清肠栓对葡聚糖硫酸钠诱导溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体表达的影响

高春利

(兰州市第一人民医院消化科，甘肃　兰州　730050)



清肠栓对葡聚糖硫酸钠诱导溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体表达的影响

高春利

(兰州市第一人民医院消化科，甘肃兰州730050)

〔摘要〕目的探讨清肠栓对葡聚糖硫酸钠诱导溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体(TLRs)表达的影响。方法选取大鼠60只，根据随机数字表法分为对照组、模型组、清肠栓组，每组20只，然后对大鼠进行模型建造，造模时对照组给予蒸馏水，其余组均给予5%的葡聚糖硫酸钠。模型建立后清肠栓组给予清肠栓灌肠，比较大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠指数以及TLR1、TLR2、TLR3以及TLR4表达。结果模型组DAI评分显著高于对照组，清肠栓组显著低于模型组(P<0.05)；清肠栓组结肠指数显著低于模型组(P<0.05)，与对照组比较无统计学意义(P>0.05)；模型组TLR2和TLR4表达显著高于对照组，清肠栓组TLR2和TLR4表达显著低于模型组(P<0.05)，各组TLR1和TLR3比较无统计学意义(P>0.05)。结论清肠栓对葡聚糖硫酸钠诱导溃疡性结肠炎疗效显著，能显著降低大鼠TLR2和TLR4表达水平。

〔关键词〕清肠栓；溃疡性结肠炎；Toll样受体

溃疡性结肠炎黏的发病机制尚不清楚，可能与环境、免疫以及肠道菌群等多种因素有关〔1〕。Toll样受体(TLRs)与免疫功能存在较大关系，是一种跨膜和模式识别受体，能够识别跨膜相关病原体。清肠栓是临床上治疗溃疡性结肠炎的重要药物，可以局部应用来起到抗感染作用。但是清肠栓对TLRs表达具有何种影响受到较大关注〔2〕。本研究旨在分析清肠栓对葡聚糖硫酸钠诱导溃疡性结肠炎大鼠TLRs表达的影响。

1资料与方法

1.1一般资料选取大鼠60只，均由上海斯莱克实验动物有限公司提供，均由SPF级动物房进行饲养。根据随机数字表法分为对照组、模型组、清肠栓组，其中对照组20只，鼠龄均为7 w，均为雄性，体质量为189~210 g，平均(200.4±1.5)g，模型组20只，鼠龄均为7 w，均雄性，体质量为190~210 g，平均为(200.3±1.6)g，清肠栓组20只，鼠龄均为7 w，均为雄性，体质量为190~210 g，平均(200.2±1.4)g，三组周龄、性别以及体质量均无显著差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法所有大鼠均进行适应性喂养1 w，然后对照组给予蒸馏水，模型组和清肠栓组给予5%葡聚糖硫酸钠溶液进行溃疡性结肠炎造模。造模7 d后，清肠栓组每月给予清肠栓(由上海中医药大学附属龙华医药提供)140 mg/kg，模型组给予等量的生理盐水灌肠，对照组不给予处理。禁食12 h后进行灌肠，应用头皮针从肛门轻轻插入约8 cm，将灌肠液推入，然后提起尾巴倒立约15 min后放到笼中进行常规喂养。

1.3检测方法疾病活动指数(DAI)从造模开始记录皮毛、体质量、精神、饮食、大便及隐血情况来评价疾病活动情况，评分越高表示疾病活动程度越强〔3〕；灌肠14 d后称重，然后应用戊巴比妥钠进行腹腔麻醉，将腹部剥开使肠腔暴露，将结肠截取出来，然后应用生理盐水冲洗2次，滤纸吸干，称结肠的湿重。结肠指数〔4〕表示结肠湿重与体质量的比值。应用Western 印迹法检测结肠组织的中TLR1、TLR2、TLR3及TLR4表达。

1.4统计学方法应用SPSS17.0软件进行t检验、χ2检验。

2结果

2.1各组DAI评分比较模型组DAI评分〔(3.92±0.52)分〕显著高于对照组〔(0.98±0.04)分〕，清肠栓组DAI评分〔(2.53±0.05)分〕显著低于模型组，清肠栓组DAI评分显著高于对照组(P<0.05)。

2.2各组结肠指数比较清肠栓组结肠指数(0.51±0.03)显著低于模型组(0.65±0.71)(P<0.05)，与对照组(0.45±0.01)比较无统计学意义(P>0.05)。

2.3各组TLRs比较模型组TLR2和TLR4表达显著高于对照组，清肠栓组显著低于模型组(P<0.05)，各组TLR1和TLR3比较无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　各组TLR1、TLR2、TLR3和TLR4

与模型组比较：1)P<0.05

3讨论

免疫异常是引起溃疡性结肠炎的重要原因〔5〕。许多研究显示，TLRs/核转录因子(NF)-κB是导致溃疡性结肠炎的重要信号通路，可以使TLRs表达被启动，进而引起炎症反应。TLRs类型较多，且不同类型的TLR具有不同的功能作用〔6〕。研究显示，TLR4可以用来识别内毒素，TLR2可以识别肽聚糖，TLR3则可以识别双链的RNA。其中TLR1可以于单核细胞、T淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞及B淋巴细胞等多种细胞中表达，TLR2和TLR4只表达于髓源性细胞中，TLR3只能特异性地于树突细胞上表达〔7〕。有研究证实，TLR4可以识别革兰阴性杆菌的细胞壁成分，并且被激活，于多种信号的作用下引起NF-κB被激活，进而使细胞内的信号传递得以完成，使相应的效应细胞分泌细胞因子，进而导致肠道免疫功能被破坏〔8〕。

清肠栓是一种中药复方，主要药物组成有：青黛、马齿苋、参三七等，其中青黛具备清热解毒、凉血消痈的作用，参三七具有去腐生肌和止血化瘀的作用，马齿苋则具有凉血、清热解毒的作用〔9〕。现代研究显示，青黛可以降低血管的通透性，对机体免疫能力具有调节作用，还具备较强杀菌和抗病毒作用。参三七主要成分有黄酮类和皂苷类，可以调节免疫功能、抗肿瘤、调节平滑肌运动以及抗病毒等作用。三药配合能发货清热解毒利湿、活血祛瘀、促进创伤愈合的作用，进而起到止痛、止血以及止泻的作用〔10，11〕。

4参考文献

1严妍,王易.中药对感染、自身免疫性疾病中Toll样受体表达影响的实验研究进展〔J〕.现代免疫学,2014；34(1):73-6.

2周婷婷,仝巧云.柳氮磺胺吡啶对溃疡性结肠炎大鼠结肠Toll样受体4表达的影响〔J〕.广东医学,2014；52(22):3474-6.

3张露,唐国都.Toll样受体9与消化系统疾病的相关研究进展〔J〕.医学综述，2014；20(22):4036-8.

4Wang Z,Dong B,Feng Z,etal.A study on immunomodulatory mechanism of polysaccharopeptide mediated by TLR4 signaling pathway〔J〕.BMC Immunol,2015；16(1):34.

5魏妮,郭长存,沙素梅,等.利用表达谱基因芯片筛选溃疡性结肠炎差异表达基因〔J〕.现代生物医学进展,2015；15(1):53-7.

6Ohira H,Abe K,Takahashi A,etal.Autoimmune hepatitis:recent advances in the pathogenesis and new diagnostic guidelines in Japan〔J〕.Intern Med,2015；54(11):1323-8.

7翟金海,陈兰,邢益阳,等.中医药治疗溃疡性结肠炎的机制研究现状〔J〕.中国中西医结合消化杂志,2013；21(10):555-7.

8Lee JJ,Wang PW,Yang IH,etal.High-fat diet induces toll-like receptor 4-dependent macrophage/microglial cell activation and retinal impairment〔J〕.Invest Ophthalmol Vis Sci,2015；56(5):3041-50.

9张燕翔,鲁兵,张恒文,等.四君子汤抗大鼠溃疡性结肠炎及对结肠组织GABA受体表达的影响〔J〕.世界华人消化杂志,2014；22(34):5258-65.

10王立娟,刘旭,唐志鹏,等.清肠栓对DSS诱导结肠炎小鼠脾CD4~+T细胞CD44、CD62L表达的影响〔J〕.上海中医药杂志,2014；48(5):104-8.

11曹丽静,郝微微,温红珠,等.清肠栓对溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体表达的影响〔J〕.中国中西医结合消化杂志,2015；23(4):225-30.

〔2015-10-27修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

〔中图分类号〕R57

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)05-1066-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.019

第一作者：高春利(1974-)，女，副主任医师，主要从事消化内科及消化内镜方面的研究。