重症急性胰腺炎大鼠血清Apelin、C反应蛋白及肿瘤坏死因子-α水平变化及临床意义

李　卫　周筱筠　卢先州　刘龙飞　徐志广　陈诗怡

(南华大学附属南华医院肝胆外科，湖南　衡阳　421002)



重症急性胰腺炎大鼠血清Apelin、C反应蛋白及肿瘤坏死因子-α水平变化及临床意义

李卫周筱筠卢先州刘龙飞徐志广陈诗怡

(南华大学附属南华医院肝胆外科，湖南衡阳421002)

〔摘要〕目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血清Apelin、C反应蛋白(CRP)及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平的变化及临床意义。方法将36只SD雄性大鼠按照随机数字表法分为SAP组、假性手术组、对照组，每组12只，SAP组按照大鼠体重1 ml/kg剂量胆总管注入50 g/L牛磺胆酸钠制备SAP模型，假性手术组行SAP组相同手术但不注射药物，对照组正常饲养。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定Apelin、CRP及TNF-α水平，光镜观察SAP胰腺组织变化并进行组织病理评分。结果SAP组胰腺组织严重水肿，组织细胞坏死、具有片状出血斑并且胰腺出现局部皂化斑，假性手术组正常或者轻微水肿，无明显异常，对照组组织正常，建模成功。SAP组血清CRP和TNF-α水平均高于假性手术组和对照组，Apelin明显低于假性手术组和对照组(P<0.05)。SAP组胰腺组织病理学评分高于假性手术组和对照组(P<0.05)。SAP组血清Apelin水平与胰腺组织病理学评分呈负相关(r=-0.876,P<0.05)，CRP和TNF-α水平与胰腺组织病理学评分呈正相关(r=0.698、0.724,P<0.05)。结论血清Apelin、CRP及TNF-α水平变化与SAP发生、发展密切相关，可以作为疾病严重程度判断和治疗效果评价的重要指标。

〔关键词〕重症急性胰腺炎；血清Apelin；C反应蛋白；肿瘤坏死因子-α

目前认为重症胰腺炎(SAP)发病机制主要是胰腺自身消化和炎症细胞因子激活，尤其是炎症因子相互作用和累计作用，导致血管渗漏、低血容量以及多系统器官衰竭等重症发生〔1〕。Apelin是一种脂肪细胞因子，是血管紧张素受体样蛋白J受体内源性配体，在肥胖、胰岛素抵抗、心血管系统疾病以及炎症反应中起重要作用〔2〕；C反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子(TNF)-α均为机体受到感染或者损伤时释放的敏感蛋白〔3〕。本文旨在研究SAP大鼠血清Apelin、CRP、TNF-α水平的变化及临床意义。

1资料与方法

1.1动物和试剂动物：SD雄性大鼠36只购自本院动物中心，体重250～300 g，实验前记号笔标记大鼠序号，按照随机数字法分为SAP组、假性手术组、对照组，每组12只。试剂：Apelin、CRP及TNF-α酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒均购自上海科敏生物科技有限公司；牛磺胆酸钠购自南京凯夫医药科技有限公司。

1.2研究方法

1.2.1SAP模型制备大鼠建模前禁食12 h，可饮水，按照3 ml/kg给予大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥钠溶液，麻醉后动物手术台上固定大鼠，沿着腹壁正中线切开，打开腹腔，暴露胰腺，找到胆总管和十二指肠，仔细观察胰管和胆管方向，在胆总管流向十二指肠端应用血管夹夹闭胆总管，沿着相反方向穿刺胆总管，按照大鼠体重1 ml/kg剂量注入50 g/L牛磺胆酸钠，注射完毕后，缝合穿刺孔，等待1 min左右，取下血管夹，然后逐层关闭腹部，整个过程均为无菌操作，术后大鼠禁食，可适量饮水，12 h左右建模成功；假性手术组除了未注入牛磺胆酸钠外，其他手术方式同SAP组，对照组正常饲养。

1.2.2Apelin、CRP及TNF-α检测SAP组和假性手术组手术建模12 h后，对照组经过同样时间，按照3 ml/kg大鼠腹腔注射10 g/L戊巴比妥钠溶液进行麻醉，开腹，抽取腹腔静脉血5 ml于EP管中，按照5 000 r/min离心5 min，收集血清，-80℃保存备用，应用ELISA测定Apelin、CRP、TNF-α水平，分别应用相应试剂盒测定，严格按照试剂盒说明书要求。

1.2.3胰腺标本制定取胰腺组织，40 g/L甲醛固定，石蜡包埋，切片，苏木精-伊红染色，光镜下观察组织水肿情况，并且进行胰腺组织病理学评分,从水肿、出血、坏死及炎症细胞浸润4个方面评分。

1.3研究指标比较三组Apelin、CRP、TNF-α水平及组织光镜观察结果；分析各指标与组织病理评分之间的相关性。

1.4统计学方法应用SPSS13.0软件进行t检验、F检验和Pearson相关分析。

2结果

2.1三组血清Apelin、CRP、TNF-α水平以及光镜观察结果比较光镜下观察SAP组胰腺组织严重水肿，组织细胞坏死、具有片状出血斑并且胰腺出现局部皂化斑；假性手术组正常或者轻微水肿，无明显异常；对照组大鼠组织无明显异常，说明建模成功。SAP组血清CRP和TNF-α水平均高于假性手术组和对照组，Apelin水平明显低于假性手术组和对照组(P<0.05)，假性手术组和对照组Apelin 、CRP和TNF-α水平无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　三组Apelin、CRP、TNF-α水平

与SAP组相比：1)P<0.05

2.2血清Apelin 、CRP以及TNF-α水平与组织病理学评分相关关系分析SAP组胰腺组织病理学评分平均为(8.67±1.23)分，假性手术组为(1.32±0.78)分，对照组为(1.28±0.56)分，差异显著(F=4.675，P=0.015)，其中SAP组评分高于假性手术组和对照组(P<0.05)，假性手术组和对照组无统计学意义(P>0.05)。SAP组血清Apelin水平与胰腺组织病理学评分呈负相关关系(r=-0.876,P=0.000),CRP和TNF-α水平与胰腺组织病理学评分呈正相关(r=0.698、0.724,P=0.000)。

3讨论

近年来急性胰腺炎(AP)发病率呈现明显的上升趋势，并且由于对其发病机制尚未明确，缺乏特异性诊断或者评价指标，因此是现在临床上研究重点和难点之一。目前认为AP是多种病因导致胰酶在胰腺内被激活后引起胰腺组织自身消化、水肿、出血甚至坏死的炎症反应，病变轻者以胰腺水肿为主，重者出现胰腺出血坏死，并且可以诱发感染、腹膜炎和休克等，病死率高〔4〕。研究证明〔5〕，AP病损的胰腺组织作为抗原或炎症刺激物，激活了巨噬细胞而释放出炎症介质，造成细胞因子网络和免疫功能紊乱。Cox等〔6〕研究发现CRP在大鼠SAP评估和疾病转归中具有重要意义，并且脓毒败血症的病人血浆Apelin水平发生明显变化，因此检测血液中相关细胞因子浓度，对于判断胰腺病变严重程度、病情发展和预后至关重要。

Apelin因子〔7〕是孤儿G蛋白耦联受体，是近来发现具有重要生物学活性的心血管多肽性因子，是肾素-血管紧张素新的组成部分，具有扩张血管、降低血压、调整生物节律等多种生物学功能。目前主要以大鼠为载体来发现胃肠系统和胰腺部位中Apelin-mRNA的表达，并且在胃腺上皮组织发现大量的Apelin分泌细胞，依赖丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径刺激胰腺分泌胆囊收缩素等，因此Apelin因子在SAP等消化系统疾病的发生发展中起着重要的作用。CRP主要是机体受到严重损伤等炎症刺激后肝细胞合成的急性相关蛋白，研究发现〔8〕AP通常在最初24 h引起CRP升高，若无并发症，此值在第1周末下降。如果入院时CRP>100 mg/L，很可能已形成并发症，CRP>110 mg/L，可能是出血性胰腺炎，并且CRP诊断灵敏度较高。TNF-α可以促进T细胞产生各种炎症因子,进而促进炎症反应的发生。

本研究说明SAP对大鼠胰腺组织产生严重损害，与胰腺组织光镜观察结果一致。相关性分析显示随着胰腺病理组织评分升高，血清Apelin表达水平逐渐降低，可能原因为SAP发生时导致全身性炎症反应，大量炎症因子对心肌细胞造成一定的损伤，因Apelin因子为内源性心肌收缩因子，心肌细胞损伤失去了需要Apelin因子的机会，因此Apelin因子表达会降低。本研究说明CRP和TNF-α因子在SAP的发生、发展以及预后中起着重要作用。此外，可以通过检测CRP、TNF-α表达水平变化来推断SAP病情变化、严重程度或治疗效果，这与相关研究结果类似〔9〕。但是本文研究对象为大鼠，上述论断仅可作为人类研究的参考依据，临床应用还需要在SAP患者上做更深层次研究。

4参考文献

1余永芬.C反应蛋白检测在急性胰腺炎严重程度及胰腺坏死评估中的意义〔J〕.国际检验医学杂志,2015;36(3):407-9.

2Sato T,Kameyama T,Noto T,etal.Enhanced expression of hemoglobin scavenger receptor CD163 in accumulated macrophages within filtered debris between acute coronary syndromes and stable angina pectoris〔J〕.Int Heart J,2015;56(2):150-6.

3辛宪磊,冯健,陈永亮,等.重症急性胰腺炎大鼠血清Chemerin水平变化的实验研究〔J〕.解放军医学院学报,2013;34(6):632-5.

4李春燕,廖东平,李仕强,等.丙氨酰-谷氨酰胺对重症急性胰腺炎患者IL-6、TNF-α、D-二聚体的影响及临床意义〔J〕.胃肠病学和肝病杂志学,2015;24(3):351-4.

5王治伟,迟琼.急性胰腺炎患者血清TNF-α、IL-6及hs-CRP水平变化及临床意义〔J〕.白求恩军医学院学报,2012;10(2):85-7.

6Cox N,Pilling D,Gomer RH.DC-SIGN activation mediates the differential effects of SAP and CRP on the innate immune system and inhibits fibrosis in mice〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,2015;112(27):8385-90.

7任丽楠,郭晓钟,李宏宇,等.C-反应蛋白在重症急性胰腺炎评估与转归中的临床意义〔J〕.临床肝胆病杂志,2015;31(5):691-4.

8Wang Y,Liu W,Liu X,etal.Role of liver in modulating the release of inflammatory cytokines involved in lung and multiple organ dysfunction in severe acute pancreatitis〔J〕.Cell Biochem Biophys,2015;71(2):765-76.

9Cui HX,Xu JY,Li MQ.Efficacy of continuous renal replacement therapy in the treatment of severe acute pancreatitis associated acute respiratory distress syndrome〔J〕.Eur Rev Med Pharmacol Sci,2014;18(17):2523-6.

〔2015-07-11修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

第一作者：李卫(1979-)，男，硕士，副教授，副主任医师，主要从事肝、胆、胰腺疾病方面的研究。

〔中图分类号〕R657.5+1

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)09-2080-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.09.014