·文摘·

·文摘·

14-3-3tau（YWHAQ）基因启动子高度甲基化在子痫前期胎盘中的作用［英］/LiuH…//Placenta.-2014，35（12）.-981-988

背景与目的：子痫前期（preeclampsia，PE）在全球孕妇中的发生率为3%～5%，该病以孕20周后孕妇出现血压和尿蛋白升高为主要特征，可导致母婴不良结局。研究已证实14-3-3 tau（YWHAQ）基因敲除参与了PE的发生发展，而YWHAQ启动子可能对重度PE患者有不同程度的甲基化作用。研究还发现，YWHAQ可能对PE患者胎盘基因的表观遗传调控发挥重要作用。因此，探讨YWHAQ甲基化（高或低）可成为识别PE相关新标记物的一种有效途径，更好地预测PE发生及了解其发病机制。目前已有学者对PE组织中YWHAQ序列进行了研究，但没有发现明显的甲基化作用。研究目的是通过对PE患者中YWHAQ启动子区的甲基化水平和14-3-3 tau的表达情况，及其与TET（teneleven translocation）表达水平的关系进行分析，探讨其对PE发生发展的影响。

方法：选择2012年12月—2013年7月于上海复旦大学附属妇产科医院就诊的孕妇，其中重度PE患者21例（PE组），同期正常对照孕妇16例（对照组），均为单胎，曾有因PE、臀先露或前次剖宫产而行选择性剖宫产史。研究对象均无心血管、肾脏或其他高血压相关疾病，无吸烟或饮酒史，均签署了知情同意书。研究经医院伦理委员会批准。重度PE判断标准参照2000年国家高血压教育项目工作组制定标准（National High Blood Pressure Education Program Working Group，2000）。患者基因组DNA分析采用点印迹法（dot-blot assay）和免疫组织化学法。采用亚硫酸盐测序、免疫组织化学法、蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测胎盘YWHAQ甲基化、14-3-3 tau和TET表达情况。所有数据采用GraphPad Prism 5.0软件进行统计学分析。

结果：该研究结果显示，PE组胎盘中14-3-3 tau mRNA及其蛋白表达水平低于对照组（P＜0.01）。PE组胎盘中YWHAQ启动子区总体甲基化水平高于对照组（P=0.009 5），其中PE组CpG2～4、CpG9、CpG17和CpG19甲基化水平均较对照组升高，差异均有统计学意义（P＜0.01）。PE组胎盘中5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）水平低于对照组（P＜0.001）；PE组胎盘中TET1～3mRNA表达水平均低于对照组（P＜0.05），其中TET1和TET3蛋白表达水平在PE组胎盘中表达较对照组明显降低（P＜0.001），但TET2表达下调不明显。PE胎盘中5 hmC表达水平降低与TET表达减少有关。5 hmC是在TET酶作用下由5-甲基胞嘧啶（5 mC）转化而来，与对照组比较，PE组胎盘中5 mC表达水平上调，但5 hmC表达下调（P＜0.001）。免疫组化染色显示，5 hmC、5 mC和TET1主要表达于胎盘细胞核中。

结论：孕妇胎盘表观基因组的变化可能破坏胎盘正常功能，引起PE等妊娠期并发症。目前胎盘表观基因组领域的观点认为，孕前或孕期就出现了表观遗传调控的异常，从而导致PE发生率增加，但对于PE的具体机制尚不清楚。该研究认为PE患者胎盘YWHAQ启动子高度甲基化，引起了14-3-3 tau mRNA及其蛋白表达水平下调，从而增强胎盘细胞的凋亡能力，导致胎盘细胞碎片进入母体血液循环。因此作为滋养层细胞重要功能调节因子，YWHAQ启动子的甲基化修饰可能参与了PE的发病过程，但该研究样本量较小，还有待于扩大样本量进行研究。此外，DNA甲基化作用高低依赖于5 mC和5 hmC平衡。PE患者较正常者胎盘组织中5 mC表达上调，5 hmC、TET表达下调，其中TET1 和TET3表达明显减少，提示了TET1和TET3可能在胎盘5 mC转化为5 hmC中起着重要作用。今后还应深入探讨PE患者胎盘中TET表达变化的确切原因及其对表观遗传作用影响的机制，从而有助于利用表观遗传标记物进行靶向治疗以降低PE发病率和死亡率。

（秦娟 摘 孙东建 校）

［本文编辑 秦娟］