分析巴中地区696例阴道分泌物的细菌分离鉴定及耐药性

王贞美，钟洪伟，王官容，王淑英，何　柳

(巴中市中心医院 1.检验科; 2.放射科；3.新生儿科,四川 巴中636000)



分析巴中地区696例阴道分泌物的细菌分离鉴定及耐药性

王贞美1，钟洪伟2，王官容1，王淑英1，何柳3

(巴中市中心医院 1.检验科; 2.放射科；3.新生儿科,四川 巴中636000)

摘要：目的了解不同地区不同人群阴道感染病原菌的分布及耐药情况，为临床对阴道炎治疗过程中合理选用抗生素提供科学的实验室依据。方法对巴中地区2013年7月至2015年6月期间的696例阴道分泌物样本进行培养，在VITEK2-compact全自动微生物分析仪对分离的菌株进行分离鉴定和药敏试验分析。结果696例样本中457例中培养出病原菌238株，阳性检出率为52.08%。细菌检出种类较多，革兰氏阳性球菌104株，革兰氏阴性杆菌63株，假丝酵母菌67株，其他细菌4株，阳性检出率分别为43.70%、26.47%和1.68%。葡萄球菌、粪肠球菌和B群无乳链球菌对万古霉素和利奈唑胺抗生素敏感率均为100.0%，粪肠球菌和B群无乳链球菌对氨苄西林和万古霉素的耐药率为0.00%。大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌对阿米卡星、美洛培南和亚胺培南抗生素敏感率均在97.00%以上，两种假丝酵母菌对氟康唑和伊曲康唑的耐药率均在34.00%以上。结论定期总结分析所在地区的阴道分泌物中病原菌分布及细菌总体耐药概率，对临床合理选择抗生素、提高疗效和降低耐药菌株的产生有着重要的临床意义。

关键词：阴道分泌物；细菌培养；vitek2compact全自动微生物分析仪；不同地区

(ChinJLabDiagn,2016,20:0628)

阴道炎是女性发病率最高的一种生殖系统感染，各年龄组均可发病。阴道分泌物检查是妇产科最常见的实验室检查项目,是监测女性生殖道感染的病原菌种类和耐药情况的重要检测手段[1]。准确及时了解阴道分泌物中病原菌以及各类抗菌药物的敏感性，有助于明确阴道感染性疾病的致病因素，对阴道疾病的诊治具有重要意义。不同地区不同人群阴道感染病原菌的类型存在一定差异，故笔者回顾分析巴中地区2013年7月至2015年6月期间的696例阴道分泌物样本进行的培养、细菌分离鉴定及耐药性分析的结果，旨在为临床合理选择抗生素治疗阴道感染性疾病提供科学的实验室依据。

1资料与方法

1.1一般资料696例来自2013年7月至2015年6月间在本院妇科门诊及住院患者送检的阴道分泌物样本，年龄17-78岁，平均年龄35.6±19.7。其中有617例为已婚，79例患者为未婚。21-44岁患者占85.74%，包括自述白带异味、阴部瘙痒以及不育症、放环和人流等患者。临床症状均表现外阴瘙痒、灼烧甚至有刺痛感，分泌物明显增多，呈稀薄白色，严重感染时分泌物呈脓性。胺臭味试验阳性。排除采集分泌物前有性生活(1d内)、盆浴、阴道灌洗，使用过抗生素或磺胺类药物治疗(7 d内)以及处于月经期的患者。

1.2仪器与试剂VITEK2-compact全自动微生物分析仪、细菌鉴定卡、药敏卡均由法国梅里埃公司提供，仪器操作严格按照标准操作规程进行检测。培养基来自郑州安图生物工程股份有限公司。快速革兰染色液由珠海贝索生物技术有限公司提供。质控菌株由卫生部临床检验中心提供铜绿假单胞菌 ATCC27 853、金黄色葡萄球菌 ATCC25 923、白假丝酵母菌ATCC90 029、大肠埃希菌ATCC25 922。

1.3方法患者在未用药前由妇科医生以无菌操作方式，对已婚患者借助于窥阴器使用无菌棉签在宫颈内2 cm左右处来回捻转采集阴道分泌物，未婚患者先用无菌生理盐水进行外阴消毒，用无菌长棉签深入采集分泌物，立即置入无菌培养试管中送检。样本迅速接种于不同培养基(血琼脂平板和中国篮板)，在37℃条件下进行厌氧菌、需氧菌、真菌和淋球菌培养。所有操作在30 min内完成，培养24 h后利用VITEK2-compact全自动微生物分析仪对培养菌落进行鉴定，用快速革兰染色液对细菌进行阴阳性确定。药敏试验按照法国梅里埃药敏试验卡使用说明书进行操作，将分离细菌配制成0.5麦氏浊度的菌悬液，用无菌棉签浸取菌悬液均匀地在M-H琼脂平板上涂布，置无菌间5 min左右。将药敏卡贴于平板表面，置VITEK2-compact全自动微生物分析仪35℃孵育20 h左右后，由仪器自动分析药敏。以上操作过程均严格按照第4版《全国临床检验操作规程》[2]要求开展。

1.4统计学分析对培养分离鉴定病原菌和优势药敏的敏感率用Excel建立数据库，用检出率和构成比表示，统计分析由SPSS17.0软件完成。

2结果

2.1阴道分泌物培养的病原菌分布情况696例阴道分泌物中，457例中培养出238株病原菌，阳性检出率为52.08%。细菌检出种类较多其中革兰氏阳性(G+)球菌104株，阳性检出率为43.70%，主要以葡萄球菌(43株)、粪肠球菌(26株)和B群无乳链球菌(19株)为主。革兰氏阴性(G-)杆菌67株，阳性检出率为26.47%，以大肠埃希氏菌(39株)和肺炎克雷伯菌(18株)为主。假丝酵母菌67株，阳性检出率为28.15%，以中白色假丝酵母菌(38株)和光滑假丝酵母菌(26株)为主。见表1。同时检出43例样本存在2种菌株混合感染，10例存在3种菌株混合感染，其中白色假丝酵母菌合并其他细菌感染26例，大肠埃希菌合并其他链球菌感染8例，大肠埃希菌合并粪肠球菌感染9例。

表1　238株病原菌

注：a表示棒状杆菌2株，奇异变形杆菌1株，草绿色链球菌1株。

2.2药敏试验结果

2.2.1革兰氏优势菌的耐药性分析G+球菌中优势分布的3种主要菌属(金黄色葡萄球菌、粪肠球菌和B群无乳链球菌)对万古霉素和利奈唑胺的敏感率均为100.0%，葡萄球菌中产β-内酰胺酶的有18株，占41.86%，粪肠球菌和B群无乳链球菌对氨苄西林和万古霉素的耐药率为0.00%；G-杆菌中优势分布的2种菌属主要是大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌，39株大肠埃希菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的有24株，产酶率高达61.54%，18株肺炎克雷伯菌中有3株产ESBLs(16.67%)对阿米卡星、美洛培南和亚胺培南的敏感率分别为97.44%，100%和94.44%。见表2和表3。

2.2.2假丝酵母菌药性分析 白色假丝酵母菌对益康唑、制菌霉素、酮康唑、两性霉素B的敏感率分别为84.21%、86.91%、92.11%和94.76%；对5-氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑的耐药率分别为34.21%，63.16%和92.11%；光滑假丝酵母菌对益康唑、制菌霉素、酮康唑、两性霉素B的敏感率分别为84.61%、92.31%、92.31%和88.46%；对5-氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑的耐药率分别为34.62%，65.38%和92.31%，见表4。

表2　G+球菌主要优势菌的耐药性 耐药株(n)/耐药率(%)

表3　G-杆菌主要优势菌的耐药性　n/ %

表4假丝酵母菌和念珠菌主要优势菌的耐药性(n/%)

药敏卡白色假丝酵母菌(n=38)光滑假丝酵母菌(n=26)益康唑6(15.79)4(15.38)制菌霉素5(13.16)1(7.69)酮康唑3(7.89)1(7.69)两性霉素B2(5.26)3(11.54)5-氟胞嘧啶13(34.21)9(34.62)氟康唑24(63.16)17(65.38)伊曲康唑35(42.11)24(92.31)

3讨论

随着临床上各种广谱、超广谱的抗生素以及不合理的抗菌药物在各类疾病的应用增加，导致厌氧菌感染显著下降，霉菌感染上升，越来越多的病原菌产生耐药性，给临床治疗带来一定的困难。细菌和真菌是阴道感染较为常见的致病微生物，阴道分泌物培养鉴定是明确女性泌尿生殖系感染性疾病的病因主要方法，对阴道疾病的诊治具有重要的临床意义[3]。为此我院临床微生物室专门引进梅里埃VITEK2-compact全自动微生物分析仪来提高细菌鉴定和耐药分析能力。该仪器具有操作简便、检测速度快、交叉污染率低以及特异性、敏感性和重复性高的特点，实现细菌微量快速培养基、分类鉴定、微量生化反应等技术自动化，绝大多数细菌的鉴定可在2-18 h内得出结果。本地区696例阴道分泌物培养鉴定中，457例样本中培养出病原菌238株，阳性检出率为52.08%。细菌检出种类较多其中G+球菌104株，阳性检出率为43.70%，主要以葡萄球菌(43株)、粪肠球菌(26株)和B群无乳链球菌(19株)为主。G-杆菌63株，阳性检出率为26.47%，以大肠埃希氏菌(39株)和肺炎克雷伯菌(18株)为主。假丝酵母菌67株，阳性检出率为28.15%，以中白色假丝酵母菌(38株)和光滑假丝酵母菌(26株)为主，说明阴道炎症中病原菌种类较多,与陈平[4]学者报道一致。同时检出43例样本存在2种菌株混合感染，10例存在3种菌株混合感染，其中白色假丝酵母菌合并其他细菌感染26例，大肠埃希菌合并其他球菌感染8例，大肠埃希菌合并粪肠球菌感染9例。本文回顾分析结果与张国雄等[5]的研究结果相近，但粪肠球菌和混合感染的感染率有所不同，这可能与区域的致病菌流行不同以及当地卫生状况不同有关。说明阴道内环境一旦发生变化，致阴道微生物生态平衡被破坏，阴道常住菌群(条件致病菌)转变为致病微生物，导致细菌性和真菌性阴道炎的发生，严重危害女性身心健康[6]。

对G+球菌几种常见致病菌的药敏结果统计分析，发现葡萄球菌在G+球菌中感染率最高，其次是粪肠球菌和B群无乳链球菌。葡萄球菌可合成的新型青霉素结合蛋白2a(PBP2a),引起抗生素作用靶位改变而导致病原菌耐药。葡萄球菌对万古霉素和利奈唑胺的敏感率均为100.0%，可作为该菌感染治疗的最佳药物。哌拉西林、克林霉素、复方新诺明、利福平和氯霉素等几种药物对葡萄球菌的耐药率均在25.00%以下，可作为该菌感染治疗的首选药物，青霉素、红霉素、四环素、林可霉素、氨苄西林和亚胺培南的耐药率均在60.00%以上，对该菌感染的治疗效果不佳，与黄烈等学者[7]文献报道一致；粪肠球菌和B群无乳链球菌对青霉素、万古霉素、氨苄西林和利奈唑胺的敏感率均在90.00%以上，治疗可首选。红霉素、氯霉素、四环素和利福平等常用抗生素的耐药性在50.00%以上，对其感染治疗效果较低。葡萄球菌中产β-内酰胺酶的有18株，占41.86%。表明葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素有较高的耐药性，临床常用抗生素治疗效果差。

对G-球菌几种常见致病菌的药敏结果统计分析，发现18株肺炎克雷伯菌中有4株产ESBLs(22.22%)，39株大肠埃希菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的有21株，产酶率高达53.85%，导致ESBLs菌株增多的原因是临床广谱抗生素(如三代头孢菌素)滥用所致。其结果高于国内20.00%-40.00%的发生率[8]，ESBLs的基因由耐药质粒携带是导致2种菌属对广谱β-内酰胺酶类抗生素耐药的主要原因[9]。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌2种菌属仅对阿米卡星、美洛培南和亚胺培南的敏感率均在97.00%以上，可作为治疗感染的首选药物，对复方新诺明、氨曲南、哌拉西林和左氧氟沙星及多种头孢菌素等药物的耐药率达50.00%以上。表明G-杆菌对三代头孢菌素、氨基糖苷类、喹诺酮类抗生素呈多重耐药现象，与方家敏等[10]研究报道一致。因此，临床在治疗过程中对ESBLs菌株引起的感染时，正确选用抗生素，避免耐药菌株的扩张。

对真菌感染疾病的几种常见致病菌的药敏结果进行统计分析，发现白色假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌对益康唑、制菌霉素、酮康唑、两性霉素B的敏感率均在80.00%以上，可作为假丝酵母菌性阴道病的首选药物；对5-氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑的耐药率均较高，其治疗效果相对较差；这与临床广谱抗生素和抗真菌药物滥用、免疫缺陷人群的增多以及女性阴道内环境变化密切相关。这可与区域的致病菌流行和当地卫生状况不同以及临床抗生素控制有关。对真菌感染患者的治疗应尽量避免长期应用广谱抗菌药物以及糖皮质激素，以免降低机体免疫功能或破坏阴道的正常菌群，给真菌感染提供条件[11]。因此，在临床为患者选择耐药性较低的药物进行治疗，应参考患者的不同临床表现、实验室鉴定的阴道分泌物中感染的致病菌以及药敏试验结果。这样就会缩短治疗时间，获得良好效果。

本研究对696例阴道分泌物分析表明，阴道疾病患者阴道分泌物感染的病原学分布较为广泛，有必要进行阴道分泌物的细菌培养和药敏试验。并定期总结分析所在地区的阴道分泌物中病原菌分布及细菌总体耐药率，对临床合理选择抗生素、提高疗效和降低耐药菌株的产生有着重要的临床意义。

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Analysis in Bazhong area of bacterial isolation and drug resistance in 696 cases of vaginal discharge

WANGZhen-mei,ZHONGHong-wei,WANGGuan-rong,etal.

(DepartmentofLaboratory,BazhongMunicipalCentralHospital,Bazhon636000,China)

Abstract:ObjectiveTo understand the distribution and drug resistance of pathogenic bacteria in different regions of different populations,and to provide scientific basis for clinical treatment of antibiotics.MethodsThe Bazhong was 696 cases sample of vaginal secretion from July 2013 to June 2015 in cultured,and the isolation and drug sensitivity test were analyzed by VITEK2-compact automatic microbial analyzer.ResultsIn 696 of the 457 samples,238 were cultured in,and the positive rate was 52.08%.There were 104 strains of bacteria,strains of gram positive bacteria,63 gram negative bacilli,67 Candida albicans,4 other bacteria,and the positive detection rate was 43.70%,26.47%,28.15% and 1.68% respectively.Staphylococcus aureus,Enterococcus faecalis and B group is Streptococcus agalactiae sensitive rate to vancomycin and linezolid antibiotics were 100.0%,Enterococcus faecalis and B group Streptococcus agalactiae to ampicillin and vancomycin resistant rate was 0.00%.Escherichia coli and pneumonia Klebsiella pneumoniae to amikacin,meropenem and imipenem antibiotic sensitive rate were above 97.00%,two kinds of Candida albicans to fluconazole and itraconazole resistance rate was 34.00%.ConclusionTo sum up the distribution of pathogenic bacteria in the vaginal discharge and the overall drug resistance rate of bacteria in the region,it has important clinical significance for clinical rational selection of antibiotics,improving the curative effect and reducing the production of drug resistant strains.

Key words:Vaginal discharge；bacterial culture;VITEK2-compact automatic microbial analyzer;Different regions

(收稿日期：2015-11-27)

中图分类号：R378

文献标识码：A

文章编号：1007-4287(2016)04-0628-04