甲苯胺红不加热血清试验阳性与自身免疫性疾病的相关性研究

吴晓怡 董海展 李建海

【摘要】目的：探究甲苯胺红不加热血清试验（tolulized red unheated serum test，TRUST）阳性与自身免疫性疾病的关系，为临床研究提供参考依据。方法：选择2010年5月至2014年6月期间来我院诊治的100例红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病患者为病例组，分别采用TRUST和酶联免疫吸附法（ELISA）检测，比较两种方法的阳性检测率。同期选择100例健康人群为对照组，比较病例组和对照组人群的抗心磷脂抗体（ACA）浓度的高低。结果：采用ELISA检测病例组和对照组ACA浓度，病例组患者的IgG-ACA、IgM-ACA与β2-GP1的水平均显著高于对照组人群，具有明显差异性（P<005）；经过TRUST检测，实验组患者凝集反应强度为3+～4+ 者35例，2+者45例，1+者15例，-者为5例，阳性率950%，显著高于对照组患者，具有明显差异性（P<005）。结论：患有自身免疫性疾病的患者的IgG-ACA、IgM-ACA与β2-GP1等ACA水平显著高于正常人群，是一项值得重视的检测指标。TRUST对于筛选自身免疫性疾病阳性患者，具有一定的特异性，具有较高的检查率，可以在临床上使用。

【关键词】甲苯胺红不加热血清试验；自身免疫性疾病；酶联免疫吸附法；抗心磷脂抗体

【中图分类号】R4466【文献标志码】A

迄今为止国内外报道的自身免疫性疾病大约有30多种，如系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关节炎、系统性血管炎、皮肌炎等，严重影响了患者的身心健康，给患者及其家庭带来了困扰。抗心磷脂抗体（anticardiolipin，ACA）是一种以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为靶抗原的自身抗体，常见于系统性红斑狼疮及其他自身免疫性疾病，是一种非特异性的标志抗体[3]。根据非特异性抗体-抗心磷脂抗体的检测原理，甲苯胺红不加热血清试验（tolulized red unheated serum test， TRUST）可用于评价自身免疫性疾病。本文的研究目的是选择ACA为检测目标，选择TRUST检测自身免疫性疾病的患者，探究分析该临床检查方法的可行性。

1临床资料与方法

11临床资料

选择2010年5月至2014年6月期间来我院诊治的100例红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病患者为病例组，同期选择100例健康人群为对照组。分别采用TRUST和酶联免疫吸附法（ELISA）检测，比较两种方法的阳性检测率。两组研究对象在年龄、性别等临床资料无显著性差异（P>005）。见表1。

12仪器、试剂与检测方法

121仪器、试剂（1）TRUST：仪器：水平旋转仪、直径为18mm圆圈的反应卡片、抗原滴管、针头；试剂：TRUST试剂盒。（2）ELISA：仪器：微量移液器、超低温冰箱、LXJ-04离心沉淀机、Coda全自动酶联免疫分析仪；试剂：抗心磷脂抗体（IgG）检测试剂盒、抗心磷脂抗体（IgM）检测试剂盒、抗β2胆糖蛋白1抗体检测试剂盒。

122检测方法所有研究对象均禁食10h以上，于次日清晨空腹抽取肘静脉血3mL，以2000r/min迅速离心分离10min，取上层血清统一编号，置于-80℃的超低温冰箱中集中待检。（1）TRUST [4]：吸取50μL血清放在卡片圆圈中，并均匀地涂布在整个圈内将TRUST抗原轻轻摇匀，然后用9号针头（60±1）d/mL加一滴抗原。最后将卡片置水平旋转仪旋转8min（100±2）r/min。立即在亮光下观察结果。（2）ELISA：ACA抗体水平采用ELISA试剂盒，由德国欧蒙公司提供。按照试剂盒说明操作。

123结果判定TRUST：出现1+～4+强度的凝集反应为阳性结果；不产生凝集反应为阴性结果。凝集反应强度分级[5]：3+～4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液体清亮；2+：圆圈内出现小到中的红色絮状物，液体较清亮；1+：圆圈内出现小的黑色絮状物，液体浑浊；–：圆圈内仅见甲苯胺红颗粒集于中央一点或均匀分散。

13统计学处理

数据处理软件包为SPSS160，计量的比较采用t检验，计数的比较采用χ2检验，P<005表示有显著性差异。

2结果

21病例组和对照组人群ACA水平分析

采用ELISA检测病例组和对照组ACA浓度，病例组患者的IgG-ACA、IgM-ACA与β2-GP1的水平均显著高于对照组人群（P<005）。见表2。

3讨论

自身免疫是指机体免疫系统对自身成分发生免疫应答，产生针对自身成分的抗体和/或致敏的自身反应性淋巴细胞免疫效应。当自身免疫是病理性的，引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病[6，7]。国内外大量文献报道的自身免疫性疾病大约有30多种，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、系统性血管炎等[8，9]。自身免疫性疾病的发生机制主要在于“自身耐受”的破坏，机体产生自身抗体和/或致敏淋巴细胞，损伤表达相应自身抗原的靶器官组织，导致疾病发生[10，11]。该类疾病基本特征表现在：（1）病损部位有变性的免疫球蛋白沉积呈现以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎症；（2）有遗传倾向；（3）患者以女性多见，发病率随年龄而增高；（4）多数自身免疫病是自发或特发性的，感染、药物等外因可能有一定的影响；（5）常与其它自身免疫疾病同时存在。因此，自身免疫性疾病严重影响了患者的身心健康，治疗概率疾病刻不容缓[12]。

ACA水平的检测对临床上判断SLE以及其他自身免疫性疾病的活动性及是否并发血管病变和狼疮性肾炎有重要作用，并可作为自身免疫性疾病疗效观察的指标之一，可以作为某些自身免疫性疾病非特异性的标志抗体[13]。ACA是一组异质抗体，包括IgG、lgA、IgM三类、可结合心磷脂、磷脂酞丝氨酸和磷脂酞肌醇，是一种以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为抗原的自身抗体[14]。该抗体与血栓形成、血管栓塞以及血小板减少等密切相关。TRUST是一种非梅毒螺旋体抗原血清试验，主要用于梅毒的筛选和疗效观察[15]。其检测原理为使用正常牛心肌的心类脂作为抗原，来测定病人血清中的反应素（非特异性抗体-抗心磷脂抗体），用来初步筛查梅毒螺旋体感染。由于非特异性抗体-抗心磷脂抗体在红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病患者血清内存在，理论上可以使用TRUST检测方法检测患者是否患有红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病。本文研究表明，病例组患者的IgG-ACA、IgM-ACA与β2-GP1的水平均显著高于正常人群，提示ACA与部分自身免疫性疾病的发病机制有密切关系。本文作者研究还发现，100例病例组患者经过TRUST检测，实验组患者凝集反应强度为3+～4+者35例，2+者45例，1+者15例，-者为5例，阳性率950%，同对照组3%的阳性率比较具有显著差异，提示TRUST对于筛选自身免疫性疾病或具有一定的诊断作用。

综上所述，患有自身免疫性疾病的患者的IgG-ACA、IgM-ACA与β2-GP1等抗心磷脂抗体（ACA）水平显著高于正常人群，是一项值得重视的检测指标。

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（收稿日期：2015-03-26）