象，Vav3表达与肿瘤转移相关指标存在关系，且与调节肿瘤细胞侵袭转移的蛋白存在相关性。但本研究仅对临床发现的现象进行了理论上的分析，结果可能存在较大的推测性质。今后一方面要进一步扩大样本量，确定Vav3基因与胃癌的关系；另一方面还要结合本课题组前期体内试验、体外实验研究结果[10-11,13]，将Vav3基因检测推向临床。

作者贡献：温转进行试验设计与实施、资料收集整理、研究质量控制、撰写论文、成文、审校等工作；李勇对试验设计、实施、论文撰写等工作进行指导和质量控制，并对文章负责；王晓、檀碧波、刘庆伟、贾楠进行资料收集、试验实施及结果分析、统计处理等。

本文无利益冲突。

[1]LI Y,TAN B B,FAN L Q,et al.Heterogeneity for COX-2,multidrugs resistance between primary tumors and regional lymph node metastases of gastric cancer[J].Tumori,2012,98(4):516-522.

[2]LI Y,ZHAO Q,FAN L Q,et al.Analysis of lymph node dissection range-related factors for early gastric cancer operation[J].Hepato-Gastroenterology,2013,60(125):971-974.

[3]丁荣楣，王平.维康达联合顺铂治疗进展期胃癌疗效观察及护理[J].中国煤炭工业医学杂志，2013，16(10)：1724-1725.

[4]MIHMANLI M,ILHAN E,IDIZ U O,et al.Recent developments and innovations in gastric cancer[J].World J Gastroenterol,2016,22(17):4307-4320.

[5]吴玉波，刘干忠，王永良.血清CEA、CA199、CA724联合检测对胃癌的诊断价值[J].疑难病杂志，2012，11(1)：50.

[6]CHEN X,CHEN S I,LIU X A,et al.Vav3 oncogene is upregulated and a poor prognostic factor in breast cancer patients[J].Oncol Lett,2015,9(5):2143-2148.

[7]TRENKLE T,HAKIM S G,JACOBSEN H C,et al.Differential gene expression of the proto-oncogene VAV3 and the transcript variant VAV3.1 in oral squamous cell carcinoma[J].Anticancer Res,2015,35(5):2593-2600.

[9]LIN K T,GONG J,LI C F,et al.Vav3-rac1 signaling regulates prostate cancer metastasis with elevated Vav3 expression correlating with prostate cancer progression and posttreatment recurrence[J].Cancer Res,2012,72(12):3000-3009.

[10]LIN K Y,WANG L H,HSEU Y C,et al.Clinical significance of increased guanine nucleotide exchange factor Vav3 expression in human gastric cancer[J].Mol Cancer Res,2012,10(6):750-759.

[11]TAN B,LI Y,ZHAO Q,et al.Inhibition of gastric cancer cell growth and invasion through siRNA-mediated knockdown of guanine nucleotide exchange factor Vav3[J].Tumour Biol,2014,35(2):1481-1488.

[12]檀碧波,李勇,范立侨,等.Vav3基因对人胃癌 SGC7901细胞增殖能力的影响及其机制[J].中华肿瘤杂志,2015,37(3):175-180.

TAN B B,LI Y,FAN L Q,et al.Effect and mechanism of Vav3 on the proliferation of human gastric cancer SGC7901 cells[J].Chinese Journal of Oncology,2015,37(3):175-180.

[13]檀碧波,李勇,赵群,等.胃癌区域转移淋巴结中锌指蛋白139与基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-7、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1表达的关系及意义[J].中华实验外科杂志,2013,30(5):951-953.

TAN B B,LI Y,ZHAO Q,et al.Relationship between zinc finger protein 139 with matrix metalloproteinase-2,matrix metailoproteinase-7 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in local lymph node metastases of gastric cancer[J].Chinese Journal of Experimental Surgery,2013,30(5):951-953.

[14]TAN B,LI Y,ZHAO Q,et al.Inhibition of Vav3 could reverse the drug resistance of gastric cancer cells by downregulating JNK signaling pathway[J].Cancer Gene Ther,2014,21(12):526-531.

[15]LI S,PINARD M,WANG Y,et al.Crosstalk between the TNF and IGF pathways enhances NF-κB activation and signaling in cancer cells[J].Growth Horm IGF Res,2015,25(5):253-261.

[16]KONG X J,DUAN L J,QIAN X Q,et al.Tumor-suppressive microRNA-497 targets IKKβ to regulate NF-κB signaling pathway in human prostate cancer cells[J].Am J Cancer Res,2015,5(5):1795-1804.

[17]LI X,LIU X,CUI D,et al.Clinical significance of nucleostemin and proliferating cell nuclear antigen protein expression in non-small cell lung cancer[J].J BUON,2015,20(4):1088-1093.

[18]SMITH S J,GU L,PHIPPS E A,et al.A Peptide mimicking a region in proliferating cell nuclear antigen specific to key protein interactions is cytotoxic to breast cancer[J].Mol Pharmacol,2015,87(2):263-276.

[19]GAO Y,GUAN Z,CHEN J,et al.CXCL5/CXCR2 axis promotes bladder cancer cell migration and invasion by activating PI3K/AKT-induced upregulation of MMP2/MMP9[J].Int J Oncol,2015,47(2):690-700.

[20]LIU R R,LI M D,LI T,et al.Matrix metalloproteinase 2(MMP2) protein expression and laryngeal cancer prognosis:a meta analysis[J].Int J Clin Exp Med,2015,8(2):2261-2266.

[21]VIGORITO E,GAMBARDELLA L,COLUCCI F,et al.Vav proteins regulate peripheral B-cell survival[J].Blood,2005,106(7):2391-2398.

(本文编辑：李婷婷)

Relation Between Vav3 Expression and Tumor Invasion and Metastasis in Gastric Cancer Tissue and the Clinical Significance

WENZhuan,WANGXiao,TANBi-bo,etal.

DepartmentofHealthCare,theFourthAffiliatedHospital,HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050011,China

ObjectiveTo investigate the relation between Vav3 expression and tumor invasion and metastasis in gastric cancer tissue and the clinical significance.MethodsWe collected the paraffin specimens of gastric cancer tissue and carcinoma side normal tissue from 92 patients who2=27.572,P<0.001).The positive expression rate of RelA in gastric cancer tissue was 88.0%(81/92),higher than 52.2%(48/92) in carcinoma side normal tissue(χ2=28.242,P<0.001).The positive expression rate of PCNA in gastric cancer tissue was 73.9%(68/92),higher than 47.8%(44/92) in carcinoma side normal tissue(χ2=13.143,P<0.001).The positive expression rate of MMP-2 in gastric cancer tissue was 69.6%(64/92),higher than 48.9%(45/92) in carcinoma side normal tissue(χ2=8.125,P=0.004).There was no significant difference in gender,age,depth of infiltration,and distant metastasis between high expression of Vav3 and low expression of Vav3(P>0.05).There was significant difference in tumor differentiation degree,tumor diameter and the extent of lymph node metastasis between high expression of Vav3 and low expression of Vav3(P<0.05).The expression of Vav3 had positive correlation with the expression of RelA,PCNA and MMP-2(rs=0.338,P<0.001;rs=0.225,P=0.031;rs=0.267,P=0.010).The expression of RelA had positive correlation with the expression of PCNA(rs=0.336,P=0.001);the expression of RelA had no linear correlation with the expression of MMP-2(rs=0.176,P=0.094).The expression of PCNA had no linear correlation with the expression of MMP-2(rs=0.188,P=0.072).ConclusionThere is overexpression of Vav3 in gastric cancer tissue,and the increase of Vav3 is associated with tumor metastasis and progress.Vav3 is involved in the progress and metastasis of gastric cancer by regulating RelA,PCNA and MMP-2 expression.

resection for gastric carcinoma in the Third Surgery Department of the Fourth Affiliated Hospital of Hebei Medical University from May 2014 to May 2015.The expressions of Vav3,RelA,PCNA and MMP-2 in gastric cancer tissue and carcinoma side normal tissue were detected by immunohistochemistry staining.The relation between Vav3 expression and clinical and pathological characteristics in gastric cancer tissue was analyzed.The relation among Vav3,RelA,PCNA and MMP-2 expression was investigated by Spearman correlation analysis.ResultsThe positive expression rate of Vav3 in gastric cancer tissue was 78.3%(72/92),higher than 40.2%(37/92) in carcinoma side normal tissue(χ

Stomach neoplasms;Neoplasm invasiveness;Neoplasm metastasis;Vav3 protein

国家自然科学基金资助项目(81072033,81372580)；河北省科技支撑项目(14277779D)；河北省卫计委医学科学研究重点课题(20150340)

050011河北省石家庄市，河北医科大学第四医院干部保健处(温转)，外三科(檀碧波，李勇，刘庆伟，贾楠)；河北省人民医院医疗美容科(王晓)

李勇，050011河北省石家庄市，河北医科大学第四医院外三科；E-mail：li_yong_hbth@126.com

R 735.2

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.21.004

2015-11-17；

2016-03-26)