精子染色质结构与不明原因复发性流产的相关性研究

姚宁++徐迎++何亚琼

【摘要】目的：分析精子染色质结构与不明原因复发性流产的关系。方法：选择2013年4月至2014年4月期间收治的40例不明原因复发性流产孕妇的配偶组成实验组，同时选择40例正常男性组成对照组。对两组男性的精液进行常规检查、精子染色质扩散试验（sperm chromatin dispersion，SCD）实验以及苯胺蓝染色实验，分析两组男性精液的常规数值、DNA完整性以及核蛋白组型，分析不明原因复发性流产与精子染色质结构的关系。结果：经过检测，实验组男性精液的pH、精液体积与对照组比较无差异性（P>005），但实验组精液的密度、活动率、活动力均显著低于对照组，畸形率显著高于对照组（P<005）；经过分析，实验组男性的SCD大光晕与中光晕的比值显著小于对照组，小光晕、无光晕以及DFI值显著高于对照组（P<005）；经过苯胺蓝染色实验分析，实验组男性苯胺兰染色阳性例数以及阳性比例均显著高于对照组（P<005）。结论：男性精子染色质DNA异常可能是不明原因复发性流产发生的原因之一，需要进一步深入的科学研究。

【关键词】精子染色质；精子染色质扩散试验；苯胺蓝染色实验；不明原因复发性流产【中图分类号】R6【文献标志码】A

妊娠不足28周、胎儿体重不足1000g而终止妊娠者称为自然流产，连续2次或2次以上的自然流产则成为复发性流产（recurrent spontaneousabortions，RSA）[1]。RSA发生的病因有生殖道解剖畸形、内分泌紊乱、自身免疫性疾病等，但约有50%的RSA患者的发病原因不明，临床上称之为不明原因性复发性流产（Unexplained recurrent spontaneous abort ions URSA）[2]。URSA是临床上较为常见的且难以治疗的不孕症，影响到了患者的身心健康，甚至造成患者家庭的和睦与社会稳定。URSA的发生与男性的精子质量密不可分，但是关于男性精子质量与URSA的关系的研究性文章较少。本文的目的分析精子染色质结构与不明原因复发性流产的关系。

1临床资料与方法

11临床资料

选择2013年4月至2014年4月期间收治的40例不明原因复发性流产孕妇的配偶组成实验组，同时选择40例配偶已正常生育的男性组成对照组。其中实验组男性年龄23～48岁，平均年龄（345±45）岁，文化程度小学15例，中学18例，大学7例。对照组年龄24～47岁，平均年龄（335±35）岁，文化程度小学14例，中学17例，大学9例。两组患者在年龄、性别以及文化程度等临床资料无差异性（P>005）。

12病例纳入标准

（1）夫妇双方染色体均正常；（2）女方年龄<38 岁、≥3 次的自然流产史；（3）排除影响男性生育功能的放化疗史、创伤史、精索静脉曲张史、慢性疾病或服用药物史的患者；（4）排除女方身体异常造成RSA的男性；（5）入组患者均签署知情同意书。

13检测方法[3]

采用国产WLJY-9000伟力彩色精子质量检测系统软件及计算机操作，对精液的pH、精液体积、密度、活动率、活动力、畸形率进行检测。《WHO人类精液及精子-宫颈黏液相互作用实验室检验手册》为正常精液参照标准；采用SCD实验检测男性DNA的完整性，具体操作严格按照说明进行，根据光晕与精子头部横径的比例，粗分为大、中、小和无光晕4个等级。大和中光晕表示精DNA完整无碎片，小和无光晕表示精子DNA断裂为碎片。小光晕：精子头直径≤1/4。中光晕：精子头直径>1/4且<2/3。大光晕：精子头直径>2/3。DNA断裂指数（DFI）=小光晕+无光晕。采用苯胺蓝染色实验进行男性精子核蛋白组型的检测，严格按照实验组操作步骤进行操作。

14统计学处理

数据处理软件包为SPSS160，计量资料比较采用t值检验，计数资料比较采用χ2检验，P<005表示有显著性差异。

2结果

21两组患者精液常规检查结果的分析

经过检测，实验组男性精液的pH、精液体积与对照组比较无差异性（P>005），但实验组男性精液的密度、活动率、活动力均显著低于对照组，畸形率显著高于对照组（P<005）。见表1。

22两组患者精子DNA完整性检查的分析

经过分析，实验组男性的SCD大光晕与中光晕的比值显著小于对照组，小光晕、无光晕以及DFI值显著高于对照组（P<005）。见表2。

23两组患者精子核蛋白组型检测结果的分析

经过苯胺蓝染色实验分析，实验组男性苯胺兰染色阳性比例均显著高于对照组（P<005）。见表3。

3讨论

URSA是指妊娠28周前排除遗传、解剖、内分泌、感染及自身免疫功能异常等病因的和同一性伴侶连续发生2次或2次以上的自然流产[4，5]。近年的生殖免疫学研究证明：2次或超过2次的自然流产的发病率为5%，而3次或3次以上自然流产的患者约占生育期妇女的1%～2%，并且流产的复发风险会随着流产的次数增加而增加，严重影响了患者的家庭幸福，甚至导致患者抑郁、焦虑等不良情绪的发生[6，7]。随着女性健康检查力度的加大，孕妇的自身状况造成URSA发生的原因基本明了，关于男性精子与URSA的关系的研究不多。因此，分析男性精子DNA的质量与URSA具有重要的临床意义。

近几十年来，临床上反映男性生殖能力的主要检测手段仍然为精液常规检查如精液体积、密度、活力及形态等，这是评估男性生育力的一项基本检测手段，具有简单、快速、便宜、无创伤等优点[8，9]。当精液常规检查结果为异常时，男性的生育力会普遍低下，造成夫妻双方不孕症的发生[10]。笔者研究发现，实验组男性的精液的密度、活动率、活动力均显著低于对照组，具有明显差异性，说明实验组男性可能生育力低于正常男性。但是有权威部门研究发现，精液常规参数分析不能直接反映精子的生育功能，如受精能力或对胚胎发育的影响，若只针对精液常规参数进行检测，这不能够全面了解男方的生育能力[11，12]。检测精子DNA碎片的方法有多种，如SCD试验、精子染色质结构分析（SCSA）法、原位标记法（TUNEL）等[13]，其中SCSA 法是一种快速、敏感的检测方法，是检测精子 DNA 完整性的金标准，在临床上广泛运用[14]。本文作者研究发现，实验组男性精子小光晕、无光晕以及DFI值显著高于对照组（P<005），说明实验组男性精子DNA损伤比较严重。现代医学研究发现[15]，精子染色质的完整性能够影响精子的受精能力、受精卵的分裂以及胚胎的继续发育。国外学者也发现男性精子DNA碎片率与胚胎质量、囊胚获得率呈负相关，进一步说明了男性染色质的完整性对胚胎的发育的重要性。本文作者进行的苯胺蓝染色实验分析，实验组男性的苯胺兰染色阳性例数以及阳性比例均显著高于对照组（P<005），进一步表明了实验组男性精子DNA损伤比较严重，与不明原因不明复发性流产有一定的关系。endprint

综上所述，男性精子染色质DNA异常可能是不明原因复发性流产发生的原因之一，需要进一步深入的科学研究。

参考文献

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（收稿日期：2015-04-15）endprint