长春西汀纳米脂质载体制备及制剂学性质研究①

张颖慧，平　洋，江　欣，缪月英，杨春荣

(佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007)



长春西汀纳米脂质载体制备及制剂学性质研究①

张颖慧，平洋，江欣，缪月英，杨春荣

(佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007)

摘要：目的:制备长春西汀纳米脂质载体并考察其制剂学性质。方法:采用熔融-超声法进行制备长春西汀纳米脂质载体，采用透射电镜和动态光散射法观察纳米粒的外观和粒径，DSC分析长春西汀在载体中的物理状态。结果:制备的长春西汀纳米脂质载体形态为球形或类球形，粒径(89.33±3.05)nm、Zeta电位(-30.1±0.48)mV、包封率(94.16±3.35)%，DSC实验显示长春西汀纳米脂质载体冻干样品中长春西汀的特征吸收峰已消失。结论:熔融-超声法制备的长春西汀纳米脂质载体粒径均一，包封率高。

关键词：长春西汀；纳米脂质载体；熔融-超声法；制剂学性质

长春西汀(Vinpocetine, VIN)是从夹竹桃科小蔓长春花(Vinca minor L.)发现的吲哚类生物碱，作为脑循环代谢改善剂[1]，主要用于治疗循环障碍性脑血管疾病如脑梗塞、脑出血后遗症及脑动脉硬化症等，治疗效果显著。但由于长春西汀存在肝脏首过效应，口服生物利用度极低，使其临床应用受到了限制。纳米脂质载体(Nanostructure lipid carrier, NLC)是从固体脂质纳米粒(Solid lipid nanoparticles, SLN)基础上发展而来的[2~4]，在固体脂质中加入了一定比例的液体脂质作为混合脂质，与SLN的单一固体脂质相比，NLC保留了SLN生理相容性好、毒性低、可控释药物等的优点，同时，也解决了SLN单一固态脂质形成有序的结晶结构，致使药物贮存过程中造成载药量低的缺陷。而NLC就是通过加液体脂质的加入，打破了原有的晶格结构，从而提高了载药量，增加了药物物理稳定性[5~7]。鉴于长春西汀口服生物利用度低的缺点，将其制备成制备长春西汀纳米脂质载体(VIN-NLC)注射剂，考察其形态、粒径分布、Zeta电位、包封率及DSC分析，力求为VIN-NLC的体外释放[8]与体内研究提供实验基础。

1仪器及材料

UV-2550型紫外分光光度计(日本岛津株式会社)，FA2004N电子天平(上海桓平科学仪器有限公司)，JY92-2D 型超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器研究所)，SALD-2201型激光粒度分布测定仪(日本岛津株式会社)，Delsa 440SX Zeta Potential Analyzer(美国贝克曼公司)，DSC-5差热分析仪(德国耐驰公司) ，JEM-1200EX型透射电镜(日本电子公司)。

长春西汀( 东北制药总厂)，单硬脂酸甘油酯(GMS，天津市博迪化工有限公司 )，豆磷脂(上海太伟药业)，聚氧乙烯660-12羟基硬脂酸酯(Solutol HS15®，德国BASF)，辛酸/癸酸甘油酯(Miglyol®812，德国SASOL)，其它试剂均为分析纯。

2方法

2.1VIN-NLC制备

取混合脂质水浴加热至熔融，加入长春西汀混匀作为油相。取适量乳化剂加入注射用水中，超声分散作为水相。将同温度水相慢慢滴加入油相中分散成初乳，恒温搅拌后进行超声，室温水冷却固化，过滤。

2.2VIN-NLC 制剂学性质考察

2.2.1形态观察

在喷碳铜网表面滴满VIN-NLC混悬液，以2.0%磷钨酸负染3min后，于透射电镜下观察形态。

2.2.2粒径测定

取VIN-NLC稀释到适当的浓度加入到样品池中，用SALD-2201型激光粒度仪测定VIN-NLC的粒度分布。

2.2.3Zeta电位测定

取VIN-NLC稀释到适当的浓度加入比色池中，用Delsa 440SX型Zeta电位仪测定VIN-NLC的Zeta电位。

2.2.4包封率与载药量的测定

取0.5mL VIN-NLC置于超滤离心管(Microncon YM-10)上端，5000rpm离心10min，滤液用甲醇超声定容；另取0.5mL VIN-NLC用甲醇定容超声破乳，静置，取上清液在274nm处进行紫外扫描，按下式计算包封率和载药量：

式中Cfree为游离药物浓度，Ctotal为混悬液中药物总浓度；Wdrug为NLC中包封的药物量，Wlipid为处方中混合脂质的质量。

2.2.5DSC分析

分别取VIN、GMS、物理混合物(VIN和混合脂质)、空白NLC和VIN-NLC的冻干样品适量，空铝坩锅作参比，升温速率10 ℃/min，进行DSC分析。

3结果与结论

3.1VIN-NLC的制备

取混合脂质(GMS+20% Miglyol®812)适量，75℃水浴加热至熔融，将VIN加入混匀作为油相。取豆磷脂和Solutol HS15®适量加入20mL注射用水中作为水相。磁力搅拌下把同温的水相滴加入油相中分散成初乳，滴加完毕后，搅拌5min。初乳600w下超声8min，室温水冷却固化，过0.45μm微孔滤膜，即得VIN-NLC。

3.2VIN-NLC制剂学性质考察结果

3.2.1形态观察

透射电子显微镜观察VIN-NLC粒子呈球形或类球形，大小均匀，表面圆整，见图1。

图1　VIN-NLC透射电镜扫描照片(×1500)

3.2.2粒径测定

用激光粒度仪测定VIN-NLC的粒度分布，VIN-NLC呈单峰分布，粒径为(89.33±3.05) nm，见图2。

图2　VIN-NLC粒径分布

3.2.3Zeta电位测定

用Zeta电位测定仪测定了VIN-NLC的Zeta电位为(-30.1±0.48)mV，见图3，结果表明粒子间不会发生聚集现象，初步判断VIN-NLC稳定性良好。

图3　VIN-NLC的Zeta电位

3.2.4包封率与载药量的测定

由“2.2.4”项下实验方法操作测得三批VIN-NLC的包封率和载药量分别为(94.16±3.35)%和(3.30±0.12)%。

3.2.5DSC分析

分别对VIN、GMS、物理混合物、空白NLC和VIN-NLC进行DSC分析，由图4可知， VIN特征吸收峰是155.3℃(curve a)，GMS特征吸收峰是60.6℃(curve b)，物理混合物中VIN吸热峰减弱移至151.5℃(curve c)，图中d是空白NLC，图中e VIN-NLC冻干样品中VIN的吸热峰已消失，说明VIN被NLC成功包载。

图4(a)VIN; (b)GMS; (c)物理混合物; (d)空白NLC; (e)VIN-NLC的DSC曲线

4讨论

本实验考察了离心超滤法、低温超速离心法测定VIN-NLC包封率。结果显示，使用低温超速离心法分散液混浊不分层，不能将游离药物与纳米粒分离，故不采用低温超速离心法。而离心超滤法测定VIN-NLC包封率的重现性良好，且超滤膜对VIN无吸附，最终确定离心超滤法测定VIN-NLC包封率。差示扫描量热法(DSC)具有测试样品用量少、方法灵敏、快速，广泛应用于药物物理状态的分析。DSC实验表明，VIN-NLC体系中液体脂质Miglyol812在纳米粒骨架中破坏了规则的晶格结构，VIN进入混合脂质的缺陷晶格中以不规则结晶态或无定形存在，提高了NLC的载药稳定性。

参考文献:

[1]WU Li-ping, LI Tong-ling, JIA Yi-mi, et al. Determ ination of Primary Metabolite of Vinpocetine in Human Plasma by LC-M S/M S[J]. Chin Pharm J, 2010, 45(6):458-460

[2]Gonzalez ME, Nikolic S, Calpena AC, et al. Improved and safe transcorneal delivery of flurbiprofen by NLC and NLC-based hydrogels[J]. J PHARM SCI-US, 2012, 101(2):707-725

[3]王宏媛, 刘强, 杨春荣. 尼莫地平纳米结构脂质载体的制备及大鼠体内药动学[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013,16:178-182

[4]Rehab Nabil Shamma, Mona Hassan aburahma. Follicular delivery of spironolactone via nanostructured lipid carriers for management of alopecia[J]. Int J Nanomed, 2014,9:5451-5460

[5]Li Bei, Ge Zhi-Qiang. Nanostructured lipid carriers improve skin permeation and chemical stability of idebenone[J]. AAPS Pharm Sci Tech, 2012, 1(13):276

[6]李佳琳, 孟萍, 颜承云. 阿昔洛韦/赖氨酸壳聚糖纳米粒的理化性质考察[J]. 黑龙江医药科学, 2012, 35(3): 21-22

[7]陈佳, 龚涛. 黄芪甲苷纳米结构脂质载体冻干粉的制备及其初步质量评价[J]. 华西药学杂志, 2011, 26(6): 530-533

[8]赵昱, 杨春荣, 王宏媛. 长春西汀纳米结构脂质载体的体外释放研究[J]. 黑龙江医药科学, 2012, 35(3): 25-26

(收稿日期：2015-10-28)

中图分类号：R285.5

文献标识码：A

文章编号：1008-0104(2016)01-0138-02

作者简介：张颖慧(1988~)女，黑龙江克山人，在读硕士研究生通讯作者：杨春荣(1972~)女，黑龙江安达人，博士，教授，硕士研究生导师。 E-mail：yangchunrong98@163.com。