翁沥通胶囊含量测定标准的测定

2016-04-24杨建龙韩晶曲艳丽蔡广知贡济宇

中国中医药现代远程教育 2016年11期

关键词：贝母三氯甲烷乙腈

杨建龙韩晶曲艳丽蔡广知贡济宇*

（1长春市食品药品检验中心中药室，长春13 0 0 12；2吉林省食品检验所检验二部，长春13 0 10 3；3长春中医药大学药学院，长春13 0 11 7）

翁沥通胶囊含量测定标准的测定

杨建龙1韩晶2曲艳丽1蔡广知3贡济宇3*

（1长春市食品药品检验中心中药室，长春13 0 0 12；2吉林省食品检验所检验二部，长春13 0 10 3；3长春中医药大学药学院，长春13 0 11 7）

目的提高翁沥通胶囊的质量标准，建立翁沥通胶囊中贝母素乙的含量测定方法。方法采用A g i l e n t T C-C 18（4.6 m m×15 0 m m，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.1%三乙胺溶液（6 5∶3 5），E L S D参数：漂移管温度：8 5℃，载气流量：2.3 L· m i n-1。结果采用该方法测定贝母素乙的线性范围为0.77 9～7.7 9 2 μg，贝母素乙的回归方程为：Y=1.4 4 6 6 x+1.5 0 5 6，r=0.9 9 7，平均回收率是9 6.4 2%，R S D=1.1%，精密度、稳定性、重复性良好。结论该方法简便易行，准确性高，结果可靠，能准确反映出翁沥通胶囊的质量，为药典中增加翁沥通胶囊质量标准提供了依据。

H P L C-E L S D；贝母素乙；含量测定

翁沥通胶囊是由薏苡仁、浙贝母、栀子、金银花等中药组成的复方制剂，具有清热利湿，散结去瘀的功效。用于证属湿热雍结，痰瘀交阻之前列腺增生症［1］。本品收载于国家食品药品监督管理局标准YBZ09432004，规格为0.4 g/粒，标准收载了贝母素乙的薄层扫描法含量测定，扫描波长为500 nm，参比波长为650 nm，在实际操作过程中发现该标准影响因素较多，显色后扫描，受时间影响较大，灵敏度较低，精密度和重现性极差，无法准确反映出翁沥通胶囊中贝母素乙的含量［2］。由于翁沥通胶囊中的指标性成分贝母素乙为生物碱，仅有一个双键，缺少典型的共轭体系［3］，只有末端吸收，在紫外区域没有合适的适用于含量测定的紫外吸收范围，受溶剂吸收影响较大，无法通过紫外检测器检测到。因此通过LC分离，最终采用蒸发光检测器检测是较好的选择。

采用高效液相色谱法测定翁沥通胶囊的指标性成分贝母素乙的含量测定未见报道，为了更好的控制翁沥通胶囊制剂的质量，笔者采用HPLC-ELSD法，建立了准确度较好的定量方法，该方法可以作为翁沥通胶囊的修订提高提供依据。

1 仪器与材料

仪器：岛津“LC-2010”高效液相色谱仪；Alltech 2000ES型ELSD检测器；“GR-202”电子天平。试剂：乙腈（色谱纯），其他试剂均为分析纯。材料：贝母素乙（中国药品生物制品所提供，110751-200709，99.8%），在五氧化二磷干燥器中减压干燥12 h以上使用）。翁沥通胶囊，由吉林华威药业生产厂家提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱为Agilent TC-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.3%二乙胺水（65∶35），流速为1.0 mL·min-1，柱温为30℃，ELSD检测器：漂移管温度85℃，载气压力0.33 MPa。分离结果见图1。

图1翁沥通胶囊供试品和贝母素乙对照品H P L C-E L S D色谱图

2.2 对照品溶液的制备精密称取贝母素乙对照品19.52 mg置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得贝母素乙对照品储备液。精密吸取上述储备液5 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液［3］。

2.3 供试品溶液的制备取取供试品10粒，取出内容物混匀，精密称定，取内容物约2.5 g，精密称定，置烧瓶中，加浓氨试液5 ml浸润1小时，精密加入三氯甲烷-甲醇（4∶1）的混合溶液40 ml，称定重量，混匀，置80℃水浴中加热回流1小时，放冷，再称定重量，加上述混合溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液10 ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至2 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.4 线性关系的考察分别精密吸取上述对照品储备液1.0 ml、2 ml、3 ml、5 ml、7 ml、10 ml置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图峰面积，以贝母素乙峰面积的对数值为纵坐标，对照品质量（ng）的对数值为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，贝母素乙的回归方程为：Y=1.4466X+1.5056，r=0.997，贝母素乙在0.779～7.792 μg内呈良好的线性关系。

2.5 重复性试验分别精密称取同一批样品（批号150101）6份，按上述含量测定项方法进行5次平行试验，结果表明本法重复性较好贝母素乙（0.35 mg/粒）的RSD为2.08%。

2.6 精密度试验取同一样品溶液，测定6次，以贝母素乙峰面积计算，贝母素乙的RSD为1.98%。

2.7 稳定性取同一样品溶液，在室温下分别放置0、2、4、6、12、24 h时分别进样，测定翁沥通胶囊中贝母素乙的含量，RSD为2.10%，结果表明贝母素乙在24 h内稳定。

2.8 回收率按上述测定方法，精密称取已知含量的翁沥通胶囊内容物，分别加入对照品母液0.5 ml，按照色谱条件测定，计算回收率，结果表明本法具有良好的准确性。

表1 贝母素乙回收率试验结果

2.9 样品测定分别精密吸取对照品溶液5 μl和10 μl，供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，按上述HPLCELSD条件进行分析测定，用外标两点法对数方程计算贝母素乙的含量，结果见下表。

表2 供试品中贝母素乙含量

3 讨论

3.1 提取条件的选择经过查阅相关文献，本实验考察了四种提取溶剂：三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（4∶1）、三氯甲烷-甲醇（2∶1）、乙醚，按照上述四种提取溶剂进行提取，并按建立的色谱条件进行测定，结果表明三氯甲烷-甲醇（4∶1）提取效率最高，其次是三氯甲烷-甲醇（2∶1）和三氯甲烷，最后是乙醚。故采用三氯甲烷-甲醇（4∶1）作为翁沥通胶囊的提取溶剂。取同一批号的翁沥通胶囊样品，分别在70℃和80℃回流，结果表明80℃回流提取效率高，因此采用80℃回流的提取方法。考察了回流提取时间为1、2、3 h的结果，结果表明测定结果在这三个回流提取条件下影响不是很大，即提取时间为1 h时足以提取充分，综合经济、环保、高效的因素，选择回流提取时间为1 h。取样量约2.5 g时，考察了加入浓氨试液3 ml、4 ml、5 ml进行试验，结果表明加入浓氨试液5 ml时较为适宜。3 ml和4 ml很难将翁沥通胶囊内容物全部浸泡

3.2 色谱条件的优化考察了乙腈-0.3%二乙胺水溶液在70∶30、65∶35、60∶40三个比例下的色谱条件，70∶30条件下贝母素乙分离度不合格，其余两种比例流动相条件下分离度均可达到要求，虽然60∶40条件下分离度更好，但是分析时间会延长，流动相中水的比例较其他两种高，基线噪音会偏大，综合考虑选择乙腈-0.3%二乙胺水溶液（65∶35）作为最终流动相。考察了色谱柱温度在30℃、35℃、40℃下的条件，三种温度下出峰时间和峰形略有变化，影响不大，因此选择接近常温的30℃作为色谱柱温度。适当的飘移管温度设置是基于乙腈-0.3%二乙胺水溶液流动相的挥发性和流速，如果飘移管温度设置过高将会产生较大的基线波动，通过选择最终选择飘移管温度为85℃，气体流量设置为2.3 L/ml。翁沥通胶囊原标准中贝母素乙的含量限度为不低于0.072 mg/粒，限度较低，无法体现出翁沥通胶囊真实品质，采用此方法测定的5批翁沥通胶囊样品中贝母素乙的含量结果在0.2957～0.3882/粒之间，所测结果高于原标准的含量限度的4～5倍，因此在修订标准时，建议提高翁沥通胶囊中贝母素乙的含量限度。此方法的最大优点是准确性高，结果可靠，能准确反反映出翁沥通胶囊的质量，较原标准来说能更加准确的控制翁沥通胶囊的质量，该实验可以为提高翁沥通胶囊质量标准提供了依据。

［1］国家食品药品监督管理局标准Y B Z 0 9 4 3 2004.［2］张浩，李成网.HPLC-ELSD法测定皖贝止咳胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2009，5（15）：4-5.

［3］韩静.HPLC-ELSD法同时测定平贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量［J］.中国药师，2009，12（5）：5 9 5.

［4］姜艳，李萍.HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量［J］.中国药学杂志，2005（8）：12 5 7.

YANG Jianlong1； HANG Jing2； QU Yanli1； CAI Guangzhi3； GONG Jiyu3*
（1. Chinese Herbal Medicine Office； Changchun Center for Food and Drug Control； Changchun 130012； China；2. Laboratory； Jilin Institute for Food Control； Changchun 130103； China；3. College of Pharmacy； Changchun University of Chinese Medicine； Changchun 130117； China）

Objective To imProve quality standards of Wenglitong caPsules，and to establish the determination method of Peiminine in Wenglitong caPsules.Methods Using Agilent TC-C18（4.6mm×150mm，5μm）column with a mobile Phase of acetonitrile-0.1% triethylamine（65：35），ELSD Parameters as follows：drift tube temPerature is 85℃，and carrier gas flow rate is 2.3L min-1.Results Using this method for the determination Peiminine linear range 0.779-7.792μg，Peiminine regression equation：Y=1.4466X+ 1.5056，r=0.997，the average recovery rate was 96.42%，RSD=1.1%，and had the Precision degree，stability and good reProducibility.Conclusion The method is simPle，highly accurate，has reliable results，can accurately reflect the quality Wenglitong caPsules，and Provide basis for the increase quality standard of Wenglitong caPsule in PharmacoPoeia.

HPLC-ELSD；Peiminine；content determination

10.3 9 6 9/j.issn.1672-2 77 9.2016.11.0 6 6

1672-2 77 9（2016）-11-0 14 6-0 3