芪黄疽愈方对肢体动脉硬化闭塞症大鼠血脂水平的影响※

张　欣　刘　远　葛建立　马云龙　李晓东　张青天

(河北省中医院外科，河北　石家庄　050011)

芪黄疽愈方对肢体动脉硬化闭塞症大鼠血脂水平的影响※

张欣刘远葛建立△马云龙李晓东1张青天

(河北省中医院外科，河北石家庄050011)

【摘要】目的观察芪黄疽愈方对肢体动脉硬化闭塞症(ASO)大鼠血脂水平的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为6组，空白组、模型组、西药组及芪黄疽愈方低、中、高剂量组，每组各10只。应用高脂饲料喂饲及隐动脉内膜损伤的方法制作大鼠 ASO 模型。空白组予普通饮食喂养。模型组予0.9%氯化钠注射液灌胃。芪黄疽愈方低、中、高剂量组均予相应剂量芪黄疽愈方灌胃。西药组予注射用前列地尔干乳剂腹腔注射，西洛他唑片灌胃。除空白组外，其余5组均高脂饲料喂养，并在实验开始时在大鼠右下肢肌肉注射维生素D3注射液。比较各组大鼠血脂水平变化。结果模型组血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)均较空白组升高(P<0.01)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低(P<0.01)，说明造模成功。芪黄疽愈方低剂量组仅TG较模型组降低(P<0.01)，芪黄疽愈方中剂量组仅TC、TG较模型组降低(P<0.01)，芪黄疽愈方高剂量组、西药组TC、TG、LDL-C及VLDL-C均较模型组降低(P<0.01)，HDL-C升高(P<0.01)。芪黄疽愈方高剂量组HDL-C高于西药组(P<0.01)。结论芪黄疽愈方可降低血清TC、TG、LDL-C及VLDL-C，升高HDL-C，通过改善血脂代谢紊乱，达到治疗ASO目的。

【关键词】动脉硬化，闭塞性；动物，实验；黄芪；黄精；中药疗法

肢体动脉硬化闭塞症(arteriosclerosis obliterans，ASO)是由动脉粥样硬化斑块形成引起肢体动脉狭窄、闭塞，进而导致肢体慢性缺血。随着我国生活方式的改变和人口老龄化，ASO的发病率逐年提高，且发病率随年龄增长而上升，70岁以上人群的发病率在15%～20%，男性发病率略高于女性[1]。大量研究证实，高脂血症是动脉粥样硬化的重要危险因子，血浆脂蛋白、低密度脂蛋白水平持续升高，与动脉粥样硬化的发病率呈正相关，高甘油三酯(TG)也是ASO的独立危险因素[2]。本研究通过探讨芪黄疽愈方对实验大鼠血脂的影响，为中医药治疗ASO提供理论基础。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物8～10个月龄清洁级 Wistar 大鼠60只，体质量(200±20)g，由河北医科大学实验动物中心提供，动物质量合格证号：1504024。实验室温度为21～25 ℃，湿度为40%～60%，自由饮水，每日光照12 h。

1.1.2实验试剂及仪器日立7600-020型全自动生化分析仪[日本株式会社日立高新技术，进口产品注册号：国食药监械(进)字2011第2401157号]。

1.1.3高脂饲料配制83.85%基础饲料，5%猪油，1%胆固醇，0.15%胆酸钠及10%蛋黄粉[3]，其中胆固醇、胆酸钠、蛋黄粉均购于石家庄市勃盛化学试剂有限公司，猪油购于市场。

1.1.4实验药物芪黄疽愈方药物组成：黄芪20 g，黄精12 g，红花12 g，鬼箭羽12 g，土鳖虫9 g，鸡血藤15 g，延胡索12g，牛膝9 g，海藻12 g。按原方的组方比例，并根据体表面积的比率折算出200 g大鼠的等效用药剂量作为芪黄疽愈方中剂量组用量，另取其1/2 剂量和2倍剂量作为芪黄疽愈方低剂量组和芪黄疽愈方高剂量组。由河北省中医院药剂科统一购买饮片，并请河北省中医院药剂科主任鉴定，符合中华人民共和国药典(2005年版) 各项规定，由河北省中医院煎药室煎制，4 ℃冰箱保存，芪黄疽愈方中剂量组的最终剂量为0.75 g生药/mL，低剂量组为0.35 g生药/mL，高剂量组为1.5 g生药/mL，实验过程中每次中药制剂均按同一标准进行。注射用前列地尔干乳剂(重庆药友制药有限责任公司，国药准字H20100047)；西洛他唑片(浙江大冢制药有限公司，国药准字H10960014)；维生素D3注射液(上海通用药业股份有限公司，国药准字H31021404)。

1.2方法

1.2.1选择分组将60只Wistar大鼠随机分为6组，空白组、模型组、西药组及芪黄疽愈方低、中、高剂量组，每组各10只。

1.2.2模型制作应用高脂饲料喂饲及隐动脉内膜损伤的方法制作大鼠 ASO 模型[4]。①实验前适应性喂养1周，排除饮食异常大鼠，空白组予普通饮食喂养，其余5组均予高脂饲料喂养1周。②于清洁动物实验室内用1%戊苯巴比妥钠1 mL/200 g腹腔注射麻醉，除空白组外，其余5组每只大鼠取左后肢消毒，从腹股沟中点向后肢内侧纵行切开皮肤，分离并暴露隐动脉，用动脉夹阻断隐动脉远近端约1.5～2.0 cm，取胰岛素注射器1支，沿隐动脉血管长轴由远端向近端刺入血管腔，将注射用无菌蒸馏水0.2～0.3 mL缓慢注入阻断部位血管，至血管充盈为止，5 min后取下针头和动脉夹，压迫止血，缝合切口，内膜损伤模型完成，共造模50只大鼠。

1.2.3给药方法空白组普通饮食喂养，自由饮水。模型组予0.9%氯化钠注射液1 mL/100 g灌胃，每日1次，连续12周，自由饮水。芪黄疽愈方低、中、高剂量组均予相应剂量芪黄疽愈方灌胃(1 mL/100 g体质量)，每日1次，连续12周，自由饮水。西药组予注射用前列地尔干乳剂0.4 μg/(kg·d)腹腔注射，每日1次，持续2周；西洛他唑片18 mg/kg体质量灌胃，每日 1次，连续12周，自由饮水。除空白组外，其余5组均高脂饲料喂养，并在实验开始时在大鼠右下肢肌肉注射维生素D3注射液3×105U/kg体质量，每隔30 d重复1次。

1.3标本采集及处理方法麻醉大鼠方法同前，腹部消毒，剪开皮肤，由腹主动脉采血2～4 mL，在全自动生化分析仪上测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)含量。

2结果

各组大鼠血脂水平比较见表1。

组 别nTCTGHDL-CLDL-CVLDL-C空白组101.80±0.080.72±0.090.63±0.081.03±0.080.43±0.07模型组102.98±0.55*1.44±0.31*0.43±0.06*2.27±0.38*0.80±0.13*芪黄疽愈方低剂量组102.75±0.140.89±0.08△0.42±0.082.21±0.170.76±0.15芪黄疽愈方中剂量组102.51±0.38△0.82±0.07△0.46±0.06△2.04±0.160.69±0.07芪黄疽愈方高剂量组102.24±0.16△0.76±0.07△0.50±0.09△#1.72±0.22△0.59±0.08△西药组102.26±0.27△0.83±0.14△0.47±0.04△2.05±0.09△0.69±0.07△

与空白组比较，*P<0.01；与模型组比较，△P<0.01；与西药组比较，#P<0.01

由表1可见，模型组血脂TC、TG、LDL-C及VLDL-C均较空白组升高(P<0.01)，HDL-C降低(P<0.01)，说明造模成功。芪黄疽愈方低剂量组仅TG较模型组降低(P<0.01)；芪黄疽愈方中剂量组仅TC、TG较模型组降低(P<0.01)，HDL-C升高(P<0.01)；芪黄疽愈方高剂量组、西药组TC、TG、LDL-C、VLDL-C均较模型组降低(P<0.01)，HDL-C升高(P<0.01)。芪黄疽愈方高剂量组HDL-C高于西药组(P<0.01)。

3讨论

血脂代谢紊乱与动脉粥样硬化形成已经过大量的临床及动物实验证实，血脂水平对ASO的发生及严重程度有着直接的影响，其中以LDL-C升高和HDL-C降低为其关键的易患因素。大量流行病学研究已证实，血脂异常与冠状动脉粥样硬化及脑血栓发生的危险性呈正相关。在动脉硬化病变中的脂质主要是由血浆中的脂质渗入，其途径有以下几种方式：①内皮细胞直接吞饮；②透过内皮细胞间隙；③经由内皮细胞的低密度脂蛋白受体；④通过受损后通透性增加的内皮细胞；⑤通过因内皮细胞缺失而直接暴露在血流的内膜组织，进入内膜和中层的物质，代谢后其分解产物易于溶解，经外膜的毛细血管和淋巴系统排出[5]。脂蛋白中只有胆固醇不能在血管中代谢，最后沉积，刺激纤维组织增生，形成动脉粥样斑块。ASO是全身性动脉粥样硬化在肢体局部的表现，因此调脂治疗也成为防治ASO的重要手段。

ASO属中医学脱疽范畴，《素问·生气通天论》谓“膏梁之变，足生大疔”，清代王清任在《医林改错·下卷》中指出“元气既虚，必不能达于血管，血管无气，必停留而瘀”。平素喜食肥甘厚味，致肝失疏泄，脾失健运，中焦气机不利，饮食水谷不化气血津液，元气虚弱，血无气之推动，瘀阻脉道，而成脱疽。而芪黄疽愈方针对脱疽之瘀阻脉络的病机综合治疗，临床疗效明显。方中黄芪、黄精补气健脾益肾；红花、延胡索、鸡血藤活血化瘀舒筋；海藻、鬼箭羽、土鳖虫破血逐瘀；牛膝逐瘀通经，引血下行。现代药理研究表明，黄精的提取物黄精多糖尚有调节高脂血症实验动物血脂代谢和抗实验性动物动脉粥样硬化形成的作用[5]；鬼箭羽具有一定的调脂作用，可升高HDL-C和降低TC，延缓动脉粥样硬化形成[6]；红花的抗血栓作用主要是通过抑制血小板聚集和抑制凝血系统实现的[7]；土鳖虫水提液能显著降低高脂血症大鼠血清TC、TG和LDL-C水平，高剂量组还可明显升高血清HDL-C水平，充分显示了土鳖虫对血脂的调节作用[8]。

本实验研究结果表明，与正常组比较，模型组大鼠血清TC、TG、LDL- C及VLDL-C指标明显上升(P<0.01)，HDL-C下降(P<0.01)，说明高脂饲料喂养使大鼠体内呈现高脂状态，这是动脉硬化的基础。与模型组比较，西药组、芪黄疽愈方高剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-C及VLDL-C指标下降(P<0.01)，提示芪黄疽愈方及西洛他唑片均有降低血脂的作用。而与西药组比较，芪黄疽愈方高剂量组血清TC、LDL-C、TG及VLDL-C上升均不明显。针对大鼠血清HDL-C，各组进行两两比较，芪黄疽愈方中、高剂量组及西药组与模型组比较差异有统计学意义 (P<0.01)，且芪黄疽愈方高剂量组HDL-C高于西药组(P<0.01)。说明芪黄疽愈方与西洛他唑片调节血脂作用相当，芪黄疽愈方高浓度组升高HDL-C作用优于西药组。流行病学及临床研究已证明，HDL-C与冠心病、动脉粥样硬化等疾病发生几率呈负相关，所以提高HDL-C对于保护血管系统、防治动脉硬化具有积极意义[10-11]。

本研究结果证实了芪黄疽愈方具有显著的调节脂质代谢作用，能有效纠正ASO大鼠的脂质代谢紊乱，降低ASO大鼠血清TC、TG、LDL-C及VLDL-C水平，升高HDL-C水平，提示芪黄疽愈方防治ASO与调节脂质代谢有关，为其广泛应用于临床提供了理论基础。

参考文献

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(本文编辑：习沙)

Effects of Qihuang-juyu formula on blood liquid in rats with arteriosclerosis obliterans

ZHANGXin,LIUYuan,GEJianli,etal.

DepartmentofSurgery,HospitalofTraditionalChineseMedicineinHebeiProvince,Hebei,Shijiazhuang050011

【Abstract】ObjectiveTo observe the effects of Qihuang-juyu formula on blood liquid in rats with arteriosclerosis obliterans (ASO). Methods 60 Wistar rats were randomly divided into six groups, that blank group, model group, western medicine group and Qihuang-juyu formula low, middle, high dose group, 10 rats in each group. The model of ASO was established by high fat diet feeding and saphenous arterial intimal injury method. Rats in blank group were feed with normal group. Rats in model group were received 0.9% sodium chloride injection by gavage. Rats in Qihuang-juyu formula low, middle, high dose group were received corresponding concentration of Qihuang-juyu formula by gavage. Rats in western medicine group were received intraperitoneal injection of alprostadil dried emulsion for injection and cilostazol tablets by gavage. Except the blank group, rats in other five groups were feed with high fat diet, and intramuscular injection of vitamin D3injection on right lower extremity at the beginning of the experiment. The changes of blood liquid were compared. Results The total cholesterol (TC), triglyceride (TC), low density lipoprotein cholesterol (LDL-L) and very low density lipoprotein cholesterol (VLDL-L) in model group were higher than those in blank group (P<0.01), and high density lipoprotein cholesterol (HDL-L) was decreased (P<0.01), which indicated that the ASO model was successful established. Only the TG in low dose group was decreased as compared with that in model group (P<0.01), only the TC and TG in middle dose group were decreased as compared with those in model group (P<0.01). The TC, TG, LDL-C and VLDL-C in high dose and western medicine group were decreased as compared with those in model group (P<0.01), and the HDL-C was increased (P<0.01). The HDL-C in high dose group was higher than that in western medicine group (P<0.01). Conclusion Qihuang-juyu formula can decrease TC, TG, LDL-C and VLDL-C, increase HDL-C, improve liquid metabolism disorder, has therapeutic effects on ASO.

【Key words】Arteriosclerosis; Obliterans; Animals; Experiment; Huangqi; Huangjing; Traditional Chinese herbs therapy

doi:10.3969/j.issn.1002-2619.2016.05.024

通讯作者：△河北省中医院外科，河北石家庄050011

作者简介：张欣(1989—)，女，硕士研究生在读，学士。研究方向：周围血管病。

【中图分类号】R323.7；R543.505；R-332；R-331

【文献标识码】A

【文章编号】1002-2619(2016)05-0725-04

(收稿日期：2015-09-06)

※ 项目来源：河北省科学技术厅2014年河北省省级科技计划(第三批)项目(编号：14277760D)

1河北省石家庄市中医院脉管二科，河北石家庄050051