HPLC法测定芩桑化痰颗粒中黄芩苷的含量

张丹丹，陶遵威（1.天津中医药大学，天津0019；2.天津医院，天津00211；.天津市医药科学研究所，天津00020）



HPLC法测定芩桑化痰颗粒中黄芩苷的含量

张丹丹1，2，陶遵威3
（1.天津中医药大学，天津300193；2.天津医院，天津300211；3.天津市医药科学研究所，天津300020）

摘要目的：建立HPLC测定芩桑化痰颗粒中黄芩苷含量的方法。方法：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（47∶53）；流速：1 mL/min；检测波长：280 nm。结果：黄芩苷在0.184 μg～1.840 μg范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为100.42%，RSD为0.02%。结论：该法简便、准确、重复性好，可用于芩桑化痰颗粒的质量控制。

关键词芩桑化痰颗粒；黄芩苷；高效液效果色谱法；含量测定

芩桑化痰颗粒由黄芩、桑白皮、桔梗、陈皮等多种药材组成，属于在研六类新药，具有止咳平喘、清肺祛痰之功效。方中黄芩为君药，性苦、寒，归心、肝、肺、胃经，具有清热泻火、消炎解毒之功效［1］。而黄芩苷是黄芩的主要有效成分之一［2］，具有抗菌、消炎、保肝、降压、抗肿瘤等药理作用［3］，也是评价黄芩药材质量的法定指标成分。为控制其质量，现以黄芩苷为定量指标，采用高效液相色谱法（HPLC）进行含量测定。

1仪器与试药

岛津LC-20ATvp高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），AE240天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司），HS3120超声仪（天津恒奥科技发展有限公司）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所购置，批号110715-201318，供含量测定用，含量以93.3%计），3批芩桑化痰颗粒（批号20140401、20140402、20140403）及黄芩阴性颗粒剂（天津市医药科学研究所制剂室提供）。色谱甲醇（色谱纯，sigma科技有限公司），水为娃哈哈纯净水，乙醇、磷酸等试剂均为分析纯（天津市化学试剂批发公司）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（47∶53）；流速：1 mL/min；检测波长：280 nm。理论板数按黄芩苷峰计算不低于2 500。对照品、供试品及阴性溶液色谱见图1～图3。

图1　对照品溶液色谱图（黄芩苷）

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含黄芩苷91.9 μg的对照品溶液。

图2　供试品溶液色谱图

图3　阴性对照溶液色谱图

2.2.2供试品溶液的制备取本品，研细，取约1g，精密称定，精密加入70%乙醇40 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备按处方配比，取除黄芩外其他药材，按供试品溶液制备方法，制得阴性样品溶液。

2.3线性关系考察

分别吸取黄芩苷（91.9 μg/mL）对照品溶液2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL注入液相色谱仪，按照“2.1”所述色谱条件分析，测定峰面积，以对照品进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程为Y = 377 882X-3 079（r= 0.999 9）。结果表明黄芩苷在0.184 μg～1.840 μg范围内呈良好线性关系。

2.4精密度实验

精密吸取同一份供试品溶液10 μL，按“2.1”色谱条件分析，连续进样6次，供试品溶液中黄芩苷峰面积值的RSD为0.17%，结果表明进样精密度良好。

2.5重复性实验

取同一批样品（批号20131017）6份，按照“2.2.2”供试品溶液制备操作，按“2.1”色谱条件分析，测定，计算其含量。RSD为0.63%。

2.6稳定性实验

精密吸取同一份供试品溶液（批号20140401）按照“2.2.2”供试品溶液制备操作，按“2.1”色谱条件分析，精密吸取供试品溶液10 μL，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h进样，测定黄芩苷的RSD为1.43%，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.7加样回收率实验

取同一批样品（批号20140401），研细，取6份，每份约0.5g，精密称定，精密加入每1 mL含黄芩苷对照品0.035 9 mg以及70%乙醇溶液40 mL，按照“2.2.2”供试品溶液制备操作，制得供回收率用供试品溶液，按“2.1”色谱条件分析，计算回收率，结果黄芩苷平均回收率为100.42%，RSD为0.02%。

2.8样品含量测定

取3个不同批号的样品，按照“2.2.2”供试品溶液制备操作，按“2.1”色谱条件分析，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，测定，计算1g样品中黄芩苷含量。结果见表1。

表1　芩桑化痰颗粒剂中黄芩苷的含量测定结果　（n=3）

3讨论

3.1流动相的选择

黄芩苷呈弱酸性，在流动相中加酸可改善峰型。参照药典及相关文献，本实验采用甲醇-醋酸-水、甲醇-0.2%磷酸、乙腈-0，2%磷酸等流动相系统进行考察，结果表明，以甲醇-0.2%磷酸（47∶53）为流动相，色谱分离能达到满意的效果，分离度和峰型较好。

3.2提取方法的优化

在芩桑化痰颗粒剂中，黄芩为君药，而黄芩苷是其主要的有效成分之一。为使被测化合物提取效果最佳，考察了不同提取方法（超声、回流）、不同提取溶剂（50%甲醇、70%甲醇、甲醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇）和不同提取时间（30 min、60 min、90 min）等因素对提取效率的影响，最终确定70%乙醇回流60 min提取效果最好。

参考文献

［1］王建.中医药学概论［M］.6版.北京：人民卫生出版社，2007：154.

［2］施高翔，邵菁，汪天明，等.黄芩及其有效成分抗菌作用新进展［J］.中国中药杂志，2014，39（19）：3 713-3 718.

［3］杜仲业，陈一强，孔晋亮，等.黄芩苷对金黄色葡萄球菌生物膜抑制作用的体外研究［J］.中华医院感染学杂志，2012，22（8）：1 541-1 543.

（编辑：梁葆朱）

Determination of baicalin in Qinsang Huatangranules by HPLC

Zhang Dandan1，2，Tao Zunwei3
（1.Tianjin University of TCM，Tianjin 300193；2.Tianjin Hospital，Tianjin 300211；3.Tianjin Institute of Medical Science，Tianjin 300020）

AbstractObjective：To establish a method for determinating baicalin in Qinsang Huatangranules by HPLC.Methods：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used.The mobile phase was methyl alcohol-0.2% phosphoric acid（47∶53），the flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 280 nm.Results：The calibration curve showed agood linear correlation in the range of 0.184 μg～1.840 μg（r=0.999 9）for baicalin.The average recovery rate of baicalin was 100.42%（RSD=0.02%）.Conclusion：The method is simple，accurate and hasgood repeatability，and could be used for the quality control of Qinsang Huatangranules.

Key wordsQinsang Huatangranules；baicalin；HPLC；determination

中图分类号：R284.2

文献标识码：A

文章编号：1671-0258（2016）02-0029-02

［作者简介］张丹丹，初级药师，E-mail：9444608@qq.com

［通讯作者］陶遵威，研究员