鄂西北地区三枝九叶草药用价值考察

王　娟　　李洪亮袁2　　汪选斌袁2　　欧阳露袁2.湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室，湖北十堰　442000；2.湖北医药学院药学院，湖北十堰　442000



鄂西北地区三枝九叶草药用价值考察

王娟1李洪亮1袁2汪选斌1袁2欧阳露1袁2
1.湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室，湖北十堰442000；2.湖北医药学院药学院，湖北十堰442000

[摘要]目的考察鄂西北地区淫羊藿属植物三枝九叶草药用价值。方法以淫羊藿苷和总黄酮含量作为考察指标，采用高效液相色谱法和紫外-可见分光光度法进行检测。采用ODSPhenomenex GeminiC18柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-水（30∶70）为流动相，检测波长：270 nm，流速：1.0mL/min，柱温：30℃。结果按干燥品计算淫羊藿苷含量和总黄酮含量分别为0.51%和5.05%，均达到《中国药典》标准。结论鄂西北地区淫羊藿属植物三枝九叶草具有较高药用价值。

[关键词]三枝九叶草曰鄂西北地区曰淫羊藿苷曰总黄酮

三枝九叶草（Epimedium sagittatum）属小檗科淫羊藿属多年生草本植物。《中国植物志》记载其有补精强壮，祛风湿，治阳痿、关节风湿痛等症的功效。淫羊藿（Herbaepimedii）是一种传统的补益中药。性味辛、甘、温，归肝、肾经，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功能。现代药理学研究结果证实，淫羊藿具有多种重要的药理作用：淫羊藿的有效成分具有拟雌激素样作用，能增加骨密度；淫羊藿对心脑血管方面有降血压、降血脂的作用；可以影响肿瘤细胞周期调控原癌基因和抑癌基因并诱导凋亡；可以直接增加免疫细胞的数量，提高免疫细胞淋巴因子的分泌，增强免疫力；淫羊藿还可以改善记忆力，影响神经系统等[1-11]。

淫羊藿的化学成分包括黄酮类、木脂素类、酚苷类、生物碱类、色酮类、菲、蒽醌、鞣质、倍半萜、甾醇等上百种成分。其中淫羊藿总黄酮有抗骨质疏松、促进免疫调节、改善心脏血液流变性、抗心肌缺氧、促进雄性生殖系统和生殖内分泌功能、抗炎、抗肿瘤、抗衰老等作用，其是淫羊藿中的主要有效成分。而淫羊藿苷则为黄酮类的代表性成分，具有降低动脉粥样硬化患者血栓形成概率及调血脂、促进雌性激素体内生物合成、保护受损神经元及恢复记忆力等药理活性[12-15]。因此本课题以淫羊藿苷和淫羊藿总黄酮的含量作为指标考察鄂西北地区三枝九叶草的药用价值，为该地区淫羊藿药用植物资源的开发和保护提供参考。

1　仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪（LC-20AD泵、SIL-20A自动进样器、SPD-M20A紫外检测器、LC-Solution色谱工作站）（日本岛津公司）；KQ-500PV型数控超声波清洗器（苏州博德超声设备有限公司）；TU-1901型双光束紫外可见光光度仪（北京普析通用仪器有限责任公司）；FA2004型电子天平（上海精科公司）。

1.2试药

淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所；批号：110737-200415）。

三枝九叶草样品于2015年4月采集于十堰市郊的牛头山，经湖北医药学院药学院中药药理教研室张晓燕副教授鉴定为小檗科淫羊藿属植物Epimedium sagittatum。样品晾干打粉，过4号筛备用。

甲醇（分析纯），乙腈（色谱纯），水为超纯水。

2　方法与结果

2.1淫羊藿苷的含量测定

2.1.1色谱条件

色谱柱：ODSPhenomenex GeminiC18柱（250mm× 4.6mm，5μm）。流动相：乙腈-水（30∶70）；流速：1.0mL/min；检测波长：270 nm；进样量：10μL，柱温：30℃。色谱图见图1。

图1　各溶液的H P L C色谱图

2.1.2溶液的配制

2.1.2.1淫羊藿苷对照品溶液的配制取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含0.1mg的淫羊藿苷溶液，摇匀即得。

2.1.2.2三枝九叶草供试品溶液的配制取三枝九叶草样品粉末约0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，精密称定，超声1 h，放冷至室温，以50%乙醇补足失重，摇匀滤过，续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

2.1.3线性关系考察

分别精密吸取“2.1.2.1”项下制备的淫羊藿苷对照品溶液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL置于10 mL容量瓶中，甲醇定容摇匀，制得浓度为10.0、20.0、50.0、80.0、100.0μg/mL的对照品系列溶液，0.45μm微孔滤膜滤过，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，以质量浓度对峰面积进行线性回归，得线性范围和回归方程，淫羊藿苷进样量在0.1～1.0μg之间线性关系良好。回归方程Y=4.776957×10-8X-1.254898×10-4（r= 0.9989）。

2.1.4精密度试验

取“2.1.2.1”项下制备的淫羊藿苷对照品溶液，按照“2.1.1”项下色谱条件下进样10μL，重复6次，以淫羊藿苷峰面积计算RSD为0.22%，表明仪器精密度良好。

2.1.5重复性试验

取样品6份，按照“2.1.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，按照“2.1.1”项下色谱条件进样10μL，测定淫羊藿苷的峰面积，RSD为1.58%，说明该法重复性好。

2.1.6稳定性试验

取同一样品溶液，分别在0、1、2、4、8、12 h进样10μL，按照“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算淫羊藿苷的含量，RSD为0.34%，说明样品供试品溶液12 h内稳定性良好。

2.1.7加样回收率试验

取已知淫羊藿苷含量的样品粉末6份，精密称定，置100mL容量瓶中，精密加入淫羊藿苷对照品溶液适量，按照“2.1.2.2”项下方法制备样品溶液，按照“2.1.1”项下色谱条件测定含量，求得淫羊藿苷的回收率，结果见表1。

表1　加样回收率试验结果（n=6）

2.1.8样品含量测定

精密称取样品3份，按照“2.1.2.2”项下方法制备样品溶液，按照“2.1.1”项下色谱条件测定含量，结果见表2。

取样量（g）淫羊藿苷量（mg）百分含量（%）平均百分含量（%）RSD （%）0.2516 0.2269 0.2401 1.18 1.16 1.25 0.47 0.51 0.52 0.51　0.03

2.2总黄酮含量测定

分别精密量取“2.1.2.2”项下供试品溶液0.5 mL 3份，分别置于50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密量取“2.1.2.1”项下淫羊藿苷对照品溶液1mL置10mL容量瓶中，加甲醇制成每毫升含10μg的淫羊藿苷溶液作为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在270 nm波长处测定吸光度，结果见表3。

表3　总黄酮含量测定结果（n=3）

3　讨论

淫羊藿始载于《神农本草经》，已有2000多年的历史，为使用最早的滋补类中药之一，并且使用十分广泛，是《中国药典》收载来源最多的植物中药材之一。淫羊藿由于其多种药理活性一直受到国内外学者的高度重视，是多年来重点研究的药用植物和最具开发潜力的中药之一。淫羊藿的生长习性为海拔650～3500米处林下、沟边灌丛中或山坡阴湿处。鄂西北地处鄂、豫、陕、渝四省（市）交界，汉江中游的秦巴山区腹地，东有武当山，南有以“华中屋脊”之称的神农架原始大森林，具有得天独厚的地理优势：地处亚热带季风区，气侯湿润温和，雨量充沛，四季分明，日照充足，无霜期长，这种特殊的地理位置及气侯条件特别适宜于三枝九叶草的生长，因此三枝九叶草资源十分丰富。

2015年版《中国药典》规定，药用淫羊藿中淫羊藿苷含量不低于0.5%；总黄酮含量不低于5.0%[16]。本实验结果显示，鄂西北地区淫羊藿属植物三枝九叶草的淫羊藿苷与总黄体酮含量分别为0.51%和5.05%，均达到《中国药典》规定，说明鄂西北地区的三枝九叶草的有效成分含量达到药用标准，具有较高的药用价值。

目前，我国淫羊藿药材几乎全部来源于野生资源，各产区品种质量参差不齐，严重影响疗效。随着市场需求的不断增长，长期依赖于野生资源使其储量日益减少，因此，对于淫羊藿药用植物资源的开发和保护迫在眉睫。鄂西北地区淫羊藿属植物三枝九叶草资源十分丰富，本实验的考察结果为实现淫羊藿的人工驯化栽培和规范化种植基地建设奠定了基础，对增强本地经济发展、促进中草药资源的可持续利用具有重要意义。

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M edicinal valuable assessment of Epimedium sagittatum in northwest Hubei Province

WANG Juan1LIHongliang1,2WANG Xuanbin1,2OUYANG Lu1,2
1.Laboratory of Chinese Herbal Pharmacology,the Affiliated Renmin Hospital Hubei Univeristy of Medicine,Hubei Province,Shiyan 442000,China;2.School of Pharmacy,Hubei Univeristy of Medicine,Hubei Province,Shiyan 442000,China

[Abstract]Objective To assess the medicinal value of wild Epimedium sagittatum in northwest Hubei Province. M ethods High performance liquid chromatography and UV-Vis pectrophotometer were conducted with contents of icariin and total flavonoids as determining indexes.HPLC was conducted at a column temperature of 30℃with a column of ODS Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm)and acetonitrile-water(30∶70,V/V)as the mobile phase,with a wave length at 270 nm and a flow speed at 1.0mL/min.Results Content of icariin and total flavonoids in dried Epimedium sagittatum was 0.51%and 5.05%respcetively,which reached the criteria of the Chinese Pharmacopeia.Conclusion Wild Epimedium sagittatum in northwest Hubei Province has highmedical value.

[Key words]Epimedium sagittatum;Northwest Hubei Province;Icariin;Total flavonoids

收稿日期：（2015-09-23本文编辑：赵鲁枫）

[通讯作者]欧阳露（1972.10-），女，硕士，副教授，副主任药师；研究方向：中药新制剂研发。

[基金项目]湖北省教育厅项目（B2015487）；湖北省2011协同创新中心基金（4）；湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目（T201510）；湖北省自然科学基金面上项目（2014CFB642）；湖北医药学院优秀中青年团队项目（2014C XG03）。

[中图分类号]R927.2

[文献标识码]A

[文章编号]1673-7210（2016）01（a）-0046-03