榄绿粗叶木水提物体外抗菌效果的初步探讨

谢永华 王冠明 吴梅姐 温扬敏



榄绿粗叶木水提物体外抗菌效果的初步探讨

谢永华 王冠明 吴梅姐 温扬敏

【摘 要】目的：榄绿粗叶木水提物的体外抑菌活性。方法：运用药敏实验和最小抑菌浓度（MIC）检测法测定金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、枯草牙胞杆菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌的抑菌直径和MIC值。结果：金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌对水提物高敏感，枯草牙胞杆菌为中敏感，而铜绿假单胞菌为低敏感。水提物对以上四种细菌的MIC分别为12.5mg/ml、12.5mg/ml、50mg/ml、100mg/ml。结论：榄绿粗叶木水提物对其中4种细菌有不同程度的抑菌效果。

【关键词】榄绿粗叶木 水提物 药敏实验 MIC

作者单位：泉州医学高等专科学校 泉州 362000

2015-12-11收稿，2016-01-07修回

榄绿粗叶木属于茜草科、粗叶木属的日本粗叶木的变种，为我国所特有的一种植物，主要产于江苏、浙江、福建和贵州等地。有研究表明可以从粗叶木属植物的根、茎中分离一些可以抗肿瘤与抗炎等效果的活性物质。徐斌等研究表明罗浮粗叶木含有保护肝脏损伤的有效成分［1］。温扬敏等研究证明榄绿粗叶木具有体外抑制人食管癌细胞增殖的作用［2］。榄绿粗叶木生命力强，且资源丰富。然而针对榄绿粗叶木的药理研究的相关文献很少。本次试验拟对榄绿粗叶木的抗菌效果进行初步评价，为其生物学特性和临床应用积累一些基础研究资料。

1　材料与方法

1.1材料与设备 榄绿粗叶木购于福建省三明市宁化县草药市场，并经泉州市林业局原动植物高级管理员林彦云先生鉴定。金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、枯草牙胞杆菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌购于上海川翔生物科技有限公司，LB固体培养基、LB液体培养基干、一次性细菌培养皿（上海生工），电热恒温培养箱，多功能粉碎机，冷冻干燥机（上海精宏），紫外分光光度计（岛津）。

1.2实验方法

1.2.1水提物的制备 榄绿粗叶药材用中药粉碎机粉碎后，称取100g放入烧瓶，加5倍量蒸馏水。浸泡30min后，加热煮沸1h，滤纸过滤。旋转蒸发，浓缩，真空干燥至粉末，放置于冰箱中4℃保存。

1.2.2菌种的活化与菌液的制备［3］将供试菌种分别移接于相应的斜面培养基活化，37℃培养24h。将活化好的细菌，分别挑取单个菌落转接于生理盐水中制成细菌悬液。然后用0.5号麦氏比浊管作为标准，将每种菌液稀释至1×108个/ml，作为实验菌液备用。

1.2.3药敏试纸片的制备 用定性滤纸做成5mm直径的圆形滤纸片，高压灭菌后烘干备用。称取榄绿粗叶木水提物干粉，用无菌ddH2O配制成浓度分别有90mg/ml的水溶液，用0.22μm无菌滤膜过滤除菌。然后将无菌圆形滤纸片放入榄绿粗叶木水提物样品溶液浸泡1h后，取出烘干。

1.2.4药物敏感性实验［4］无菌吸取方法1.2.2制作的各种细菌液体100μl放入无菌平皿中，再加入45℃的无菌固体培养基约10ml，混匀后置于水平无菌工作台上冷却，制作成含有相应细菌的平板。将方法1.2.3制作的药敏试纸片贴于平板上，每个药敏试纸间的间距≥20mm，并设阴性对照组。实验平板置于37℃培养箱培养24h。测定抑菌圈的大小。

结果评判标准：抑菌圈直径为6～10mm为低敏感；抑菌圈直径为11～15mm为中敏感；抑菌圈直径为16～20mm为高敏感。

1.2.5最小抑菌浓度（MIC）的测定［5］制作含榄绿粗叶木水提物浓度分别为400、200、100、50、25、12.5mg/ml的细菌液体培养基。不同药物浓度的细菌培养基分别接种一种细菌，于37℃培养 24h。不接种细菌的各药物浓度的细菌培养基作为细菌空白对照组。各实验组和空白对照组的培养液用紫外分光光度计测定吸光值。根据两者的吸光值判断榄绿粗叶木水提物的最小抑菌浓度（MIC）。

2　结 果

2.1药物敏感性实验结果 榄绿粗叶木水提物的抑菌效果见表1。结果表明，金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌对榄绿粗叶木水提物高敏感，枯草牙胞杆菌对水提物中敏感，铜绿假单胞菌对其低敏感，而对大肠杆菌无抑制效果。

表1　榄绿粗叶木水提物的药敏实验

2.2榄绿粗叶木水提物的最低抑菌浓度（MIC） 榄绿粗叶木水提物的MIC的检测结果见表2。榄绿粗叶木水提物对金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的 MIC 为12.5mg/ml， 显示了榄绿粗叶木水提物对这两种细菌有较好的抑制效果。对枯草牙胞杆菌的MIC为50mg/ml；对铜绿假单胞菌的MIC为100mg/ml；对大肠杆菌的MIC为400mg/ml。这一实验结果可以和药物敏感性实验结果相吻合。

表2　榄绿粗叶木水提物的MIC值

3　讨 论

粗叶木属植物主要分布于我国南方各省。《新华本草纲要》记载粗叶木植物在我国民间被用来治疗“湿热黄疸”［6］。文献报道福建宁化县治平畲族乡当地群众将罗浮粗叶木植物用来治疗黄疸并消除患者的疲劳乏力等症状［7］。《全国中草药汇编》记载粗叶木属植物具有祛风胜湿、行气活血、强筋健骨等功效。榄绿粗叶木是一个变种的粗叶木属植物，故推测其可能具有一定的抗炎药效。

金黄色葡萄球菌是常见的临床致病菌之一，可引起化脓感染。肺炎克雷伯菌是院内感染败血症中的一种重要病原菌。由于抗生素的大量使用，已使得部分细菌发生变异进而诱发其耐药性的产生。研究人员发现了一种具有多重耐药性的肺炎克雷伯菌，可以有效地分解抗生素，致使感染患者抵抗力低［8］。为此，运用中草药为寻找抗生素的替代药物开辟一条新的途径。本研究表明榄绿粗叶木水提物对金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌具有较好的抑菌活性。

参考文献

1 徐斌，谢志春，林新勤，等.罗浮粗叶木醇提物治疗鸭乙型肝炎的实验研究［J］.现代预防医学，2010，37（14）：2710～2712.

2 温扬敏，万端静，谢永华，等.榄绿粗叶木茎甲醇提取物对人食管癌EC-9706细胞增殖的影响及其机制探讨［J］.山东医药，2015，55（40）：11～13.

3 卢添林，黄梦姣，程悦，等.普洱茶水提物体外抑菌效果研究［J］.现代预防医学，2015，42（2）：313～315.

4 张雁，李健雄，丘银清，等.苦瓜水提物抑菌作用的初步探讨［J］.食品工业科技，2009，12（29）：104～105.

5 姚淑敏.芦荟提取物抑菌作用的研究［J］.食品科学，2002，23（4）：137～139.

6 胡恩，陈清容，陈坤全.治疗黄疸的民间良药黄痧药［J］.中国民间疗法，2006，2（14）：33.

7 陈坤全，胡恩，陈清容.关于福建宁化黄痧药原植物的研究［J］.海峡药学，2005，17（4）：103～104.

8 刘婧娴，俞静，刘瑛.产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药基因及流行病学研究进展［J］.中国感染与化疗杂志，2015，15（1）：91～96.

/（编审：张善堂）

Antimicrobial effect of aqueous extract from lasianthus lancilimbus in vitro

Quanzhou Medical College，Quanzhou 362000，China
XIE Yong-hua，WANG Guan-ming，WU Mei-jie，et al

Abstract:Objective:To study the antimicrobial effect of aqueous extract from lasianthus lancilimbus in vitro. Methods:The antimicrobial activity and MIC of Staphylococcus aureus，Klebsiella pneumoniae，Bacillus subtilis，Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli were determined by drug sensitive test and minimal inhibitory concentration（MIC）.Results:Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumoniae were highly sensitive to aqueous extract，Bacillus subtilis was sensitive，while Pseudomonas aeruginosa was low sensitive， which MICs were 12.5mg/ mL，12.5mg/ml，50mg/ml and100mg/ml respectively.Conclusions:aqueous extract of lasianthus lancilimbus can inhibit the above 4 kinds of bacteria in vitro.

Key Words:Lasianthus lancilimbus；Aqueous extract；Drug sensitive test；MIC

【中图分类号】R285

【文献标识码】A

【文章编号】1671-8054（2016）02-0145-02

基金项目：泉州市科技计划重点项目（编号：2013Z112）

作者简介：谢永华，男，硕士研究生