APP下载

金线吊乌龟多糖的含量测定

2016-04-23尚宁宁禹亚杰彭腾高鹏

中药与临床 2016年1期
关键词:含量测定多糖

尚宁宁,禹亚杰,彭腾,高鹏



金线吊乌龟多糖的含量测定

尚宁宁1,禹亚杰1,彭腾1,高鹏2

[摘要]目的:测定金线吊乌龟多糖的含量。方法:采用水提醇沉法提取、纯化金线吊乌龟多糖, 以葡萄糖标准液绘制标准曲线, 用硫酸-苯酚比色法于490 nm波长处测定金线吊乌龟多糖的含量。结果:金线吊乌龟精制多糖得率为2.31%,精制多糖含量为71.78%,金线吊乌龟原药材中总多糖含量为1.66%。结论:利用硫酸-苯酚比色法测定金线吊乌龟多糖含量,简便易行,稳定性、精密度和重复性良好,结果准确。

[关键词]金线吊乌龟;多糖;含量测定

[作者单位]1.成都中医药大学 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地,四川 成都 611137;2.成都煜泉绿健科技有限公司,四川 成都 610072

金线吊乌龟(Stephania cepharantha Hayata)为防己科千金藤属植物,其块根为民间常用草药,称白药、白药子或白大药。味苦性寒,有清热解毒、消肿止痛之功效[1],常用于治疗痈疽肿毒、腮腺炎、毒蛇咬伤等。目前,对金线吊乌龟多糖方面的研究尚未见报道。本实验采用水提醇沉法提取、纯化金线吊乌龟多糖,采用硫酸-苯酚比色法测定其多糖含量,以期为金线吊乌龟多糖的开发利用研究提供参考。

1 实验材料

1.1仪器

二级管阵列紫外分光光度计(安捷伦,G84530);TDZ5-WS多管架自动平衡离心机;FA2004N型电子天平(上海民怡仪器仪表有限公司);DZG-6020型真空干燥箱(上海信森实验仪器有限公司);DGG-9240A电热恒温鼓风干燥箱(上海信森实验仪器有限公司);电炉,干燥器,称量瓶等。

1.2药材与试剂

金线吊乌龟购自四川省成都市新荷花池药材市场,成都中医药大学彭腾教授鉴定。

D-葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所,批号110833-200503);硫酸、苯酚、丙酮、乙醚等试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1绘制标准曲线

参照余兰[2]等人的方法,精密称取105℃干燥至恒重的D-葡萄糖对照品0.0034 g,至25 mL容量瓶,加蒸馏水溶解、定容,即D-葡萄糖标准液的质量浓度为0.136 mg.mL-1。精密吸取D-葡萄糖标准液0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL至10 mL具塞试管中,分别快速加入1.0 mL 质量分数为5%的苯酚和7.0mL浓硫酸,充分混匀,于沸水浴中加热15 min。取出冷却至室温,用蒸馏水补足至10 mL。另取1.0 mL的蒸馏水同上平行操作制得空白对照液。以空白对照液作参比,在紫外分光光度计上扫描,于490 nm处测吸光度值。以D-葡萄糖标准液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。标准液测定结果见表1,标准曲线绘制结果见图1。得回归方程:A= 44.136C+ 0.0395(R2= 0.9944)。

表1 标准液测定结果

图1 葡萄糖标准曲线

2.2多糖的提取、纯化

参考文献([2~6]),称取金线吊乌龟药材100.08 g,加800 mL水浸泡30 min,煎煮1.5 h,纱布滤过,滤液保存。药渣再煎煮2次,合并煎液,浓缩至200 mL。加质量分数为95%的乙醇,使溶液中乙醇的质量分数为80%,静置,待沉淀完全,6000 r.min(-1)离心10 min,弃去上清液。沉淀用200 mL热水溶解,重复上步醇沉操作3次。沉淀分别用无水乙醚、丙酮多次洗涤,待挥干后,转移至已干燥至恒重的蒸发皿中,60 ℃真空干燥,得精制多糖2.3080 g,得率为2.31%。

2.3供试液制备

精密称取多糖精制品0.0052 g,用蒸馏水溶解后定容至50 mL容量瓶中,摇匀,即为多糖供试液。

2.4多糖含量测定

精密吸取多糖供试液1.0 mL,按“2.1”项下方法,连续测定3次。平均吸光度值为0.36898,依回归方程,得精制多糖含量为71.78%。根据精制多糖含量×精制多糖总量/原药材量,得金线吊乌龟原药材中总多糖含量为1.66%。

3 方法学考察

3.1精密度试验

取1.0 mL葡萄糖标准溶液,按标准曲线绘制的方法连续测定6次,平均吸光度值为0.62466,RSD值为2.02%,表明方法精密度良好。

3.2稳定性试验

精密吸取供试样品溶液1.0mL,参照标准曲线绘制的方法每隔30 min测定吸光度值,测定6次,得平均吸光度值为0.37294,RSD值为2.77%,表明供试液在150 min内显色稳定。

3.3重复性试验

精密吸取多糖供试液1.0 mL 6 份,按测定标准曲线的方法测定吸光度值,多糖含量分别为69.78%、71.39%、71.68%、75.80%、73.13%、71.78%。多糖含量平均值为72.26%,RSD值为0.30%,表明重复性良好。

3.4加样回收率试验

称取60℃干燥恒重的精制多糖样品0.1g,共6份,精密称定,分别置于1000 mL容量瓶中,分为三组,每组两份。按照每组样品多糖含量的80%、100%、120%分别加入葡萄糖对照品,加蒸馏水定容。按“2.1”项下方法测定,实验结果见表2,表明测定结果准确。

表2 加样回收率试验结果

4 讨论

中药多糖是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,是中药主要活性成分之一,具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、降血糖、抗辐射、延缓衰老和抗感染等药理作用([8,9])。所以,金线吊乌龟的一些药理活性可能与其中多糖有关,其多糖有待进一步开发利用。

本实验初步建立金线吊乌龟多糖的提取和含量测定方法, 采用水提醇沉方法提取、纯化多糖,硫酸一苯酚比色法测定多糖含量。实验用质量分数为80%的乙醇醇沉以除去苷类及生物碱等成分,用乙醚、丙酮除去脂溶性杂质以及一些干扰性色素。采用水提醇沉法提取多糖,操作简便、条件温和,但由于操作中多次转移难免导致成分损失,使测定结果偏低。由于多糖类化学成分在硫酸的作用下,水解成单糖分子,迅速脱水生成糖醛类化合物,然后与苯酚合成有色化合物,可用比色法测定其含量。通过方法学考察,试验结果表明,用苯酚一硫酸比色法测定金线吊乌龟多糖含量,该测定方法准确度高,150 min内显色稳定,精密度和重复性良好,可为进一步研究金线吊乌龟多糖提供参考。

[1]玉艳珍,邓业成,张明,等.中药植物金线吊乌龟对植物病原真菌的抗菌活性[J].植物保护,2010,02:123

[2]余兰,陈华,娄方明.洛龙党参的多糖含量测定[J].贵州农业科学,2010,07:190.

[3]张志强,王旭彤.芦荟多糖的提取与含量测定[J].中国现代药物应用,2009,14:39.

[4]魏学军,林先燕,夏亚兰,等.民族药金耳环多糖的提取和含量测定[J].井冈山大学学报(自然科学版),2012,06:86-88.

[5]南换杰,秦雪梅,武滨,等.潞党参多糖的超声提取和含量测定[J].山西医科大学学报,2008,07:641.

[6]杨军,章英才,苏伟东,等.灵武长枣多糖含量测定的研究[J].北方园艺,2011,14:35.

[7]张晓莉,李玉婷,王亚贤,等.红花多糖的提取与含量测定[J].中国实验方剂学杂志,2010,07:19.

[8]贺百花,吴玉红.中药多糖的药理研究进展[J].河北北方学院学报(医学版),2010,06:77.

[9]陈海锋,涂传荣.中药多糖的药理研究与构效关系[J].中华临床医学研究杂志,2005,11(=1):73 .

(责任编辑:李芸霞)

Determination of polysaccharide content from Jinxiandiaowugui

SHANG Ning-ning1, YU Ya-jie1, PENG Teng1, GAO Peng2
(1.School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan;2.Chengdu YuQuanLvJian Technology Ltd, Co, Chengdu 610072, Sichuan)

[Abstract]Objective: To detect the content of polysaccharide from Jinxiandiaowugui.Method: The polysaccharide from Jinxiandiaowugui was extracted and purified by water-extraction and alcohol-precipitation method.The standard curve was established using glucose standard solution.Sulfuric acid-phenol colorimetric method was applied to detect polysaccharide content from Jinxiandiaowugui at the wave length of 490nm.Result: The yield rate of refined polysaccharide from Jinxiandiaowugui was 2.31%.The content of refined polysaccharide was 71.78%.The content of total polysaccharide from original medicinal materials of Jinxiandiaowugui was 1.66%.Conclusion: The sulfuric acid-phenol colorimetric method used in detection of polysaccharide content from Jinxiandiaowugui is simple and rapid.The result is accurate with high stability, precision and repeatability.

[Key words]Jinxiandiaowugui; polysaccharide; content determination

[收稿日期]2015-04-13

[通讯作者]彭腾(1973-),男,教授,硕士生导师,主要从事:中药药效物质基础及质量标准方向研究Tel:13880376673 Email:Pengteng1973@sina.com

[作者简介]尚宁宁(1987-),女,硕士研究生,主要从事:药物化学方向研究Tel:18381076108 Email:1101451408@qq.com

[中图分类号]R 284.1

[文献标识码]A

[文章编号]1674-926X(2016)01-005-02

猜你喜欢

含量测定多糖
菠萝蜜多糖可调节肠道微生物
米胚多糖的组成及抗氧化性研究
熟三七多糖提取工艺的优化
知母多糖治疗糖尿病大鼠
减压内部沸腾提取川佛手多糖工艺的优化
高效液相色谱法用于丙酸睾酮注射液的含量测定
HPLC法测定彝药火把花根中雷公藤甲素的含量
HPLC法测定不同产地爬山虎茎中白藜芦醇的含量
山苓祛斑凝胶剂提取物质量标准研究
空气中氧气含量测定实验的改进与拓展