DGCR8在结直肠癌中的表达及临床意义*

陈　勇，　王向阳，　蔡　威，　王　辉

1广州军区武汉总医院急诊科，武汉　4300702武汉市中心医院胃肠外科，武汉　430014



DGCR8在结直肠癌中的表达及临床意义*

陈勇1，王向阳2△，蔡威2，王辉2

1广州军区武汉总医院急诊科，武汉4300702武汉市中心医院胃肠外科，武汉430014

摘要：目的探讨DGCR8基因在结直肠癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学的方法对126例结直肠癌组织、正常结直肠黏膜以及淋巴结病理切片中的DGCR8蛋白进行检测。结果DGCR8的表达在结直肠癌组织和转移淋巴结组织中明显高于正常黏膜，其表达水平与淋巴结转移、远处转移、临床Dukes分期、CEA以及生存时间等密切相关(均P<0.05)，而且是结直肠癌重要的预后独立危险因素之一(P<0.05)。结论DGCR8表达上调可能促进结直肠癌的发生、发展、转移并且影响预后。

关键词：DGCR8；结直肠癌；预后

在世界范围内，结直肠癌死亡率位于恶性肿瘤的第2位[1]，我国结直肠癌的发病率和死亡率均保持上升趋势，2012《中国卫生统计年鉴》中指出2004～2005年结直肠癌患者的死亡率达到了7.25/10万[2]。结直肠癌的发生、发展以及转移经历多个步骤并受到多个基因调控[3]。最近研究证实，DGCR8的异常可以引起miRNA的表达发生改变，从而参与肿瘤的发生发展，影响肿瘤的预后[4-7]。我们用免疫组织化学的方法检测DGCR8在结直肠癌组织、正常黏膜及转移淋巴结中的表达水平，结合患者临床资料，探讨其临床意义。

1资料与方法

1.1研究对象

126例结直肠癌组织切片和与之相配对的正常结直肠黏膜及淋巴结标本均取自我院2005年1月至2010年6月的结直肠癌患者，所有患者术前均未行放化疗，病理检查均证实为结直肠癌，所有临床资料均获得完整的5年随访资料，全组男64例，女62例，年龄21～84岁，平均年龄54.6岁。按2010年国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会(UICC/AJCC)TNM分期标准进行分期[8]。其中DukesA/B 30例，DukesC/D 96例。

1.2实验试剂及方法

羊抗人DGCR8单克隆抗体、二抗及免疫组化SP法染色试剂盒均购自武汉巴菲尔生物技术有限公司。免疫组织化学检测方法按SP试剂盒说明操作。

1.3结果判定

由2位病理学专家采用双盲法阅片。具体方法如下：①按染色强度分为4个分值：0(阴性)，1(弱阳性)，2(中等阳性)，3(强阳性)；②按染色范围分为4个分值：1(<25%)，2(25%～)，3(50%～)，4(>75%)；③染色强度和范围评分之和为其分值，2位病理学专家评分的均值为每张切片的最终评分。最终评分0～3分为DGCR8低表达，4～7分为DGCR8高表达。

1.4随访

采用电话、书信和电子邮件进行随访，所有病例均有5年回访的完整资料，生存时间为手术之日至2015年6月(回访截止时间)或死亡时间。随访自术后开始进行。

1.5统计学处理

应用SPSS 17.0统计软件分析数据，组间差异用χ2检验分析，生存率的比较采用Kaplan-Meier生存曲线法及Log-rank检验，建立Cox比例风险模型进行单、多因素预后分析，均以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1DGCR8蛋白在结直肠癌组织、正常黏膜和淋巴结中的表达

DGCR8蛋白的表达在结直肠癌组织和阳性淋巴结组织中明显高于正常黏膜(P<0.05)，有淋巴结转移的结直肠癌组织高于无淋巴结转移的结直肠癌组织(P<0.05)，见表1。免疫组化图片显示DGCR8蛋白表达，结直肠癌组织和阳性淋巴结组织较正常黏膜明显增高，有淋巴结转移的结直肠癌组织高于无淋巴结转移的结直肠癌组织，见图1。

表1　DGCR8蛋白在结直肠癌组织、正常黏膜和淋巴结中的表达

2.2结直肠癌中DGCR8的表达与临床病理特征之间的关系

结直肠癌中DGCR8的表达与淋巴结转移、远处转移、Dukes分期及CEA有关(均P<0.05)；与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移度(LNR)无关(均P>0.05)，见表2。

2.3DGCR8与结直肠癌的关系

多因素Cox比例风险模型分析结果显示DGCR8、Dukes分期、远处转移和CEA是预后独立危险因素(均P<0.05)，见表3。

A：正常黏膜；B：无淋巴结转移结直肠癌组织；C：有淋巴结转移结直肠癌组织；D：阳性淋巴结图1　DGCR8蛋白表达的免疫组织化学染色图片(×200)Fig.1 Immunohistochemistry staining of DGCR8 protein(×200)

项目总数高表达低表达P值病例1269927年龄 <55岁 ≥55岁5967485111160.475性别 男 女6462485116110.321肿瘤大小 <3cm ≥3cm4383326711160.414分化程度 高 中 低2438641832496615各组间比较均>0.05淋巴结转移 无 有4284277215120.006LNR <30% ≥30%5868465312150.852远处转移 无 有分期 DukesA/B DukesC/D864042846237277224315120.0180.006CEA ≤5ng/mL >5ng/mL5274356417100.010

淋巴结转移度(LNR)=阳性淋巴结数/总检查淋巴结数×100%

表3　多因素Cox比例风险模型分析

HR：风险率；CI：可信区间

2.4DGCR8的表达与结直肠癌生存时间之间的关系

结直肠癌组织中DGCR8表达水平与患者生存时间明显相关(P<0.01)，DGCR8表达越高，生存时间越短，见图2。

图2　DGCR8的表达与结直肠癌生存时间之间的关系Fig.2 Relationship between the DGCR8 protein expression level and survival time in colorectal cancer

3讨论

DGCR8是位于人类22号染色体ql 1.2区域的一个等位基因，其与迪乔治综合症(Digeorge Syndrome，DGCS)相关，故命名为DGCR8[9]。DGCR8是一种RNA结合蛋白，参与miRNA的合成，在miRNA的合成过程中，结合pri-miRNA，并通过与Drosha相互作用和稳定微处理器来促进Drosha的切割，调控miRNA的生成，以此影响肿瘤的增殖、迁移和侵袭能力[4-7]。研究表明，DGCR8高表达促进癌的发生、发展及转移，在前列腺癌、喉癌和卵巢癌等肿瘤中已得到证实[10-12]。到目前为止，该蛋白在结直肠癌中的报道甚少，其功能还不太清楚。

我们的研究中发现，DGCR8在结直肠癌和转移淋巴结组织中的表达明显高于正常黏膜(P<0.05)，有淋巴结转移的结直肠癌组织高于无转移的结直肠癌组织(P<0.05)。这些与上述肿瘤中的表达情况相似。DGCR8的上调与淋巴结转移、远处转移、Dukes分期和CEA密切相关(均P<0.05)，DGCR8的上调与肿瘤的发展相关联。结直肠癌中DGCR8在CEA正常值以内和高于正常值时的比较显示，CEA检测值越高的患者，同样DGCR8表达越高(P<0.05)，在今后的临床诊断和预后评估中，DGCR8可能与CEA有相似的临床意义，作为临床肿瘤常用的监测指标。Cox比例风险模型单、多因素分析发现DGCR8与远处转移、Dukes临床分期和CEA一样均是影响预后的独立因素，体现了DGCR8表达的高低可能是预测患者分期及预后的重要参考指标。生存分析显示，结直肠癌中高表达DGCR8患者生存时间明显低于低表达患者，这也提示DGCR8对预测患者的预后有重要的意义。

综上所述，DGCR8的上调与结直肠癌的发生、进展以及预后均有着密切的关系，将来可能在结直肠癌患者的筛选、诊断、术后疗效评估、病情监测、预后等方面发挥重要作用，并成为结直肠癌的理想标志物之一。

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(2015-08-03收稿)

Expression of DGCR8 in Colorectal Cancer and Its Clinical Significance

Chen Yong1，Wang Xiangyang2△，Cai Wei2etal

1DepartmentofEmergency，WuhanGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryCommand，Wuhan430070，China2DepartmentofGastrointestinalSurgery，WuhanCentralHospital，Wuhan430014，China

AbstractObjectiveTo study the expression and clinical significance of DGCR8 in colorectal cancer.MethodsImmunohistochemical method(IHC)was used to detect the expression level of DGCR8 protein in 126 cases of colorectal cancer tissues，normal mucosae and lymph nodes.ResultsThe expression level of DGCR8 in colorectal cancer tissues and metastatic lymph nodes was obviously higher than that in normal mucosae，and the up-regulated DGCR8 was related to lymph node metastasis，remote metastasis，clinical Dukes stage，CEA and survival time(P<0.05 for all).Furthermore，DGCR8 was an important independent prognosis factor for colorectal cancer(P<0.05).ConclusionUp-regulated DGCR8 may play an important role in the occurrence，progression，metastasis and prognosis of colorectal cancer.

Key wordsDGCR8；colorectal cancer；prognosis

中图分类号：R735.3

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2016.02.017

*湖北省卫生计生委立项课题(No.WJ2015Z067)；湖北省自然科学基金资助项目(No.2015CFB542)；武汉市卫生计生委立项课题(No.WX15D62)陈勇，男，1977年生，主治医师，医学硕士，E-mail：fzqy1212@163.com

△通讯作者，Corresponding author，E-mail：wxydoctor@163.com