子宫内膜癌患者组织中COX-2蛋白及VEGF的表达及临床意义

2016-06-29李志英

中国老年学杂志 2016年10期

关键词：阳性细胞切片内皮细胞

王　玎　李志英　罗　飞

(三峡大学仁和医院妇科，湖北　宜昌　443001)

子宫内膜癌患者组织中COX-2蛋白及VEGF的表达及临床意义

王玎李志英罗飞

(三峡大学仁和医院妇科，湖北宜昌443001)

〔摘要〕目的探讨环氧合酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜癌组织中的表达及与临床病理因素的相关性。方法选取正常子宫内膜组织、子宫内膜非典型增生组织、子宫内膜癌组织各60例，采用免疫组化技术检测标本中COX-2和VEGF的表达，并分析其与患者的临床病理之间的关系。结果COX-2、VEGF在不同子宫内膜组织中的阳性表达存在差异(P<0.05)，其中子宫内膜癌组织中COX-2、VEGF阳性表达最高。COX-2的表达与是否伴随淋巴结转移有关(P<0.05)，VEGF的表达与病理分级、FIGO分期及是否伴随淋巴结转移有关(P<0.05)。子宫内膜癌组织中COX-2和VEGF的表达呈正相关(r=0.508，P=0.000)。结论COX-2和VEGF高表达可能和子宫内膜癌发生发展有关，可作为子宫内膜癌诊断和预后判断的有效指标之一。

〔关键词〕子宫内膜癌；环氧合酶-2；血管内皮生长因子；VEGF；基因表达

肿瘤的发生和细胞增殖、凋亡失衡及肿瘤血管生成密切相关〔1〕。环氧合酶-2(COX-2)是花生四烯酸合成前列腺素过程中一种重要的限速酶，其过度表达可促进肿瘤血管生成，与肿瘤的发生、发展有关〔2〕。血管内皮生长因子(VEGF)又称为血管通透性因子，可以增强血管内皮细胞有丝分裂活性，并促进内皮细胞的活化与迁移，积极参与子宫内膜癌的生长和浸润过程〔3〕。本研究利用免疫组化方法分析COX-2和VEGF在子宫内膜癌组织中的表达及其与子宫内膜癌的临床病理特征的关系。

1资料和方法

1.1一般资料选取2013年1月至2015年6月于我院进行手术治疗的子宫内膜癌患者60例。另选取我院同期接诊的子宫内膜非典型增生患者60例，以及经病理检查为正常子宫内膜者60例，取所有研究对象的活检标本进行免疫组化染色。所有研究对象在就诊前均未行放射治疗、化疗治疗，并排除合并有心、脑、肾重要器官功能障碍、凝血系统障碍、出血疾病者。子宫内膜癌患者年龄45～66〔平均(56.1±13.8)〕岁；子宫内膜非典型增生患者年龄44～67〔平均(55.9±14.5)〕岁；正常子宫内膜者年龄47～75〔平均(57.9±17.6)〕岁。三组患者年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2主要试剂鼠抗人COX-2蛋白单克隆抗体购于上海罗氏生物有限公司。鼠抗人VEGF单克隆抗体及免疫组化试剂盒购于福州迈新生物制品公司。

1.3方法

1.3.1COX-2、VEGF表达水平采用SP免疫组化法检测COX-2、VEGF表达水平，严格按试剂盒说明书步骤进行操作。用石蜡将标本包埋后备用，进行苏木素-伊红(HE)染色。每份标本取3份切片，石蜡标本组织连续性切片，切片厚4 μm，常规脱蜡、水化。行高温高压及微波抗原修复处理，一抗4℃过夜，加入二抗后常温孵育30 min，二氨基联苯胺(DBA)显色，显色后再使用苏木精复染，中性树脂脱水封固后判断结果。用试剂公司提供的强阳性标本切片作为阳性对照，磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。

1.3.2观察指标在400倍光镜下由同一实验人员对切片结果进行判断，每份切片取10个高倍镜视野采取双盲法阅片，观察记录切片中阳性细胞占同类观察细胞总数量的百分比和其着色强度。①阳性细胞的判定标准：棕黄色染色颗粒主要位于细胞核内，或者胞核伴胞质内，若只有胞质出现棕黄色为非特异性染色。染色强度评分标准：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；②阳性细胞所占的百分比计分标准：阴性为0分，阳性细胞 ≤10%为1分，阳性细胞11%～50%为2分，阳性细胞51%～75%为3分，阳性细胞>75%为4分。切片阳性判断标准为染色强度与阳性细胞百分比的分值乘积在3分或以上。

1.4临床资料收集收集所选子宫内膜癌患者的病理和临床诊断资料，分别记录年龄、病理分级、子宫内膜癌国际妇产科协会(FIGO)分期〔4〕、子宫肌层浸润深度及是否淋巴结转移。

1.5统计学方法应用SPSS21.0软件，计数资料比较采用χ2检验，COX-2和VEGF表达的相关性采用Spearman等级相关进行分析。

2结果

2.1COX-2和VEGF在不同子宫内膜组织中的阳性表达情况在不同子宫内膜组织中的COX-2、VEGF阳性表达存在差异(χ2=68.546，P=0.000；χ2=67.950，P=0.000)，其中COX-2、VEGF在子宫内膜癌组织中阳性表达最高。见表1。

2.2子宫内膜癌患者临床病理指标与COX-2和VEGF表达的关系COX-2的表达与是否伴随淋巴结转移相关(P<0.05)，与年龄、病理分级、FIGO分期及子宫肌层浸润深度无明显的相关性(P>0.05)；VEGF的表达与病理分级、FIGO分期及是否伴随淋巴结转移相关(P<0.05)，年龄及子宫肌层浸润深度无明显的相关性(P>0.05)。见表2。

表1　不同子宫内膜组织中COX-2和VEGF的

不同组间比较：1)P<0.05

2.3COX-2和VEGF在子宫内膜癌组织中表达的相关性在子宫内膜癌组织中，COX-2、VEGF双阳性37例，双阴性11例，仅COX-2或VEGF阳性6例。Spearman相关性检验结果可见，COX-2和VEGF的表达呈正相关，Spearman相关系数r=0.508(P=0.000)。

3讨论

COX-2参与肿瘤生长的机制包括：(1)COX-2 过度表达产生的前列腺素诱导原癌基因的表达，直接抑制细胞的凋亡并促进细胞生长；(2)抑制免疫细胞增殖，导致免疫功能降低；(3)抑制肿瘤坏死因子；(4)促进血管形成〔5，6〕。本研究结果提示，COX的过度表达可能和子宫内膜癌的形成有关，并参与子宫内膜癌的远程转移过程，这和前人的研究结果〔7〕类似。

VEGF 是一种高度特异性的血管内皮细胞有丝分裂素，可以在生理或病理情况下提高微血管通透性，增强血管内皮细胞有丝分裂活性，并促进内皮细胞的活化与迁移，导致体液与蛋白渗出，是最重要的一种促血管生成蛋白〔8〕。研究发现，VEGF及VEGF mRNA在很多实体癌如肝癌、宫颈癌、肺非小细胞癌等组织中表达较正常组织明显升高并和预后有密切关系〔9〕。本研究结果提示VEGF的高表达和子宫内膜癌的形成发展过程密切相关，预示着高侵袭性及易转移性，子宫内膜癌组织中VEGF的高表达可以作为子宫内膜癌诊断和预后判断的有效指标之一。VEGF可能是通过促进内皮细胞的分化和增生发生迁移以及浸润，调控血管的生成以及维持血管内皮细胞，从而促进肿瘤形成与发展〔10〕。

本次研究还提示COX-2和VEGF在子宫内膜癌的局部浸润、远处转移及血管生成过程中具有协同作用。这和以往的研究结果一致〔11〕。

综上所述，COX-2和VEGF异常表达可能和子宫内膜癌发生发展有关，可以作为子宫内膜癌诊断和预后判断的有效指标之一。

4参考文献

1陈红漫，赵振苓，袁莉，等.IGF-1和COX-2在子宫内膜癌中的表达及其临床意义〔J〕.天津医药，2013；41(1)：18-21.

2林瑞芳.人子宫内膜癌组织COX-2和CD44V6及Bcl-2表达临床意义分析〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2013；20(15)：1172-4.

3郑伟，张新，贾琳.Survivin蛋白及VEGF在子宫内膜癌中的表达及相关性分析〔J〕.中国实验诊断学，2013；17(3)：498-500.

4林仲秋，吴珠娜.FIGO 2009外阴癌、宫颈癌和子宫内膜癌新分期解读〔J〕.国际妇产科学杂志，2009；36(5)：411-2.

5刘丹丹，江培.COX-2及COX-2抑制剂对肿瘤防治作用的研究进展〔J〕.黑龙江医药，2014；27(1)：1024-6，1027.

6黄晓静，姚和权，吴晓明，等.环氧合酶-2抑制剂类抗肿瘤药物研究进展〔J〕.药学与临床研究，2013；21(3)：251-6.

7桂影，王丽娟.Survivin和COX-2在老年子宫内膜癌中的表达及其与临床病理特征的关系〔J〕.中国老年学杂志，2013；33(2)：437-8.

8李伊培，郗永义，张连成，等.抗VEGF/VEGFR靶向肿瘤血管药物的研究进展〔J〕.现代生物医学进展，2014；14(16)：3158-62.

9李晖，李亭葶，王熙才.VEGF-C/VEGFR-3在恶性肿瘤淋巴转移中的作用及研究进展〔J〕.现代肿瘤医学，2013；21(12)：2875-7.