前列腺癌组织中OPN和Survivin表达与PSA 的相关性分析

王超奇,王　岩，余大海*

(1.内蒙古民族大学附属医院 泌尿外科，内蒙古 通辽028000；2.吉林大学中日联谊医院 科学研究中心，吉林 长春130033)



前列腺癌组织中OPN和Survivin表达与PSA 的相关性分析

王超奇1,王岩2，余大海1*

(1.内蒙古民族大学附属医院 泌尿外科，内蒙古 通辽028000；2.吉林大学中日联谊医院 科学研究中心，吉林 长春130033)

摘要：目的通过分析桥蛋白(OPN)和Survivin在前列腺癌 (PCa)组织中的阳性表达与前列腺特异性抗原(PSA) 的相关性分析，探究前列腺癌的预后判断方法。方法检测70例前列腺癌和48例前列腺增生组织应用免疫组织化学方法相关蛋白OPN、Survivin蛋白的表达和相应患者血浆中PSA值。结果前列腺癌组织中OPN和Survivin蛋白的阳性表达率分别51.4%(36/70)、65.7%(46/70)，OPN和Survivin在前列腺增生组织中的阳性表达率分别10.4%(5/48)、0(0/48)， 在前列腺增生和前列腺癌组织组织中OPN和Survivin蛋白阳性表达率差异具有统计学意义(P<0.05)，Survivin与OPN在前列腺癌组织中的阳性表达呈负相关(P<0.01)。OPN和Survivin蛋白表达和PSA数值与前列腺癌病理分级、临床分期、转移情况有关，具有统计学意义(P<0.05)。结论在临床上检测OPN、Survivin表达和前列腺特异抗原(PSA)，对前列腺癌疾病的预后有作用。

关键词：前列腺癌；OPN；Survivin；前列腺特异性抗原

(ChinJLabDiagn,2016,20:0392)

前列腺癌(Prostate cancer，PCa)在男性泌尿器官肿瘤疾病中是非常常见的。美国曾经对超过50周岁且死亡的患者的尸体进行解剖和统计，结果表明，将近10%-45%的男性都患有这种疾病，而且随着年龄的增大，患有该疾病的概率就会有所增高。其中，超过80周岁的男性中，患有这种疾病的人占比超过了50%。从全球范围来看，每年因该疾病而死亡的人数达到了26万人。根据致死率对癌症疾病排名，前列腺癌仅次于肺癌[1]。本文通过检测前列腺的疾病中OPN、Survivin表达,另外，通过微粒子酶免分析法来分析病人血浆中前列腺特异抗原(PSA)值，对前列腺癌疾病的预后意义进行探讨。

1材料与方法

1．1标本来源选择70例患者为对象进行研究，所有患者均在在内蒙古民族大学附属医院确诊为前列腺癌疾病，且在2008年5月起五年之间在该院接受手术切除治疗，在此之前从来没有接受过前列腺治疗。患者年龄为55-85周岁，平均为70周岁。采用2003年WHO公布的标准对前列腺疾病进行分级，高分化腺癌以及中低分化腺癌患者分别为23例和47例。应用Jewett-Whitmore-Prout分期标准进行临床分期，A期27例，B期16例,C期27例。选择良性前列腺增生患者48例作为对照组，患者年龄为60-85周岁，平均为73周岁。

1.2试剂来源

1.2.1 OPN抗体为美国圣克鲁斯生物技术公司产品；survivin抗体购于北京中杉生物技术有限公司；S-P 试剂盒为美国Zymead公司产品。

1.2.2 PSA检测采用微粒子酶免分析法检测,仪器为美国雅培公司Axsym全自动免疫分析仪,试剂由原公司配套提供。正常参考值PSA ≤ 4.0 ng/ml。

1.3检测方法

采用免疫组织化学SP法。石蜡切片脱腊以微波枸橼酸盐进行抗原修复，DAB显色，苏木精复染，脱水,透明封片,显微镜下观察。计算表达阳性率及表达强度。

1.4结果判断

对于癌组织而言，其所包含的Survivin蛋白的阳性表达信息是从细胞质中获取的，而P27蛋白的阳性信息则是从细胞核中获取的。完成染色处理后，评价具体的强度，统计成功染色的细胞所占的百分比，根据参考文献[2]：保持原色、淡黄色、黄色、棕黄色的得分依次为0、1、2、3。成功染色细胞所占百分比不足10%、位于11%-25%之间、位于26%-50%之间、超过50%的得分依次为0、1、2、3。将两项得分相乘，得到的分数即为最终的分数。最终分数不超过1分的判定是阴性(-)，达到2分或3分的判定是弱阳性(+)，位于4分～6分之间的判定是阳性(++)，超过6分的判定是强阳性(+++)[3]，若判定结果中存在一个或更多“+”号，就证明具有临床价值。

1.5统计学方法

统计软件采用SPSS 16.0 的进行统计分析,使用χ2检验及Spearman相关分析。

2结果

2.1蛋白OPN、Survivin在前列腺癌组织中的阳性表达率分别51.4%(36/70)、65.7%(46/70)，蛋白OPN、Survivin在前列腺增生组织中的阳性表达率分别10.4% (5/48)、0(0/48)；在前列腺癌组织中Survivin蛋白阳性表达显著高于前列腺增生组织(P<0.05)；在前列腺增生组织中OPN阳性表达低于在前列腺癌组织中的阳性表达(P<0.01)，见图1。

图1　前列腺癌和前列腺增生组织中OPN和

2.2按PSA ≤10 ng/ml、>10-20 ng/ml、>20-50 ng/ml和PSA>50 ng/ml对前列腺癌分段分析，在前列腺癌组织中OPN和Survivin蛋白表达与肿瘤病理分级、肿瘤临床分期、肿瘤转移情况和PSA值具有统计学意义(P<0.05),见表 1。

2.370例前列腺癌中,Survivin与OPN染色结果行Spearman相关分析，r=-0.269P<0.01,负相关性，见表2。

表1　前列腺癌中OPN、和Survivin蛋白的表达

表2　前列腺癌中OPN、和Survivin蛋白相关分析

3讨论

本世纪末，Senger等[4]发现OPN,它是的一种泌型细胞外基质蛋白，OPN是单一编码基因，分子量约大小为8kb，它定位在染色体4q13,由7个外显子和6个内含子构成。它的本质是一种具有多种生物学活性的酸化糖蛋白，属于小整合素结合配体N端联结糖蛋白家族，结构约由300个氨基酸组成，相对分子质量44×103，富含天冬氨酸和丝氨酸残基。一级结构中含有特异性的RGD序列，是一种粘附序列，研究发现RGD序列与多种肿瘤的恶性转化密切相关。本研究中OPN在前列腺增生组织的阳性表达率低于前列腺癌组织中的阳性表达的率，并且与前列腺癌临床分期、病理分级、临床转移情况和PSA值都有一定的相关性，具有一定统计学意义。

Survivin蛋白属于凋亡抑制蛋白中的一种，是已知的在抑制方面具有最突出能力的蛋白[5]。它的表达部位非常少，就目前的现状来看仅有胚胎以及肿瘤组织。健康人体的分化组织里面没有找到Survivin的存在。这种蛋白能够有效地阻碍肿瘤组织里面健康细胞的凋亡，肿瘤细胞中该蛋白的表达水平越高，其在抑制癌细胞凋亡方面的表现就越突出，肿瘤的转移能力就越高，肿瘤周围部位就越容易受到影响，大大提高肿瘤转移的可能性，缩短病人剩余生命。也就是说患者体内癌组织中Survivin蛋白如果呈现出阳性的特点，就会影响预后的效果。Survivin蛋白阻碍病变细胞的死亡，这是前列腺癌能够转移的主要机理之一[6]。在诊断癌症疾病时，可以将survivin当做是一种参考指标，而且这一指标还可以用于综合评价癌症疾病的严重程度。癌组织分化水平越低、病情发展程度越严重，癌组织里survivin的表达就越高，充分说明survivin蛋白在前列腺癌疾病发展过程中发挥了重要的作用。大量针对人体的研究结果表明，很多不同类型的肿瘤组织里面Survivin的表达都是不正常的[7]。这种蛋白的功能体现在两个方面[8]，阻碍癌细胞的死亡，对细胞分化进行调节。在试验中还对前列腺特异性抗原进行了研究，这种蛋白来自于前列腺上皮组织，其活性表现为中性丝氨酸蛋白酶，具有非常突出的组织特异性，但这不意味着它有一定的恶性组织的特异性。对于前列腺增生疾病患者来说，血清里面PSA数值比健康人体更高，但在PCa组织里面，若癌细胞生长达到一定程度的话，会造成前列腺的组织结构难以保持正常，最终造成病人血清中前列腺特异性抗原含量大幅提高。如果前列腺癌细胞转移到骨组织上，PSA数值会进一步增长，血清里面PSA含量同样继续上涨。PSA目前作为临床上诊断PCa的一种常见的方法,用其预测患者临床预后效果，或是衡量骨转移情况能够收获良好的效果[9]， Survivin蛋白会对OPN蛋白产生作用[10]。在人体中两种蛋白的功能存在差异，在抑制肿瘤细胞死亡方面二者的作用方向是一致的，并且能够促进对方作用的提升。本实验结果表明蛋白Survivin和OPN的表达关系呈负相关， Survivin和OPN在前列腺癌组织中阳性表达与PSA值具有统计学意义。

总的来说，PCa组织里面OPN以及Survivin两种蛋白的表达出现异常后，使得细胞死亡率有所下降，在临床上对OPN和Survivin表达进行检测，探究二者和前列腺特异抗原的意义，对前列腺癌疾病的预后判断具有重要的启示作用。

参考文献：

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[2]Macrì A,Versaci A,Lupo G,et al.Role of osteopontin in breast cancer patients[J].Tumor,2010,95(1): 48.

[3]李欣,汪娜,张彦.端粒酶逆转录酶与血管内皮细胞生长因子在前列腺癌中的表达及其相关性的研究[J].中华男科学杂志,2009,11 (10) : 724.

[4]Senger DR,Wirth DF,Hynes RO.Transformed mammalian cells secrete specific proteins and phosphoproteins[J]．Cell，1979，16(4)：885．

[5]Ambrosini G,Adida C,Aleteri DC,et al.A novel anti-apoptosis gene,survivin, expressed in cancer and lymphoma[J].Nat Med,1997,3:917.

[6]Jain A,McKnight DA,Fisher LW,et al.Small integrin-bindingproteins as serum markers for prostate cancer detection [J].ClinCancer Res,2009,15(16):5199.

[7]Patil UD,Ragavan A,Nadaraj,et al.Helical CT angiographyinevaluation of live kidney donors [J].Nephrol DialTransplant,2010,16(9):1900.

[8]Lewis GR,Mulcahy K，Brook NR,et al.A p rospective study of the predictive power of spiral computed tomographic angiography for defining renal vascular anatomy before live-donor nephrectomy[J].BJU Int,2011,94 (7)：1077.

[9]Stokkel MP,Zwinderman AH,Zwartendijk J,et al.The value of pretreatment clinical and biochemical parameters in staging and prognostic stratification of patients with newly di- agnosed prostate carcinoma[J].Int J Biol Markers,1998,13 (2):70.

[10]Suzuki A，HoT,Kawano H,et al.Survivin Initiates Procaspase3/p21 Complex Format ion as a Result of Interaction with CDK4 to Resist Fas Mediated Cel1 Death[J].Oncogene,2000,19(10):1346.

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The analysis of the correlation PSA and between expression of OPN and Survivin in prostate cancer tissue

WANGChao-qi,WANGYan,YUDa-hai.

(InnerMongoliaNationalitiesUniversityAffiliatedHospitalTongliao028000,China)

Abstract:ObjectiveBy means of detecting the analysis of the correlation PSA and between expression of OPN and Survivin in prostate cancer tissue we want to investigate the methods of therapy to PCa.MethodsImmunohistochemistry was employed to measure the expression of OPN and Survivin cases of prostatic cancer and 48 cases benign prostatic hyperplasia and PSA in plasma.ResultsIn prostatic cancer tissue,the positive expression rates of OPN and Survivin were 51.4%(36 /70)、and 65.7%(46 /70).In benign prostatic hyperplasia tissue,the positive expression rates of OPN and Survivin were 10.4% (5 /48)、0(0 /48),The positive expression of OPN and survivin between prostatic cancer and benign prostatic hyperplasia were significantly different (P<0.05).The positive expression of OPN and survivin were related with the histologic grade,clinical stage and metastasis of prostatic cancer and PSA (P<0.05).The expression of survivin was a reverse correlation with OPN expression in prostatic cancer(P<0.01).ConclusionThe detection expression of OPN and Survivin and PSA in PCa may help to offer a new mode for the prevention and treatment of prostatic cancer.

Key words:prostatic cancer；OPN；survivin；PSA

(收稿日期：2015-04-11)

作者简介：王超奇(1978-),男,主治医师,博士 ,研究方向：泌尿系肿瘤基础与临床;余大海(1967-),男,副主任医师,研究方向：泌尿系疾病临床治疗.

文献标识码：A

中图分类号：R737.25

文章编号：1007-4287(2016)03-0392-04

*通讯作者

基金项目:内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJZY13173);2015年内蒙古自治区自然科学基金面上项目(2015MS0877);内蒙古民族大学自然科技基金培育项目(NMDGY1438)