Axl在宫颈癌组织中的表达及临床意义①

张　燕，付　红，单海鸥，孙滢滢，苏明家

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯154003；2.佳木斯妇婴医院，黑龙江 佳木斯154003)



Axl在宫颈癌组织中的表达及临床意义①

张燕1，付红2，单海鸥2，孙滢滢2，苏明家2

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯154003；2.佳木斯妇婴医院，黑龙江 佳木斯154003)

摘要：目的: 研究在宫颈癌组织中受体酪氨酸激酶Axl的表达情况,并探讨Axl与宫颈癌进展及淋巴结转移的相关性。方法:采用免疫组织化学的方法分别检测 11例正常宫颈的患者，15例CINⅡ-Ⅲ的患者，36例无淋巴结转移宫颈癌的患者,17例淋巴结转移宫颈癌的患者组织中Axl的表达情况并比较各组间的差异性。结果: Axl在宫颈癌组织中的表达水平明显高于CINⅡ-Ⅲ组，差异有统计学意义(P<0.05) ，宫颈癌组中有淋巴结转移者组织中Axl的表达水平明显高于无淋巴结转移者，差异有统计学意义 (P<0.05) ，Axl在CINⅡ~Ⅲ组织中的表达水平与正常宫颈组相比，差异无统计学意义(P>0.05);Axl在宫颈癌浸润深度>1/2组织中的表达水平相对浸润深度≤1/2组织中增高，差异有显著意义(P<0.05)。结论: Axl在宫颈癌组织中表达增高与宫颈癌的恶性程度及其肿瘤的转移密切相关。

关键词:宫颈癌; Axl

宫颈癌在全球女性恶性肿瘤中居第二位[1]，已经成为发展中国家恶性肿瘤相关死因的主要原因之一。近些年，随着社会环境的变化，性生活过早及性关系紊乱，宫颈癌的患病率和死亡率不断上升，且逐渐年轻化。宫颈癌浸润与转移是造成宫颈癌患者死亡的主要原因，研究表明，早期发现癌前病变和宫颈癌，早期治疗能够极大地降低了宫颈癌的患病率及死亡率,因此关于宫颈癌的淋巴结早期转移已经成为近几年的研究热点。Axl属于受体酪氨酸激酶家族中的一员，参与细胞增殖，黏附，抑制细胞凋亡等作用，随着对Axl的研究越来越多，研究发现，Axl参与肿瘤血管的生成，与肿瘤的侵袭性有着密切的关系，Axl是肿瘤浸润与转移的关键性调控因子。目前，国内外发现Axl在乳腺癌，胃癌，卵巢癌，子宫内膜癌等中均有高表达，但未见Axl在宫颈癌中的有关研究报道。本实验通过免疫组化方法研究宫颈癌患者组织中Axl的表达情况，并分析其临床意义，为宫颈癌的早期发现，诊断，治疗，评估预后提供新的临床思维。

1资料及方法

1.1病例资料

收集正常宫颈组织 11 例，宫颈上皮内瘤样病变组织(CINⅡ~Ⅲ)15例、宫颈癌组织共53例，其中无淋巴结转移者36 例、有淋巴结转移者17 例，宫颈癌肿瘤直径>4cm 35例，≤4cm 18例，无脉管转移者37例，有脉管转移者16例。取其术后组织，组织的病理诊断以术后石蜡切片结果为准。患者年龄30~69岁，平均47岁，所有患者术前均未输血或行放化疗等治疗，所有宫颈癌均为鳞癌。

1.2主要试剂

兔抗人Axl多克隆抗体购于Abcam 公司, 辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体购于上海生工有限公司, SABC免疫组织化学试剂盒和DAB显色试剂盒均购于武汉博士德生物制剂。

1.3免疫组化染色及结果判定

石蜡切片脱蜡、水化，PBS冲洗，过氧化物酶阻断溶液室温孵育，PBS冲洗，高压抗原修复，冷却至室温，PBS冲洗。滴加Axl抗体，4℃冰箱过夜，PBS冲洗，再滴加二抗，孵育，PBS冲洗，DAB显色，复染，脱水，封片，显微镜下进行观察。

1.4结果判定

Axl在细胞质内表达，为棕黄色或是棕褐色颗粒。(1)按阳性细胞所占百分比及着色的强度来结果判定: (2) 按着色强度评分:无着色计为0分，浅黄色计1分，黄色计2分，棕黄色计3分; (3) 按阳性细胞所占的百分率评分:无阳性细胞为 0分，≤25﹪为1分，26﹪~50﹪为2分，51﹪~75﹪为3分，>76﹪为4分，将两项积分相加，0~1分为阴性(-)，2~3分为弱阳性(+)，4~5分为中强阳性()，6~7分为强阳性()。

1.5统计学方法

采用 SPSS17.0 统计软件，计数资料比较采用χ2检验。统计结果P<0．05为差异有统计学意义。

2结果

Axl主要表达于细胞质中，为棕黄色或是棕褐色颗粒，Axl在不同组织中的表达情况如表1所示。宫颈癌中的Axl表达水平显著高于正常宫颈及CINⅡ-Ⅲ中的Axl表达水平(P<0．05)。宫颈癌有淋巴转移组中的Axl的表达高于淋巴转移组(P<0．05)。CINⅡ~Ⅲ组于正常宫颈组相比差异。

表1　 各组组织中Axl的表达水平比较

表2　 宫颈癌组织中Axl与浸润深度的关系

无统计学意义(P>0．05)。如表2所示，Axl的表达量在宫颈癌浸润深度>1/2组织中较浸润深度≤1/2组织中高，差异有显著意义(P<0.05)。

3讨论

在正常人体中，Axl在多种组织中表达，Axl在心脏和骨骼肌中表达最高，骨髓基质细胞中也有较高的表达，Axl在正常淋巴系中表达很低，在外周的血细胞中基本上不表达。Axl是Tyro3受体酪氨酸激酶家族中的一员，它的配体为Gas6，与配体结合后激活本身的酪氨酸激酶活性,并且能激活下游的信号传导途径, 参与细胞粘附与识别、抗凋亡、增殖及细胞转化。近些年来，随着对Axl的研究越来越深入，发现Axl在多种恶性肿瘤中都有较高的表达，并通过参与新生血管的形成、促进肿瘤细胞的转移、抑制肿瘤细胞的凋亡等机制与恶性肿瘤的发生、发展中起着重要的作用。Axl在国外的研究相对较多，发现Axl在很多种恶性肿瘤组织中的表达增高，Sun等[3]研究发现Axl在子宫内膜癌组织中表达增高，且高于正常子宫内膜, LoweAW 等[4]的研究发现在胰岛细胞瘤中的Axl基因表达明显增高。Sainaghi PP等[5]对人前列腺癌细胞系研究，证实在原发性前列腺癌中, Axl呈高表达。Holland SJ等[6]应用人MDA - MB - 231异种移植模型, 用RNA 干扰技术来介导肿瘤细胞中Axl基因沉默, 结果抑制了肿瘤的生长。Xu WD等[ 7]同样利用RNA干扰技术介导Axl基因的沉默,其研究也证实了Axl表达与恶性肿瘤的生长有着直接的关系。Vajkoczy P等[ 8]在脑胶质瘤中, 研究发现绝大多数的人神经胶质瘤细胞系中, Axl呈过度表达，而且, 恶性程度越高Axl的表达就越高。Shieh Y - S 等[9]通过对肺腺癌细胞系中Axl的研究中, 发现Ax l表达的高低与肿瘤侵袭能力大小密切相关，Axl在高侵袭能力组中的表达明显高于低侵袭能力组。另外, 在甲状腺癌、胃癌、直肠癌、卵巢癌等许多人类恶性肿瘤, Axl基因都有较高的表达。因此, Ax l与肿瘤发生，发展有着密切的关联。可能作为肿瘤侵袭转移的早期的标志物之一。本实验研究显示，宫颈癌组织中Axl的表达明显高于正常组与CINⅡ~Ⅲ组。宫颈癌组中有淋巴转移者中Axl的表达高于无淋巴转移者，且浸润深度较深组Axl的表达水平也相对的增高，提示Axl与宫颈癌的发生发展有着密切的关系，对早期的宫颈癌可能有一定的临床检测价值，发现早期宫颈癌，及早的治疗，从而极大的降低了宫颈癌的死亡率，而且可能对评估预后有一定的参考价值。

参考文献:

[1]宋继荣,董颖,潘月娜. 宫颈癌组织中Survivin 和Cox- 2的表达及相关性[J]. 黑龙江医药科学，2012,35(5):36-38

[2]刘方针.常规统计资料分析方法的选择[J]. 黑龙江医药科学，2010,33(2):98

[3]Sun WS, Fujimoto J, Tamaya T. Coexpression of growth arrest-specific gene 6 and receptor tyrosine kinase Axl and Sky in humanuterine endometrial cancers[J] . Ann Once, 2003, 14: 898-906

[4]Lowe AW, Olsen M,Hao Y, et al. Gene expression pat terns inpancreatic tumors, cells and tissues[J] . PLoS ONE, 2007, 2(3):323

[5]Sainaghi PP, Castello L, Berganasco L, et al. Gas6 induces prol- iferation in prostate carcinoma cell lines expressing the Axl receptor[J]. J Cell Physiol,2005, 204( 1) : 36-44

[6]Holland SJ, Powell MJ, Friera AM, et al.Multiple roles for the receptor tyrosine kinase Axl in tumor formation [J] . Cancer Res,2005,65: 9294-9303

[7]Xu WD, Powell MJ, Friera AM, et al. Requirement for the tyrosine kinase Axl in angiogenesis and tumor growth [J] . Proc Amer AssocCancer Res, 2005, 46: 8

[8]Vajkoczy P, Knyazev P, Kunkel A, et al. Dominant- negative inhibit ion of the Axl receptor tyrosine kinase suppresses brain tumor cell growth and invasion and prolongs survival[J]. PNAS, 2006,103:5799-5804

[9]Shieh Y - S, Lai C - Y, Kao Y - R, et al. Express ion of Axl inlung adeno carcinoma and correlation with tumor progress ion [J].Neoplasia, 2005, 7: 1058-1064.

The expression and clinical significance of Axl in cervical cancer

ZHANGYan1，FUHong2，SHANHai-ou2，SUNYing-ying2，SUMing-jia2

(1.The First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China; 2.Jiamusi Penetration in the Hospital, Jiamusi 154003, China)

Abstract:Objective: To explore the expression of Axl in cervical cancer tissue and its relationship with cervical cancer progression and lymph node metastasis. Methods: Immune histochemical method was used to detect the expressions of Axl in 11 cases with normal cervical, 15 cases with CIN Ⅱ - Ⅲ, 36 cases without lymph node metastasis of cervical cancer, 17 patients with lymph node metastasis of cervical cancer. The differences of the expression of Axl were compared among different groups. Results: The positive expression of Axl was higher in cervical cancer tissue than that in CINII-III (P<0.05). The expression of Axl in cervical cancer group with lymph node metastasis was significantly higher than that in cervical cancer group without lymph node metastasis(P<0.05). Between CINII-III group and normal cervical tissues group, there was no significant difference in the expression of Axl. The expression of the Axl in cervical cancer group with depth of myometrium invasion ≤1/2 was significantly lower than that in cervical cancer group with depth of myometrium invasion >1/2.(P < 0.05). Conclusion: The high expression of Axl in cervical cancer tissue is closely related to cervical malignant degree and tumor metastasis.

Key words:cervical cancer; Axl

(收稿日期：2015-03-28)

中图分类号：R737.33

文献标识码：B

文章编号：1008-0104(2016)01-0092-02

作者简介:张燕(1973～) 女，黑龙江佳木斯人，硕士，副主任医师，硕士研究生导师。通讯作者:付红(1981～) 女，黑龙江佳木斯人，在读硕士研究生，主治医师。E-mail:1243377151@qq.com。