阳和胶囊对去势后骨质疏松症大鼠血清B G P、E2、L H、F S H 表达的实验研究※

2016-04-24马琳项颗孙莉

中国中医药现代远程教育 2016年11期

关键词：去势骨质疏松症骨密度

马琳项颗孙莉

（吉林省中医药科学院老年病科，长春13 0 0 2 1）

阳和胶囊对去势后骨质疏松症大鼠血清B G P、E2、L H、F S H 表达的实验研究※

马琳项颗孙莉*

（吉林省中医药科学院老年病科，长春13 0 0 2 1）

目的通过动物实验对院内制剂阳和胶囊的药效作用作出正确评价。方法对去势模型大鼠分别以3.2 4、1.6 2、0.8 1 g药粉/k g体重剂量灌胃给药15周后，分别测定血清中骨钙素（B G P）、雌激素（E2）、促卵泡激素（F S H）、促黄体生成素（L H）含量及胫骨、股骨骨密度。结果院内制剂阳和胶囊对血清中B G P、E2、L H、F S H含量及胫骨和股骨骨密度均有一定的提升作用，其中骨钙素及促黄体生成素含量与模型组经统计学比较差异显著。结论院内制剂阳和胶囊具有提升血清中B G P、E2、L H、F S H含量及改善骨密度作用。

去势；大鼠；骨钙素；雌激素；促卵泡激素；促黄体生成素；骨质疏松证；骨瘘

骨质疏松症是世界最流行的人类疾病之一［1］，全世界患病总人数超过2亿，发病率位居常见病、多发病的第6位［2］。我国老年人口居于世界首位，现有骨质疏松症患者9000万，占总人口的7.1%，预计到2050年将增加到2.2亿，那时全世界一半以上的骨质疏松性骨折将发生在亚洲，而绝大多数是在我国［3］［4］。随着我国老年人口的增加，骨质疏松症发病率处于上升趋势，给社会带来巨大危害，已被WHO列入三大老年病之一。积极开展高效的预防与治疗骨质疏松症的中医药研究对于降低老年人群骨折率、提升老年人生活质量等都具有重要意义。我科室多年来在中医药防治老年骨质疏松症方面做了大量工作，取得了一些成绩。我们采用院内制剂阳和胶囊治疗该病，临床证实疗效可靠，可明显改善患者临床症状。为了进一步探讨阳和胶囊防治老年骨质疏松症的作用机制，我们近三年又进行了阳和胶囊对去势后骨质疏松症大鼠血清BGP、E2、LH、FSH表达的实验研究，为新药开发研究提供依据，为探索骨质疏松症新的防治技术奠定基础。结果报道如下。

1 实验材料

1.1 实验动物wistar种大白鼠（由延边大学实验动物中心提供）

1.2 实验试剂阳和胶囊（由吉林省中医药科学院制剂室提供），胶囊内容物棕色粉末，没有生药量标示，0.3 g药粉/粒。实验时用生理盐水配至所需浓度。

阳性药选用（1）戊酸雌二醇片（Bayer），淡黄色片，1 mg/片，批号226B。（2）仙灵骨葆胶囊，贵州同济堂制药有限公司，胶囊内容物为棕黄色药粉，0.5 g药粉/粒，批号1303125。骨钙素、雌激素、促卵泡激素、促黄体生成素酶联免疫试剂盒由上海常斤生物科技有限公司提供。

1.3 实验仪器DNM-9602酶标仪：北京普朗新技术有限公司；洗板机：芬兰（Thermo Labsystems）；TG16W微量高速离心机；GNP-9080隔水式恒温培养箱；美国HOLOGIC双能X线骨密度仪。

2 过程和方法

2.1 模型制造取雌性大鼠50只，以2%戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉，腹位固定，躯干下1/3处仔细消毒清洁皮肤，离脊柱两侧各1.5 cm处作纵向切口（1 cm），分离肌肉层，可见淡黄色脂肪团，剥离脂肪团找出卵巢，结扎与子宫角连接处，剪掉卵巢及多余丝线，将组织推回腹腔，缝合切口，局部清洁消毒，术后常规饲养，正常饮水、摄食。

2.2 给药方法术后三日将大鼠分组，假手术组（进行手术过程，不切除卵巢）做正常对照，其余鼠随机分为六组，模型对照组、雌二醇对照组、仙灵骨葆对照组、阳和胶囊高中低三个剂量组，阳性对照组和阳和胶囊组每日给药一次，连续15周，假手术组和模型对照组每日给予等体积水。

2.3 观测指标末次给药后1 h，麻醉动物，腹主动脉采血，分离血清，分别按酶联免疫试剂盒中所要求操作方法做标准曲线，测定血清中BGP、E2、LH、FSH含量，并提取大鼠胫骨和股骨，分别测定骨密度。

3 结果

见表1。

表1 各组B G P、E2、F S H、L H及骨密度值比较表（±s）

注：给药组与模型组比较*P＜0.0 5**P＜0.0 1***P＜0.0 0 1，假手术组与模型组比较△P＜0.0 5△△P＜0.0 1

组别给药剂量（g药粉/ k g）动物数B G P（p g / m l；x ± s D）E2（p g / m l；x ± s D）F S H（n g / m l；x ± s D）L H（n g / m l；x ± s D）B M D（g / c m2）胫骨股骨假手术组模型对照组戊酸雌二醇片（12 μ g / k g）仙灵骨葆胶囊阳和胶囊组1阳和胶囊组2阳和胶囊组3 --12 μ g / k g 2 . 163 . 2 4 1 . 6 2 0 . 8 18 8 8 8 8 8 8 2 0 7 . 0 6 ± 2 1 . 7 9△△17 2 . 3 9 8 ± 2 1 . 6 6 19 6 . 16 1 ± 2 3 . 0 4*19 9 . 8 6 8 ± 3 2 . 19*19 5 . 8 0 6 ± 17 . 6 3*1 77 . 5 8 7 ± 3 2 . 15 18 3 . 3 5 9 ± 3 2 . 3 12 14 . 7 6 3 ± 2 6 . 8 1△18 5 . 5 12 ± 2 3 . 9 5 2 0 6 . 2 9 1 ± 18 . 7 6*2 0 3 . 13 9 ± 2 9 . 5 2 2 0 2 . 2 4 5 ± 3 0 . 2 3 19 3 . 2 0 1 ± 3 6 . 7 11 9 0 . 9 5 6 ± 3 6 . 15 4 3 . 2 9 4 ± 5 . 8 4△△3 1 . 17 6 ± 7 . 8 6 3 7 . 3 3 8 ± 7 . 0 5 3 6 . 9 2 5 ± 3 . 7 3 3 6 . 2 13 ± 5 . 9 5 3 1 . 8 2 1 ± 6 . 5 6 3 3 . 3 0 1 ± 6 . 5 9 7 . 4 0 7 ± 0 . 9 2△6 . 11 1 ± 1 . 0 17 . 4 9 3 ± 1 . 7 1*7 . 10 0 ± 0 . 9 4*7 . 3 2 2 ± 1 . 2 6*6 . 6 5 1 ± 1 . 2 0 6 . 5 4 9 ± 1 . 3 9 0 . 2 3 3 ± 0 . 0 4 10 . 2 0 8 ± 0 . 0 3 2 0 . 2 2 7 ± 0 . 0 14 0 . 2 2 2 ± 0 . 0 3 2 0 . 2 18 ± 0 . 0 3 5*0 . 2 13 ± 0 . 0 2 2 0 . 2 11 ± 0 . 0 2 7 0 . 2 5 2 ± 0 . 0 4 9 0 . 2 17 ± 0 . 0 3 4 0 . 2 4 6 ± 0 . 0 2 8 0 . 2 4 2 ± 0 . 0 16 0 . 2 3 4 ± 0 . 0 3 6*0 . 2 3 2 ± 0 . 0 5 2 0 . 2 2 2 ± 0 . 0 13

4 结论

院内制剂阳和胶囊，去势模型大鼠以3.24、1.62、0.81 g药粉/kg体重剂量灌胃给药，对血清中BGP、E2、LH、FSH含量及胫骨和股骨骨密度均有一定的提升作用，其中骨钙素及促黄体生成素含量影响与模型组经统计学比较差异显著。

5 讨论

骨质疏松症（OP）是中老年人群中的常见、多发病，临床以腰背痛、骨关节痛、骨折及驼背和身高缩短等位主要表现。据统计［5］，60岁以上的老年人发病率最高，50岁以上的女性年龄每增加10岁，骨质疏松症的发病率增加10%。该病不仅减低了患者本人的生存质量，而且给家庭和社会带来沉重负担。

目前，中西医在治疗骨质疏松症方面的药物很多，但尚无一种成熟有效的治疗方案。西药主要分两大类：一类是包括降钙素、双磷酸盐、维生素D、钙剂等骨吸收的抑制剂；另一类是促进骨形成的药物，包括氟化物，甲状旁腺激素（PTH）及PTH片［6］。西药治疗副作用较多，需对其各项理化指标进行定期监测，以确保临床药物治疗的安全性［7］。中医药在本病的治疗中以其疗效确切、副作用少、价格低廉等特点凸显出巨大的优势。骨质疏松症在中医学中属于“骨痿”、“骨瘦”、“骨枯”、“骨极”、“骨肉疏薄”等疾病的范畴，肾主骨生髓，肾中精气的盛衰决定着骨骼的强壮与衰弱，肾虚是骨痿发生的根本。《素问经注节解·瘦论》云：“肾主骨，骨借髓以强，身凭足以任。肾亏则髓虚，髓虚则骨枯而足无力以任身。”《素问·痿论》亦云［8］：“肾乃水脏，水不胜火，则骨枯而髓虚，发为骨痿”。因此，正是体现治病必求其本的原则，《素问·痿论》提出了“骨痿者，补肾以治之”。我院院内制剂阳和胶囊由熟地、补骨脂、炮姜、牛膝、枳壳、肉桂、菟丝子、白芥子等药物组成，全方从温补肾阳入手，温阳与补血并用，滋补与辛散同施，使温而不燥，滋而不腻，扶正祛邪，标本同治，共奏温经通阳，补肾壮骨之功。本研究通过动物实验观察了院内制剂阳和胶囊对去势大鼠的骨密度及BGP、E2、LH、FSH水平的影响，探讨了阳和胶囊治疗骨质疏松症的作用机制。研究结果表明：我院院内制剂阳和胶囊可以不同程度地改善骨质疏松模型大鼠的血清BGP、E2、LH、FSH水平，提高骨密度，其中骨钙素及促黄体生成素含量与模型组经统计学比较差异显著。中医药治疗骨质疏松症的特色在于全身调整，中药对骨质疏松症的作用是通过多途径、多层次、多靶点的综合药理作用而实现的，既从根本着手，又兼顾骨质疏松所产生的表象，如疼痛、腰膝酸软等，标本同治，通过对机体全身性的调节作用，达到纠正机体激素平衡和负钙平衡作用的功效。有现代研究表明［9］，肾虚时免疫功能下降，内分泌系统奈乱并有微量元素的改变，下丘脑-垂体-性腺轴功能的减退，性激素水平下降，进而引起成骨功能下降，使单位体积的骨组织含量减少，从而导致骨质疏松症的发生。本研究通过动物实验证实了院内制剂阳和胶囊通过调节微量元素，改善骨代谢，从而对骨质疏松症起到治疗作用。然而，骨的代谢是一个复杂的过程，由多种因素参与其中，所以确切作用机制的阐明尚有待进一步研究。

［1］［1］EismanJA.Genetics of Osteoporosis［J］.EndocrRev，1999，20：788-804

［2］赵冀伟.骨质疏松药物治疗概述［J］.天津药学，2004，16（2）：6 8 3.

［3］宋红湘.肾益精法治疗骨质疏松症8 4例［J］.陕西中医，2 0 0 3，2 4（12）：10 7 5-10 77.

［4］赵建，崔书国，国延军，等.补肾壮骨活血胶囊治疗骨质疏松症15 9例［J］.四川中医，2005，2 3（7）：7 1-7 2.

［5］周久贸，刘浩，蒋森，等.沈阳地区2 2 8 8例骨密度测定及骨质疏松症发病率分析［J］.中国临床医学影像杂志，2 0 0 8，19（2）：12 1-12 4.

［6］［6］UchioY，OchiM，AdachiN，etal.Intraos seou shy pertension and ve-nouscongestion in osteon ecrosis of the knee.Clin Or thop.2001.

［7］郭增平.骨质疏松症及其发生机制［J］.生物学教学，2 0 0 8，3 3（5）：8-10.

［8］吴犀翎，李跃华.原发性骨质疏松症中医药内治法文献研究［J］.辽宁中医药大学学报.2011（11）：5 4 3.

［9］寇美静，邹小娟.肾虚与骨质疏松症［J］.湖北中医学晓学报，2006，8（4）：6 1-6 2.

MA Lin； XIANG Ke； Sun Li
（Department of Geriatrics； Jilin Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine； Changcun 130021； China）

Objective Through animal eXPeriments，to make a correct evaluation of effect on hosPital PreParation Yanghe caPsule. Methods The ovariectomized model rats were 3.24，1.62 and 0.81g Powder/kg weight dose gavage for 15 weeks，then serum osteocalcin（BGP），estrogen（E2），Promoting luteinizing hormone and follicle stimulating hormone（FSH），luteinizing hormone（LH）and the content of tibial and femoral bone mineral density were measured seParately.Results HosPital PreParation Yanghe caPsule on serum BGP，E2，LH，FSH and the content of tibia and femur bone density had a certain Promotion effect.The effect of osteocalcin and luteinizing hormone content and model grouP had statistically significant difference.Conclusion HosPital PreParation Yanghe caPsule can Promote serum BGP，E2，LH and FSH content，and imProve bone density.

ovariectomized；rat；osteocalcin；estrogen；follicle stimulating hormone；luteinizing hormone；osteoPorosis；atroPhic debility of bones

10.3 9 6 9/j.issn.1672-2 77 9.2016.11.0 6 5

1672-2 77 9（2016）-11-0 14 4-0 3