HPLC法测定复方川麦滴丸中阿魏酸的含量

2016-04-14王英萍马守江管丽丽

实用医药杂志 2016年1期

关键词：高效液相色谱法质量控制

张　炜，王英萍，马守江，管丽丽

张炜，王英萍，马守江＊，管丽丽

［关键词］复方川麦滴丸；阿魏酸；高效液相色谱法；质量控制

［作者单位］264002山东烟台，解放军107医院（张炜，王英萍，马守江，管丽丽）

复方川麦滴丸是笔者所在医院临床应用多年的经验方，此方根据中医学“急则治其标”的治则组方，由川芎、当归、红花、麦冬四味药材组成，具有活血化瘀、通络止痛的功效。用于治疗心血瘀阻证的冠心病及心绞痛、冠脉硬化、胸闷、胸痛。本处方在经验方的基础上，根据中医活血化瘀理论及冠心病的发生、发展机理，中医中药对该病的治疗原则，应用正交设计法，以扩张冠状动脉，增加血流量及增强心肌收缩力为指标，筛选而成。

复方川麦滴丸中君药川芎来源于伞形科植物川芎（Ligusticumnanxiong Hort）的干燥根茎，性味辛温，归心包、肝、胆经。辛温香窜，性善走散，上行下达，既活血，又行气，有“血中气药”之称。臣药当归为伞形科植物当归（Angelica Sinensis（OLiv）Diels）的干燥根，性味甘、辛、温，归心、肝、脾经［1］。有补血调经，活血止痛之功。与川芎为伍，使之功效倍增。麦冬为佐药，使川芎活血祛瘀，温经行气，通络止痛而无耗津伤液之弊，缓解了川芎过温过燥之性。阿魏酸是川芎、当归中的有效成分，具有多种生物活性，如抗氧化、抗血栓、降血脂、抗自由基、抗突变和防癌等作用［2－4］。本实验采用HPLC法测定该制剂中阿魏酸的含量，以此对该药品的质量进行控制［5-10］，现报告如下。

1　仪器与试剂

1.1仪器岛津LC－10AT液相色谱仪，梅特勒－托利多电子天平。

1.2试剂阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110773－201012，纯度：99.6%）；复方川麦滴丸（解放军第107医院制剂室，批号：110506、110507、110508）；甲醇为色谱纯（天津博迪化工股份有限公司）；水为纯化水；醋酸为分析纯（烟台双双化工有限公司）。

2　方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Inertsil ODS－3 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：5%醋酸－甲醇（75∶25）；流速1.2 ml/min；检测波长320 nm；柱温35℃，进样量：20 μl。在此色谱条件下，样品中的阿魏酸能达到基线分离，阴性对照液中色谱峰对测定无干扰。

2.2溶液的制备

2.2.1供试品溶液取本品5丸，精密称定，置小烧杯中，加0.05 mol/L盐酸溶液10 ml，摇匀，定量移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯50 ml（15、15、10、10 ml）分4次提取，合并乙酸乙酯液，用0.05 mol/L盐酸溶液20 ml洗涤1次。水浴蒸干乙酸乙酯液，加甲醇溶解于25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，备用。结果见图1 B。

2.2.2对照品溶液精密称取阿魏酸对照品约6 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成标准液。精密量取标准液5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得阿魏酸对照品溶液（0.012 mg/ml），备用。结果见图1A。

2.2.3阴性供试品溶液取不含当归、川芎药材的样品5丸，按供试品溶液的配制方法制备阴性供试品溶液，备用。结果见图1C。

2.3线性关系考察精密吸取2.2.2项下的阿魏酸对照品溶液适量，制成浓度为0.015、0.018、0.021、0.024、0.027、0.030、0.033、0.036 mg/ml的系列样品，分别进样20 μl，测定峰面积，以峰面积为X轴，浓度为Y轴作标准曲线，得回归方程Y＝2.14×10－8X＋0.00052，相关系数r＝0.9987，线性范围15～36 μg/ml。

2.4精密度实验精密吸取“2.2.2”项下的对照品溶液20 μl，重复进样5次，测得峰面积分别为：562935、561138、562375、557878、557962，平均峰面积：560457.6，RSD＝0.43%，表明仪器精密度良好。

2.5重复性实验精密吸取“2.2.1”项下的供试品溶液20 μl，连续进样5次，测定阿魏酸峰面积，平均峰面积为949727，RSD为1.05%，由此看出，提取及测定方法有较好的重复性。

2.6稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h进样，测定峰面积，结果阿魏酸峰面积的RSD为0.44%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.7加样回收率实验精密量取三个已知浓度的供试品溶液各三份，再分别加入已知含量的阿魏酸对照品，对照品的加入量控制在供试品含量的80%、100%、120%，摇匀，备用。吸取加样供试液20 μl，进样测定，结果见表1。

2.8样品中阿魏酸含量测定按“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下的色谱条件测定3批样品（批号：110506、110507、110508），测得阿魏酸含量分别为0.1082 mg/丸、0.1024 mg/丸、0.0920 mg/丸。

图1　高效液相色谱图

表1　加样回收率实验结果

3　讨论

3.1流动相的选择本试验选取了乙腈－水、甲醇－乙腈－水、乙腈－0.5%冰醋酸（28∶72）、乙腈－0.1%磷酸（17∶83）、5%醋酸－甲醇（75∶25）等多种流动相进行比较，并考察了不同流动相、不同比例对各峰之间的分离度、峰形及出峰时间的影响，最终确定5%醋酸－甲醇（75∶25）作为流动相，各峰之间分离效果好，柱效高。

3.2检测波长的选择经紫外扫描，阿魏酸对照品的最大吸收波长为310 nm，在本实验色谱条件下，复方样品中的阿魏酸在320 nm波长条件下与其他峰分离良好，且峰形较好，故笔者选择320 nm作为复方川麦滴丸中阿魏酸的检测波长。

3.3样品处理过程阿魏酸为3－甲氧基－4羟基肉桂酸，能溶于醇、热水和乙酸乙酯，故选择乙酸乙酯为提取溶媒。阿魏酸在酸性环境下，在水中的溶解度降低，所以在实验中加入0.05 mol/L盐酸溶液酸化成游离型，以利于乙酸乙酯的提取。经实验用50 ml乙酸乙酯（15、15、10、10 ml）分4次提取即可使阿魏酸提取完全。为除去水中的杂质，最后用0.05 mol/L盐酸溶液20 ml洗涤1次，从图谱可以看出杂质峰很小。

参考文献

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.北京中国医药科技出版社，2010：125.

［2］赵东平，杨文钰，陈兴福.阿魏酸的研究进展［J］.时珍国医国药，2008，19（8）：1839－1841.

［3］胡益勇，徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展［J］.中成药，2006，28（26）：253－255.

［4］马逢时，李家明，李传润，等.阿魏酸衍生物及其生物活性［J］.药学进展，2008，32（8）：345－351.

［5］庄苏，郭利民，钟世华.高效液相色谱法测定活血止痛胶囊中阿魏酸的含量［J］.中国现代药物应用，2012，6（5）：7－8.

［6］陈阿丽，杨永霞，梁生旺.高效液相色谱法测定妇康宁片中阿魏酸的含量［J］.中国当代医药，2013，20（28）：71－73.

［7］朱德杰.高效液相色谱法测定女金丸中阿魏酸的含量［J］.中医学报，2013，28（8）：1182－1183.

［8］唐力英，王祝举，赫炎，等.高效液相色谱法测定当归中阿魏酸的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2012，12（2）：14－15.

［9］李树国.反相高效液相色谱法测定精制冠心颗粒中阿魏酸的含量［J］.贵阳中医学院学报，2012，34（1）：159－161.

［10］郝影霞，王逢春，王焱.高效液相色谱法测定活血清脑丸中阿魏酸的含量［J］.解放军医药杂志，2012，24（7）：29－31.

［2015-07-14收稿，2015-08-11修回］