高效液相色谱法测定醒神通窍胶囊中齐墩果酸含量

何雪冰，李作孝，熊　军，张　昊，杨思进

（1.西南医科大学附属医院，四川泸州　646000；2.西南医科大学附属中医医院，四川泸州　646000）



高效液相色谱法测定醒神通窍胶囊中齐墩果酸含量

何雪冰1，李作孝1，熊军1，张昊1，杨思进2

（1.西南医科大学附属医院，四川泸州646000；2.西南医科大学附属中医医院，四川泸州646000）

摘要：目的建立测定醒神通窍胶囊中齐墩果酸含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为phenomenex Proidigy DDS3 100A柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.4%磷酸（90∶10），检测波长210 nm，柱温30℃。结果齐墩果酸质量浓度在12～240 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好，线性回归方程为Y=0.050 4 X-0.238 5，R2=0.999 3（n=6），平均回收率为97.98%，RSD为1.62%（n=9）。结论该法简便、快速、准确、可靠，可作为醒神通窍胶囊质量控制的方法。

关键词：高效液相色谱法；醒神通窍胶囊；齐墩果酸；含量测定

醒神通窍胶囊是由川芎、石菖蒲、益智仁、葛根、女贞子等组方，具有调血脂、降血糖、益智之功效，临床对血管性痴呆有良好的治疗效果。为控制醒神通窍胶囊的质量，笔者参照文献中齐墩果酸含量测定方法［1-3］，建立了测定醒神通窍胶囊中齐墩果酸含量的高效液相色谱法。现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

DIONEX U-3000型高效液相色谱仪（戴安中国有限公司）；威玛通用多媒体色谱数据工作站（深圳深软电子有限公司）；TG328A型电光分析天平（上海精密科学仪器有限公司-天平仪器制造厂）；722型分光光度仪（上海精密科学仪器有限公司仪器总厂）。

1.2试药

醒神通窍胶囊（西南医科大学附属医院，批号为150313，150420，150425）；齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110709-201206，供含量测定用）；甲醇（上海国药集团化学公司）为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：phenomenex Proidigy ODS3100A柱（250mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.4%磷酸（90∶10）；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm；柱温：30℃；进样量：20 μL。

2.2溶液制备

取齐墩果酸对照品约1.969 8 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取醒神通窍胶囊药粉4.32 g，精密称定，加100 mL甲醇，超声提取30 min，取出，放至室温，甲醇补足减失的质量，用定量滤纸过滤，即得供试品溶液。按处方比例取不含女贞子的其他药材，制成缺女贞子的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

阴性干扰试验：取2.2项下3种溶液，按拟订的色谱条件进样测定。结果供试品溶液与对照品溶液色谱图中具有相同保留时间的色谱峰，而阴性无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察：分别精密取对照品贮备液适量，配制成12，24，48，96，144，240 μg/mL的系列质量浓度溶液，分别进样20 μL，按拟订色谱条件测定，以齐墩果酸的质量浓度（X）为横坐标、峰面积积分值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=0.050 4 X-0.238 5，R2=0.999 3（n=6）。结果表明，齐墩果酸质量浓度在12～240 μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液（质量浓度为96 μg/mL），注入高效液相色谱仪，进样6次。结果的RSD为0.69%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：精密称取同一批样品（批号为150313）6份，按拟订方法测定。结果含量分别为90.56，90.24，89.57，89.76，90.76，90.06 μg/mL，平均90.16 μg/mL，RSD为0.51%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液（批号为150313）20 μL，分别于0，1，2，4，8，12，24 h时依法进样测定。结果峰面积积分值分别为90.879 4，90.777 2，90.7967，90.7551，90.1891，90.4671，90.3037，RSD为0.45%（n=7），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

加样回收试验：精密称取已知齐墩果酸含量的样品（批号为150313，含量为2.086 6 mg/g）适量，分别精密加入对照品溶液（质量浓度为240 μg/mL）50，100，150 μL，按供试品溶液制备方法处理，测定含量，计算回收率。结果见表1。

图1　高效液相色谱图

表1　齐墩果酸加样回收试验结果（n=9）

2.4样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液并测定，平行3次。结果批号为150313，150420，150425的样品中齐墩果酸平均含量分别为2.086 6，2.272 2，1.914 6 mg/g。

3　讨论

检测波长选择：取齐墩果酸对照品适量，用流动相溶液溶解，于200～400 nm波长范围内扫描，结果于210 nm波长处齐墩果酸有最大吸收，且灵敏度高，故选择210 nm作为检测波长。

流动相选择：参考文献［4-5］，在试验过程中，曾采用多种流动相（包括甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸-三乙胺等）进行分离测试，结果色谱峰分离均不理想而未被采用。流动相为甲醇-0.4%磷酸（90∶10）时分离效果较好，且保留时间较短，故选其为流动相。

柱温选择：考察不同柱温（10℃，25℃，35℃，40℃）对色谱分离效果的影响，结果各柱温对分离效果保留时间的影响均有明显区别，其中柱温30℃分离效果好，因此确定柱温为30℃。

醒神通窍胶囊为复方制剂，其组方中女贞子是重要成分，齐墩果酸具有调血脂、降血糖、抗炎、镇静、强心、利尿作用，同时还具有保护肝脏、利水渗湿等功效［4-6］，对于血管性痴呆患者极为有益［7-8］。故选择测定齐墩果酸含量以控制醒神通窍胶囊的质量，并建立高效液相色谱法测定含量，简便、快速，结果可靠，可作为醒神通窍胶囊质量控制的方法。

参考文献：

［1］江丽，申国庆，龚春燕.HPLC法同时测定复方痤疮胶囊中齐墩果酸和熊果酸的含量［J］.中国药师，2011，14（8）：1 141-1 142.

［3］谢谊，李跃辉，唐纯玉，等.HPLC法测定喉咽清口服液中齐墩果酸的含量［J］.中国医药导报，2014，11（20）：110-113.

［4］黄其春，涂文升.高效液相色谱法测定六味五灵片中齐墩果酸含量［J］.中国药业，2012，21（13）：19-20.

［5］王奇，芦柏震.齐墩果酸的研究进展［J］.中国药房，2008，19（9）：711-712.

［6］石朗，王海龙，陈大忠，等.HPLC法测定齐墩果酸缓释片中齐墩果酸的含量［J］.中国中医药科技，2011，18（6）：507.

［7］高风超，陈翔，田新英.血管性痴呆危险因素及发病机制的研究进展［J］.医学综述，2014，20（6）：1 068-1 071.

［8］黄浩，唐士婷，蔺心敬.血管性痴呆相关危险因素分析［J］.医学综述，2012，18（19）：3 231-3 234.

Content Determination of Oleanolic Acid in Xingshen Tongqiao Capsule by HPLC

He Xuebing1，Li Zuoxiao1，Xiong Jun1，Zhang Hao1，Yang Sijin2
（1.Affiliated Hospital of the Southwest Medical University，Luzhou，Sichuan，China 646000；2.Affiliated Chinese Medicine Hospital of the Southwest Medical University，Luzhou，Sichuan，China 646000）

Abstract：Objective To establish the determination method of oleanolic acid in Xingshen Tongqiao Capsule by HPLC.Methods The separation was performed on a phenomenex Proidigy column（250 mm×4.6 mm，5 μm），the mobile phase consisted of methanol-0.4% phosphoric acid（90∶10），The detection wavelength was set at 210 nm，and the column temperature was 30℃.Results There was a good linearity between the peak areas and the quantity of oleanolic acid within the range of 12-240 μg/mL，the equation of linear regression was Y=0.050 4 X-0.238 5，R2=0.999 3（n=6）.The average recovery was 97.98%，RSD=1.62%（n=9）.Conclusion The established method is simple，quick，reliable and specific，and can be used in the determination of oleanolic acid in Xingshen Tongqiao Capsule.

Key words：HPLC；Xingshen Tongqiao；oleanic acid；content determination

中图分类号：R284.1；R286.0

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）07-0052-03

作者简介：何雪冰（1990-），在读硕士研究生，研究方向为神经免疫，（电子信箱）505351887@qq.com；李作孝（1964-），硕士研究生，教授，主任医师，研究方向为神经免疫，本文通讯作者，（电话）0830-3165660（电子信箱）lzx3235@sina.com。

收稿日期：（2015-10-14）