联合检测RF、AKA、抗CCP抗体和CRP对RA的诊断价值

王　波,牛莉莉,常　波

(1.大连市中心医院 检验科，辽宁 大连116001；2.大连医科大学 检验医学院医学检验2010级；

3.大连市儿童医院)



联合检测RF、AKA、抗CCP抗体和CRP对RA的诊断价值

王波1*,牛莉莉2,常波3

(1.大连市中心医院 检验科，辽宁 大连116001；2.大连医科大学 检验医学院医学检验2010级；

3.大连市儿童医院)

摘要：目的探讨联合检测类风湿因子(RF)、抗角蛋白抗体(AKA) 、抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体和C反应蛋白(CRP)在类风湿性关节炎(RA)诊断中的价值。方法收集68例RA病人和42例非RA的自身免疫病病人血清，化学发光微粒子免疫法测抗CCP抗体，间接免疫荧光法检测AKA，免疫比浊法测RF和CRP，然后对检测结果进行计算分析。结果RA组RF、AKA、抗CCP抗体和CRP的阳性率均明显高于非RA组，且差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。单项检测RA诊断的敏感性由高到低排序是CRP、抗CCP抗体、RF、AKA，特异性由高到低排序为AKA、抗CCP抗体、RF、CRP，四者串联联合检测提高了RA诊断的敏感性(91.2%)，并联联合检测提高了特异性,甚至达到100%。结论RF、AKA、抗CCP抗体、CRP单独检测RA都具有一定的灵敏度和特异性，但单独应用一项指标容易造成漏诊或误诊。联合检测四项指标可极大提高特异性和敏感度，有利于提高RA患者的早期诊断。

关键词：类风湿性关节炎; 抗环瓜氨酸肽抗体; 抗角蛋白抗体; C反应蛋白

(ChinJLabDiagn,2016,20:0425)

类风湿性关节炎(RA)是以关节及周围组织受累为主要表现的全身性疾病，是临床上常见的自身免疫性疾病之一。如诊疗不及时，病情会在短时间内逐渐加重，出现软骨和骨的破坏与侵蚀，关节畸形，从而失去劳动能力，具有很高的致残率[1]。早期进行诊断和干预治疗可有效减少RA致残率。目前临床上主要通过临床表现、X线影像学检查、类风湿因子(RF)等血清学抗体检查等来确诊RA，其中自身抗体等血清学检测指标在早期诊断中占据重要地位，其敏感性和特异性对RA确诊意义重大[2]。在RA诊断中，传统血清学指标，如RF、C反应蛋白(CRP)具有敏感性高而特异性不高的特点，不利于临床早期的诊断。随着科研水平的提高和技术的发展，一些抗体如抗环瓜氨酸多肽抗体(抗CCP抗体)、抗角蛋白抗体(AKA)等对RA的高特异性获得了许多研究人员的认可[3]。本研究通过对RF、抗CCP抗体、AKA、CRP的测定来探讨其各自以及四者串联、并联联合检测对RA的诊断价值。

1材料与方法

1.1标本来源

研究标本均来源于大连中心医院2015年1月至2015年3月住院的患者。实验组均为RA患者，共68例(其中20例RF阴性)。所有患者诊断标准均符合美国风湿病协会(ACR) 和欧洲抗风湿病联盟(EULAR)2010年的RA分类标准[4]。其中女49例，男19例，年龄31-81岁。其他自身免疫组42例，包括骨关节炎13例，系统性红斑狼疮(SLE)8例，强直性脊柱炎6例，干燥综合征4例，痛风2例，系统性硬化症1例，其他免疫性疾病8例，以上病例均符合相应的诊断标准，其中女24例，男18例，年龄23-79岁。

1.2主要试剂

抗环瓜氨酸多肽抗体试剂盒(美国雅培公司),抗角蛋白抗体检测试剂盒(北京和杰创新生物技术有限公司)，类风湿因子检测试剂盒(美国贝克曼库尔特有限公司)，C反应蛋白检测试剂盒(美国贝克曼库尔特有限公司)。

1.3主要仪器及耗材

荧光显微镜(德国蔡司公司EUROStarⅡ),ARCHITECT i 2000SR全自动化学发光仪(美国雅培公司),IMMAGE 800特定蛋白仪(美国贝克曼库尔特有限公司)，离心机(北京时代北利离心机有限公司)，移液枪(芬兰Dragonmed移液枪，量程20 μl-200 μl)。

1.4检测方法

1.4.1标本采集所有患者均于清晨抽取空腹静脉血5 ml，待血液凝固后3 000转/分钟离心6 min，分离血清后确保所有标本均无溶血，-20℃保存待检。所有操作均严格按照试剂说明书进行。

1.4.2抗CCP抗体测定利用化学发光微粒子免疫法的原理，检测结果大于5 U/ml为阳性。

1.4.3AKA检测采用间接免疫荧光法检测，检测结果在荧光显微镜下观察，见到角质层出现明显的多条板层状(连续)或者点片状(不连续)的荧光即为阳性结果。

1.4.4RF和CRP的检测利用双光径免疫比浊法的原理，试剂均采用与仪器配套的国际标准试剂。检测结果RF>30I U/ml为阳性，CRP>0.5 mg/dl为阳性。

1.5数据处理

收集的数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析。计数资料采用χ2检验，P<0.05或P<0.01为差异有统计学意义。

2结果

2.1RF、AKA、抗CCP抗体、CRP在RA组和非RA组阳性率的比较

RA组RF、AKA、抗CCP抗体、CRP的阳性率分别为70.6%、66.1%、79.4%、80.9%。非RA组RF、AKA、抗CCP抗体、CRP的阳性率分别为21.4%、7.1%、9.5%、61.9%。RA组RF、AKA、抗CCP抗体、CRP阳性率明显高于非RA组，两者之间存在显著差异(P<0.01或P<0.05)，其中在RA组以CRP阳性率最高，AKA阳性率最低。

此外，在20例RF阴性的RA患者中，AKA、抗CCP抗体、CRP的阳性率分别为45%、75%、80%，可以看出这三项指标对RF阴性的RA患者检测的也有较高的阳性检出率。

表1　两组RF、AKA、抗CCP抗体、CRP在各组中阳性

2.2RF、AKA、抗CCP抗体、CRP敏感性、特异性的比较分析

经过计算，在四项检测指标中，敏感性由高到低排序是CRP、抗CCP抗体、RF、AKA，分别为80.9%、79.4%、70.6%、66.1%，特异性由高到低排序为AKA、抗CCP抗体、RF、CRP，分别为92.9%、90.4%、78.6%、38.1%。

表2　RF、AKA、抗CCP抗体、CRP敏感性和特异性(%)

2.3RF、AKA、抗CCP抗体、CRP四者串联、并联检测的敏感性、特异性的比较分析

相较于RF、AKA、抗CCP抗体、CRP单项指标检测RA，四项指标串联检测RA，使特异性大大提高，甚至达到100%。而四项指标并联联合检测则使敏感性提高，达到了91.2%。

表3　四项指标串、并联联合检测的敏感性和

注：*串联联合检测，#并联联合检测

3讨论

类风湿关节炎是临床上常见的自身免疫性疾病，在其发病早期即可以出现关节破坏,如果没有得到及时有效的诊断，错过了最佳的治疗时间，大多数患者在两三年之内就会出现关节的不可逆转性破坏，进而发展为关节畸形和功能障碍,严重影响患者的身心健康。我国目前主要根据临床特征、X线影像学检查以及RF等自身抗体来确诊RA。而自身抗体在RA的发生、发展过程中也发挥着重要的作用，由于其检查具有便捷，快速，容易操作等优点，因此在临床诊断RA中得到广泛应用。随着人们对RA的不断探索和临床诊断方法的进步，而且 RA的发病率不断增长，所以在RA的发病早期及时采取治疗措施干预，以便及时控制病情的进展是减轻RA关节损害的关键措施[5,6]。

由于在系统性红斑狼疮、强者性脊柱炎等其它自身免疫疾病患者甚至正常人血清中均可检测到RF[7]，因此单一检测RF容易造成临床上的误诊或漏诊，故一般需要结合其它指标与RF联合检测以确诊RA。Bas[8]等研究发现，RF与RA患者的临床表现和骨侵蚀性的损害程度相关，因此在了解疾病的发展状况方面具有重要价值。寻找RA的高特异性抗体成为科研的热门方向。近年来,临床通过检测血清抗CCP抗体来辅助RA的诊断,诸多研究证实了其具有较高的特异性[9]，而且在RA发病早期即可检出。在2010年美国风湿病学会(American College of Rheumatology,ACR)与欧洲抗风湿病联盟(European League Against Rheumatism，EULAR)共同推出的RA诊断标准中，抗CCP抗体被定为RA诊断的血清学标志性抗体，可见这一指标在RA的早期诊断中有重要价值。本项研究中，抗CCP抗体的特异性经计算为90.4%，RF为78.6%，可见抗CCP抗体的特异性略高于RF。有报道指出，此抗体有助于早期RA及RF阴性患者的确诊，并可用于区分RA及其他RF阴性RA的诊断，并可用于区分RA及RF阳性骨关节炎症[10]。

AKA是在RA患者血清中发现一种能与鼠食管中上段角质层反应的IgG抗体。AKA具有很高的特异性，在疾病早期即可检出，且抗体与疾病严重程度和活动性有一定的相关性[11]。AKA与RA病情严重性和功能障碍有关，其检测RA的敏感性40%-70%[12]。在本项研究中AKA的敏感度为66.1%，与研究报道相符。其特异性为92.9%，在四项检测指标中特异性最高。但是由于AKA敏感性低，故一般只能作为临床上诊断RA的辅助指标。

CRP是第一个被认识的急性时相反应蛋白，也是目前临床上使用最广的炎症标志物之一，是判断机体炎症的极其灵敏的指标。彭宇生等[13]研究证明CRP在类风湿关节炎病情进展过程中起着重要作用，能够作为类风湿关节炎诊断和预后治疗的一个参考指标，且其升高与类风湿关节炎的活动呈正相关。在本项研究中，RA患者血清中的CRP在四项研究指标中敏感性最高(80.9%)，说明对于部分RF阴性的RA患者，是可以通过检测CRP来避免漏诊。但因其特异性太低(38.1%)，容易引起临床误诊，故在临床上常常只作为辅助诊断指标，用以和其它检测指标联合提高诊断的准确度。

本项研究中，RF、AKA、抗CCP抗体、CRP在RA组的阳性率均高于非RA组，且差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)，说明四项指标均可以作为RA的辅助诊断指标。但四项指标虽然都有其各自的优势，可是由于每项检测指标单独应用于RA诊断的时候都会存在一定的局限性，故不能同时满足高敏感性和高特异性。而联合检测RF、AKA、抗CCP抗体、CRP可弥补单项指标诊断RA的不足，极大提高RA诊断的敏感性或特异性。如在本研究中，CRP和AKA、RF及抗CCP抗体串联联合检测特异性达到了100%，并联联合检测的敏感性达到了91.2%。因此联合检测这四项指标能有效减少漏诊率和误诊率，具有较高的临床应用价值，有利于提高早期的诊断率，使患者能够得到及时有效的治疗，对于及时控制患者病情和改善预后有重要的意义。

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The role of combined application of RF,AKA,anti-CCP antibody and CRP in diagnosing rheumatoid arthritis

WANGBo,NIULi-li,CHANGBo.

(DepartmentofClinicalLaboratory,DalianMunicipalCenteralHospital,DalianLiaoning116001,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the clinical value of combination detection of rheumatoid factor(RF),anti-cyclic citrullinated peptide antibody (CCP),anti-keratin antibody(AKA) and c-reactive protein (CRP)in the diagnosing rheumatoid arthritis(RA).MethodsThe serum samples of 68 RA patients and 42 other autoimmune diseases patients were collected.Anti-CCP antibody was detected by chemiluminescent microparticle immunoassay(CMIA).AKA was measured by indirect immunofluorescence.Both RF and CRP were detected by Immune turbidimetry (ITM).Then analyze the results.ResultsIn RA group,positive rate of RF,Anti-CCP antibody,AKA,CRP was obviously higher than those of other autoimmune diseases patients(P<0.01 or P<0.05),the difference between both groups was statistically significant.Single diagnostic sensitivity of RA from high to low ranking is CRP Anti-CCP antibody RF AKA.The diagnostic specificity of RA from high to low ranking is AKA Anti-CCP antibody RF CRP.Four series of joint detection improves the sensitivity(91.2%) of RA diagnosis,parallel combined detection can improve the specificity and even reached 100%.ConclusionThe RF,AKA,Anti-CCP antibody and CRP detection alone RA has good sensitivity and specificity,but a separate application index easily missed diagnosis or misdiagnosis.Combined detection of four indexes may offer clinical benefits for diagnosis of RA and can significantly improve the specificity and sensitivity to diagnose RA.

Key words:Rheumatoid arthritis;Anti-cyclic citrullinated peptide;anti-keratin antibody;c-reactive protein

(收稿日期：2015-07-07)

作者简介：王波(1969- )，男，硕士，主任技师，研究方向：临床免疫学。

文献标识码：A

中图分类号：R593.22

文章编号：1007-4287(2016)03-0425-04

*通讯作者