半叶紫菜游离丝状体培育技术

唐兴本，陈百尧，连绍兴，薛学坤，龚琪本，安健，伏光辉，孙苗苗

（1.连云港市海洋与水产科学研究所，江苏连云港222046；2.中科院海洋研究所，山东青岛266071；3.连云港市海洋与渔业局，江苏连云港222000）

半叶紫菜游离丝状体培育技术

唐兴本1，陈百尧1，连绍兴2，薛学坤3，龚琪本1，安健1，伏光辉1，孙苗苗1

（1.连云港市海洋与水产科学研究所，江苏连云港222046；2.中科院海洋研究所，山东青岛266071；3.连云港市海洋与渔业局，江苏连云港222000）

中国是世界紫菜的主要生产国和出口国，而主要栽培种类只有条斑紫菜和坛紫菜两个品种，养殖品种相对比较单一，而紫菜新品种的开发和利用首要解决的一个问题是苗种培育，也就是解决紫菜丝状体的质与量的问题。

我国的半叶紫菜主要分布在山东青岛至辽宁大连的黄海西部海区，通过培养半叶紫菜的游离丝状体，用游离丝状体接种贝壳进行半叶紫菜苗种培育，或者将半叶紫菜游离丝状体培养成熟，直接用游离丝状体在半叶紫菜网帘上采集壳孢子，培养半叶紫菜的游离丝状体，在一定程度上可以及时、足量、高质量的解决网帘上半叶紫菜海上养殖的苗种供应问题。

迄今为止，对半叶紫菜叶状体的研究比较多，也有个别丝状体培育成苗的研究，但未见关于半叶紫菜游离丝状体培育技术方面的系统报道。

1　使用种菜、工具、用水的准备

1.1种菜准备

2013年2月15日上午，在山东省青岛市附近岛屿的岩石上，找到有半叶紫菜叶状体的岩石，先铲掉岩石上的藤壶、牡蛎壳，捡掉杂草、块状物，反复用干净的海水尽可能的清除岩石和半叶紫菜叶状体上的浮泥，将全部的紫菜叶状体采集放在水桶里，到一个安全方便的地方，再次挑选长度大于10 cm的叶状体，要求叶状体完整、无畸形、无病斑、无难以去除的附着物、表面具光泽，把叶状体放在装水的带盖的塑料桶内，之后运到江苏连云港的省紫菜良种繁育场，待处理。

1.2器具消毒准备

处理种菜、果孢子的用具有解剖盘、解剖刀、毛笔、纱布、脱脂棉、解剖剪刀、镊子、一次性手套、玻璃培养皿、50 mL三角烧瓶20个等；扩增的用具有量筒、量杯，100 mL、250 mL、500 mL三角烧瓶，3 000 mL、10 000 mL细口玻璃瓶等；消毒用具有酒精灯、酒精喷壶、烧水的锅、电炉、70%的消毒酒精等。

小型器皿放在烧水的锅内沸水消毒；不能加热的器具酒精消毒；三角烧瓶蒸煮消毒；必要时用酒精喷壶消毒；房间用紫外线消毒，在半叶紫菜送到良种室前，做好上述消毒准备工作。

1.3培养海水的准备

所用海水符合养殖用水要求，盐度28，经过黑暗沉淀，再经90℃加温消毒处理，在半叶紫菜到良种室前，准备好两份海水备用，一份是10 000 mL加热消毒的海水，一份是10 000 mL添加营养盐的培养液，前一份是处理种菜使用，后一份是将果孢子培养成游离丝状体时使用。

2　制作半叶紫菜游离丝状体

2.1处理种菜

2月16日上午，在保种室的操作车间的操作台上，先选择个体大的半叶紫菜叶状体，平摊在解剖盘里，用脱脂棉蘸取消毒海水，反复正反两面擦洗半叶紫菜叶状体，操作2～3次。然后，在白瓷盘中装消毒海水，用毛笔仔细逐个正反两面洗刷叶状体2～3次。用消毒镊子夹半叶紫菜叶状体放入带盖的广口瓶中，注入消毒海水，加盖，往复振荡广口瓶，洗涤半叶紫菜叶状体。之后从广口瓶中取出叶状体，用滤纸吸掉藻体上海水，将紫菜叶状体平摆在洗刷并消毒的笊帘中，用消毒纱布盖在叶状体上，进行阴干刺激24 h。

2.2种菜放散果孢子

2月17日，在多个三角烧瓶内，分别添加40 mL培养液。

将种菜平摊在解剖盘中，用解剖刀在半叶紫菜叶状体的端部和前部，各取5 cm2大小的叶状体小块，用镊子夹入50 mL的三角烧瓶中，每个瓶子1块，共在20个小三角烧瓶中投放半叶紫菜叶状体小块。每个三角烧瓶加上标签，纪录紫菜种的名称、来源时间与地点、性状等，整个操作争取在在无菌的条件下进行。将三角烧瓶放在僻静的地方，3～5 d摇动瓶子1次，一方面促进壳孢子大量放散，另一方面让果孢子均匀的沉淀于瓶底，3月20日用镊子把种菜取出。这期间，光线强度为50～200 lx，水温15～20℃，盐度28。

3　半叶紫菜游离丝状体的扩增

3.1刚接种丝状体的换瓶

4月30日—5月10日，挑选、整理三角烧瓶内游离丝状体，将肉眼观察有明显绿藻、硅藻、蓝藻等污染以及肉眼还没有观察到丝状体的瓶子，全部清理。通过统计，20个50 mL的三角烧瓶，硅藻污染7个，肉眼看不到游离丝状体的5个，蓝藻污染的1个，破碎瓶子1个，成功培育出无污染的游离丝状体6个，成功率30%。

在室内操作台上，准备10个100 mL三角烧瓶和2 000 mL加热处理的海水，在2 000 mL海水中加入营养液制成培养液。由于大部分半叶紫菜游离丝状体贴附在三角烧瓶底部或瓶壁，操作时用消过毒的毛笔将藻丝刷离瓶底或瓶壁，然后将藻丝及其原培养液倒入准备好的100 mL三角烧瓶中，加入新的培养液到100 mL。用白纸封口放在适当位置，贴上预先准备好的标签，这样一个换瓶子的操作就结束了，在这里要特别说明的是整个操作要做到相互隔离，即每一个换瓶操作的器皿、工具、一次性手套等都是专用的，共同使用的器具在进行下一个操作时，要重新消毒处理；其二，在每一个换瓶操作中，每一个环节都要注意消毒处理，尽量减少每个环节出现丝状体污染的可能性。

营养液的肥料主要为硝酸钠、磷酸二氢钾、柠檬酸铁、碘化钾等，施肥量为氮14×10-6、磷7×10-6、铁1×10-6、钾0.1×10-6，由于培养期间，培养液会不断的蒸发，为了稳定培养液的盐度，在换水间隔期间，根据实际情况，在培养液中加入一定量的蒸馏水。在此期间，光线强度为150～300 lx，水温15～20℃，盐度28。

3.2游离丝状体的扩种培养

5月25日以后，开始了半叶紫菜游离丝状体的扩增操作，由于半叶紫菜养殖试验、推广尚处于探索阶段，该良种场主要进行了半叶紫菜游离丝状体保种和小规模的扩增，用果孢子培育的良种游离丝状体数量也有限，具体扩增的方法参照条斑紫菜游离丝状体培育的相关技术操作。

4　半叶紫菜游离丝状体的保种

4.1半叶紫菜游离丝状体保种方法

保种主要参照条斑紫菜游离丝状体的保种方法。一级保种∶将纯净游离丝状体分装于试管或小三角烧瓶中，置于展示柜中，进行长年保存。二级保种∶取部分一级保存的游离丝状体，分装于100 mL三角烧瓶内，置于10～15℃、100～120 lx环境中培养，控制游离丝状体低速增长，保证随时扩增需要。

4.2半叶紫菜游离丝状体保种效果

采取液相低温保存半叶紫菜游离丝状体。从目前的情况看，保存的半叶紫菜游离丝状体，绝大多数形态结构正常、状态良好，保持原种品系特性。

5　半叶紫菜游离丝状体的形态特点

对半叶紫菜游离丝状体、坛紫菜游离丝状体、条斑紫菜游离丝状体培育形态进行了观察，并将它们的形态特点进行了比较，形成了一点粗浅的认识。

半叶紫菜游离丝状体适应温度范围比较广，生长迅速，紫黑色，为豆粒状的舒展开来的藻丝团，无明显杂藻、无不健康藻丝团；坛紫菜游离丝状体适应温度高、盐度高，生长不成团，而是成单丝，长长的，容易缠在散气石、气管等地方；条斑紫菜游离丝状体适应温度偏低，适应环境能力因产地不同而不同，该保种室的游离丝状体，以日本的条斑紫菜游离丝状体适应环境能力最强，生长速度最快。

doi:10.3969/j.issn.1004-2091.2016.03.013

收稿日期：（2015-07-09）