新疆维吾尔族乳腺癌C-erbB-2和Caspase3蛋白的表达及其意义

赵　倩， 迪力夏提·金斯汗， 吐鲁洪·沙列尔

(新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科一病区, 乌鲁木齐　830054)



·民族肿瘤学·

新疆维吾尔族乳腺癌C-erbB-2和Caspase3蛋白的表达及其意义

赵倩， 迪力夏提·金斯汗， 吐鲁洪·沙列尔

(新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺外科一病区, 乌鲁木齐830054)

摘要:目的探讨新疆维吾尔族女性乳腺癌C-erbB-2和Caspase3蛋白的表达情况及其意义。方法选取2012年6月—2014年12月新疆医科大学附属肿瘤医院初次确诊为乳腺癌的女性患者(乳腺癌组)共62例，按民族分为维吾尔族组(37例)和汉族组(25例)。另选取同期30例维吾尔族和30例汉族女性乳腺良性病变的标本为对照组。采用免疫组化S-P法检测乳腺癌组和对照组C-erbB-2和Caspase3蛋白的表达，比较乳腺癌组和对照组、维吾尔族和汉族乳腺癌C-erbB-2和Caspase3蛋白的表达情况，分析维吾尔族女性乳腺癌C-erbB-2和Caspase3的表达与临床病理特征的关系。结果乳腺癌组C-erbB-2的阳性表达率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组Caspase3的阳性率表达明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。维吾尔族组与汉族组乳腺癌C-erbB-2和Caspase3表达差异无统计学意义(P>0.05)。C-erbB-2的阳性表达与淋巴结转移、肿瘤分期、孕激素受体(PR)有关(P<0.05),与其他病理特征无关(P>0.05)。有淋巴结转移的乳腺癌Caspase3的阳性率低于无淋巴结转移的乳腺癌，差异有统计学意义(P<0.05)。结论新疆维吾尔族乳腺癌组织中C-erbB-2蛋白呈高表达，Caspase3呈低表达。

关键词：维吾尔族； 女性； 乳腺癌； C-erbB-2； Caspase3

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，近年来在全球其发病年龄呈明显上升趋势，并有逐渐年轻化的趋势。乳腺癌的发生与发展受多种因素的影响。研究乳腺癌良恶性疾病中癌基因和抑癌基因的作用可判断肿瘤的转移与预后，从而探讨乳腺上皮的癌变机制。乳腺癌是危害新疆女性的第二大肿瘤[1]。新疆是少数民族聚居区，维吾尔和汉族是新疆地区最主要的2个民族，不同民族由于遗传背景、生活方式的不同，乳腺癌也可能有其独特特点[2]。C-erbB-2基因已被认为是乳腺癌发生、发展密切相关的因素之一[3-4],但C-erbB-2在维吾尔族女性乳腺癌中的表达少有文献报道。天冬氨酸特异的半脱氨酸蛋白酶3(cyserinly aspartate-specific protease3,caspase3)是细胞凋亡调控的重要因子。本研究旨在通过研究维吾尔族、汉族妇女乳腺癌C-erbB-2和Caspase3表达差异，初步探讨C-erbB-2和Caspase3在维吾尔族、汉族女性乳腺癌发病机制中的作用。

1资料与方法

1.1一般资料选取2012年6月-2014年12月新疆医科大学附属肿瘤医院经病理检查确诊为乳腺癌的女性患者(乳腺癌组)共62例，年龄33～68岁，平均(51.3±4.7)岁。患者术前未行放疗、化疗、新辅助治疗以及其他治疗。本研究经过患者知情同意后，按民族分为维吾尔族组(37例)和汉族组(25例)。根据国际乳腺癌TNM临床分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期38例，Ⅲ 13例，Ⅳ期2例。其中非浸润性癌3例，早期浸润性癌8例，浸润性非特殊癌47例，浸润性特殊癌4例。另选取同期30例维吾尔族和30例汉族女性乳腺良性增生病变标本为对照。维吾尔和汉族乳腺癌患者在年龄、病理分型及病变分期等方面差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。

1.2主要仪器与试剂显微镜及显微图片采集系统(德国Leica)，恒温箱(上海福玛实验设备有限公司)，C-erbB-2和Caspase3抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)均为工作液，DAB染色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

表1　维吾尔族、汉族乳腺癌患者基本情况/例

1.3免疫组化检测C-erbB-2和Caspase3的表达所有标本经福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续4 μm切片，采用S-P免疫组织化学方法，DAB显色。用已知的阳性乳腺癌切片为阳性对照，用PBS代替一抗为阴性对照。

1.4结果判断在高倍视野下(400倍)随机选取5个不同视野观察，C-erbB-2阳性表达于胞膜及胞浆上，Caspase3表达于胞浆。被染成棕黄色或黄色者定义为阳性细胞，结果判定标准：染色无阳性细胞为“-”，阳性细胞数<30%为“+”，30%～60%为“++”，“+++”定义为阳性细胞数>60%。“-”定义为阴性表达，“+、++、+++”为阳性表达。

1.5统计学处理采用SPSS17.0统计软件包对数据进行处理，计数资料采用卡方检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1维吾尔族与汉族乳腺组织中C-erbB-2和Caspase3的表达维吾尔族组与汉族组乳腺癌组织中C-erbB-2均有不同程度的表达，阳性率表达分别为54.1%和68.0%，两组差异无统计学意义(χ2=1.206，P=0.272)。维吾尔族与汉族组乳腺癌组织中Caspase3的阳性表达率分别为16.2%和12.0%，两组比较差异无统计学意义(χ2=0.214，P=0.644)，见表2。

2.2新疆维吾尔族女性乳腺癌C-erbB-2和Caspase3的表达与临床病理因素的关系C-erbB-2的阳性表达与淋巴结转移有关，无淋巴结转移组和有淋巴结转移者中C-erbB-2的阳性表达率分别为76.5%和35.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。随着肿瘤临床分期的增加，C-erbB-2的阳性表达率增加，差异有统计学意义(P<0.05)。另外，C-erbB-2的表达与PR相关，差异有统计学意义(P<0.05)。C-erbB-2的阳性表达与年龄、肿瘤直径、雌激素受体(ER)、PR病理特征无关(P>0.05)，见表3。C-erbB-2在乳腺癌组及正常组中的表达见图1a、1b。有淋巴结转移的乳腺癌中Caspase3的阳性表达率低于无淋巴结转移的乳腺癌，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。Caspase3在乳腺癌组及正常组中的表达见图1c、1d。

表2　维吾尔族组及汉族组乳腺组织中C-erbB-2和Caspase3的表达/例(%)

a： C-erbB-2在乳腺癌组中的阳性表达(SP400)

b: C-erbB-2在正常组中的阴性表达(SP400)

c: Caspase3在乳腺癌组中的阴性表达 (SP400)

d: Caspase3在正常组中的阳性表达(SP400)

图1　C-erbB-2、Caspase3在乳腺癌组及正常组中的表达(SP400)

3讨论

乳腺癌的发生、发展与多种因素如遗传、生理环境因素有关。已有研究报道，不同民族和地区之间乳腺癌的发病和预后有明显差异[5]。因此研究新疆主要的少数民族维吾尔族乳腺癌的发病机制与汉族的差别很有必要。

C-erbB-2位于17q21，编码跨膜黏蛋白P185，此蛋白具有酪氨酸激酶活性，研究报道C-erbB-2是一种细胞来源的癌基因，属于原癌基因，其蛋白产物是EGFR家族中的重要成员之一[6]。当其受到体内外某些因素作用激活时，具有肿瘤转化活性，转变为癌基因。C-erbB-2的高表达被认为与多种恶性肿瘤如胃癌、结直肠癌等的生长、浸润和转移密切相关[7]。郑召召等[8]报道C-erbB-2在大肠癌组织中的表达明显高于正常大肠组织中的表达，提示C-erbB-2基因在大肠癌发生、发展中起一定作用[9-11]。曹静等[12]研究报道C-erbB-2高表达与宫颈腺癌的分化程度、FIGO分期及淋巴结转移有关(P<0.05)，其可作为判断宫颈腺癌生物学行为的重要考虑指标。目前C-erbB-2已被公认为是与乳腺癌发生、发展密切相关的癌基因。盛仲楠[13]采用免疫组化法检测C-erbB-2在乳腺癌中的表达发现乳腺癌组织中C-erbB-2阳性表达与患者淋巴转移情况、TNM分级有关。本研究结果显示，乳腺癌组织中C-erbB-2的阳性表达率高于正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)，C-erbB-2的过度表达与乳腺癌的发生相关。本研究还显示，有淋巴结转移者C-erbB-2的表达率高于无淋巴结转移者，此外C-erbB-2的表达与临床分期有关，这与相关报道结论一致。关于C-erbB-2的表达与ER、PR是否相关，国内外研究的结果不尽一致。廖春梅等[14]研究报道C-erbB-2的表达与ER、PR呈负相关，而曹亚丽等[15]报道其呈正相关。本研究发现，维吾尔族女性乳腺癌C-erbB-2与HR相关，而与ER不相关，可能是维吾尔族女性乳腺癌患者C-erbB-2的阳性表达有其自身特点，还需扩大样本量的基础上进行更深一步的研究。

Caspase3基因是32 ku半胱氨酸蛋白酶基因，可编码277个氨基酸序列。正常情况下Caspase3以酶原形式存在于机体，当机体的凋亡信号传递到细胞内，凋亡小体形成，激活Caspase3家族。Caspase3是介导细胞凋亡的一类蛋白水解酶，即Caspase中的关键效应酶。大多数引发凋亡的因子都是通过激活Caspase3启动Caspase3介导的凋亡程序，活化的Caspase3蛋白能使许多与细胞周期、DNA修复、细胞结构的蛋白或激酶失活，从而导致凋亡的发生。Caspase3因其特殊生理作用而成为国内外学者的研究热点。本研究显示，Caspase3阳性反应物呈棕黄色细颗粒状，定位于细胞质。新疆维吾尔族妇女乳腺癌中Caspase3的阳性表达率较对照组明显下降(P<0.05)。提示Caspase3蛋白表达下调与乳腺癌的发生有一定关系。分析Caspase3蛋白表达与乳腺癌临床分期的关系显示，有淋巴结转移的乳腺癌中的Caspase3阳性表达率低于无淋巴结转移的乳腺癌(P<0.05)。表明Caspase3的失表达可能在乳腺癌转移过程中发挥作用。Caspase3的表达情况与患者性别、年龄、临床分期等临床病理参数无明显相关性。因此推测Caspase3的低表达或表达缺失提示肿瘤患者预后差，还需进一步研究Caspase3与维吾尔族乳腺癌患者预后的关系。

另外，徐进等[16]研究显示胃癌和非典型增生区的Caspase3平均凋亡指数显著高于癌旁正常组织，提示Caspase3促进了胃癌细胞的凋亡。后续研究将进一步探讨Caspase3与维吾尔族乳腺癌凋亡的关系。

综上所述，C-erbB-2和Caspase3蛋白的异常改变或过度表达可能在维吾尔族乳腺良性病变恶性转化以及乳腺癌的发生中具有重要作用，为维吾尔族人群提供有用的分子生物学检测，也为今后探讨维、汉族女性乳腺癌C-erbB-2和Caspase3的表达差异奠定了基础，为进一步研究不同民族乳腺癌的发病学、临床诊断及治疗提供依据。

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(本文编辑杨晨晨)

The expression of C-erbB-2 and Caspase3 in breast cancer in Xinjiang Uygur

ZHAO Qian， Dilixiati Jinsihan， Tuluhong shalieer

(DepartmentofBreastSurgery,AffiliatedTumorHospital,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression of C-erbB-2 and Caspase3 in breast cancer in Xinjiang Uygur and Han women. MethodsFrom June 2012 to December 2014, 62 cases (breast cancer group) of breast cancer in the Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University who first diagnosed with breast were divided into Uygur group (37 cases) and Han group (25 cases). Another 30 cases of Han and 30 cases of Uygur women with benign breast lesions were as control specimens (control group). Immunohistochemical SP method were used to detect the expression of C-erbB-2 and Caspase3 between breast cancer group and control group, the expression of C-erbB-2 and Caspase3 were also detected between Uygur group and Han group. The correlation between clinicopathological features and expression of Caspase3 or C-erbB-2 were analyzed. ResultsThe expression of C-erbB-2 in breast cancer was significantly higher than control group, the difference was statistically significant (P<0.05). Positive rate Caspase3 in breast cancer was significantly lower than that in control group (P<0.05).The expression of Caspase3 and C-erbB-2 showed no significant differences (P>0.05) in Han and Uyghur group. The expression of C-erbB-2 was correlated with lymph node metastasis, clinical staging and HR (P<0.05). The expression of Caspase3 in patients with lymph node metastasis was higher than patients with no lymph node metastasis, the difference was statistically significant (P<0.05). ConclusionThe expression of C-erbB-2 and Caspase3 may play important role in to the carcinogenesis of breast cancer.

Keywords:Uyghur; female; breast cancer; C-erbB-2; Caspase3

[收稿日期：2016-03-03]

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.05.007

中图分类号：R737.9

文献标识码：A

文章编号：1009-5551(2016)05-0551-05

作者简介：赵倩(1981-)，女,硕士，主治医师，研究方向：乳腺疾病的诊治，E-mail：449103631@qq.com。

基金项目：2014年新疆医科大学附属肿瘤医院启动基金(肿2014-11)