人工养殖大鲵感染柱状黄杆菌的诊治

王昕曦

(黔西南州渔业发展中心水产站，贵州 兴义 562400)

人工养殖大鲵感染柱状黄杆菌的诊治

王昕曦

(黔西南州渔业发展中心水产站，贵州 兴义 562400)

大鲵(Andrias davidianus)俗称“娃娃鱼”，属两栖纲、有尾目、隐鳃鲵科，是我国特有的珍稀有尾两栖动物，为国家二级保护动物，经济价值高，具有广泛的开发利用前景。近年来人工养殖大鲵中不断发生各种疾病，给养殖户造成较大的经济损失。2012年3月，贵州省某大鲵养殖场发生了大鲵体表和四肢多处溃烂，内脏器官充血、出血的疾病，经过临床症状观察、病理解剖及实验室检验，诊断为柱状黄杆菌感染。通过采取综合防治措施，大鲵养殖场疫情得到有效控制。现将诊治情况报道如下。

1 发病情况及临床症状

该场大鲵(体重50～100 g，体长10.0～15.0 cm)因更换饵料鱼突然发病。发病初期大鲵行动缓慢，摄食量减少，5～7天后病鲵出现腹部肿胀，前后肢严重肿胀、溃烂，口腔黏膜弥漫性出血。曾用青霉素和庆大霉素浸泡，部分进行肌肉注射治疗无效，并在治疗过程中陆续死亡，病死率高达90%。

2 病理变化

对病死大鲵进行病理剖检可见:下颌与腹部肌肉组织充血;腹腔内有大量淡黄色的积水;肝脏肿大，有淤血呈花斑状，胆囊充盈;脾脏、肾脏肿大，充血、出血;肠道充血、出血，肠壁内充满淡黄色的浆液。

3 实验室检验

3.1 细菌学检查

3.1.1 细菌的分离培养:采用无菌操作取患病大鲵的肝脏组织，用接种环接种在普通琼脂平板上，于28℃恒温培养24 h后，长出1.0～2.5 mm、表面光滑、湿润、凸起、有光泽、边缘整齐、不透明的黄色菌落。经革兰氏染色镜检为革兰氏阴性、两端钝圆、散在或个别成双排列、无芽胞的长杆菌。

3.1.2 生化鉴定:将分离得到的菌株进行生化鉴定，结果该菌能分解七叶苷，氧化酶阳性，不能分解甘露醇、蔗糖、阿拉伯糖、葡萄糖、肌醇、乳糖，不产生靛基质，不产生硫化氢，不分解尿素，硝酸盐还原阴性，鸟氨酸脱羧酶、精氨酸水解酶、水杨素、赖氨酸脱羧酶阴性，M.R.试验和V－P试验均为阴性。

3.1.3 药敏试验:按常规药敏纸片法测定17种抗菌素对分离菌株的抗药谱，以涂布法接种分离菌株，然后将药敏纸片贴在培养基上，28℃培养24 h后，测定抑菌圈直径，敏感度根据杭州微生物试剂有限公司提供的标准进行判定。结果该菌株对头孢噻吩、头孢拉定、氟苯尼考高度敏感，对庆大霉素、氟哌酸、头孢三嗪、强力霉素、头孢唑啉、四环素、青霉素、氨苄青霉素、红霉素、洁霉素、痢特灵、复方新诺明、利福平、链霉素不敏感。

3.2 16S rRNA基因序列分析 本试验采用细菌16S rRNA基因通用引物，采用的25 μL反应体系中含有:10 × Taq Buffer(15 mM MgCl2)2.5 μL，dNTP Mixure(2.5 mM)2 μL，Taq 酶(2.5 U/μL)0.5 μL，引物各 1 μL，模板 DNA 0.5 μL，用 ddH2O补齐25 μL。PCR反应条件为:94℃预变性4 min，94℃变性30 s，54℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环后，72℃延伸10 min。PCR扩增产物经纯化后，送由宝生物(大连)工程有限公司进行序列测定。分离菌株的16S rRNA序列与GenBank基因库柱状黄杆菌的16S rRNA基因进行比对，核苷酸相似性为99%以上，表明分离到的病原菌为柱状黄杆菌。

3.3 饵料鱼的细菌检测 参照3.1的细菌检测方法，对饵料鱼进行检测，结果分离出柱状黄杆菌。

4 诊断

经过流行病学调查、临床症状、病理变化及实验室检验，该养殖场大鲵发生的疾病诊断为柱状黄杆菌感染。

5 防治措施

将患病大鲵与健康大鲵进行隔离，对未患病大鲵应用黄芪多糖、电解多维、葡萄糖进行浸泡，连用15天;对养殖场、养殖水体及养殖用具等彻底消毒;对饵料鱼应用高锰酸钾进行浸泡;对患病大鲵采用水产用氟苯尼考20 mg/kg体重剂量进行腹腔注射，同时应用水产用高效维生素进行浸泡，每天1次，连用7天。15天后发病的大鲵开始摄食，死亡数量明显减少，疫情得到了有效控制。

6 小结与讨论

随着大鲵的规模化和集约化人工繁殖发展，由于缺乏对引种和饵料消毒的重视，近年来大鲵的疾病不断爆发，且诊断和防治的难度增加。本研究中临床用药根据药敏试验结果合理选择药物进行治疗，以减少耐药菌株的产生。同时对患病大鲵制定科学的用药方案，正确配伍，协同用药，综合治疗。针对目前规模化大鲵养殖场疫病的复杂局面，应重视保健和预防，采取合理的消毒程序，建立完善的预防方案，加强对饵料鱼的检测与消毒。

S947.3

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1007－1474(2016)01－0067－02

2015－10－20