不同稀释液对猪精液常温保存效果的影响

吴大江，王家海，张 彬，张 勋

(1.贵州省习水县农牧局，贵州 习水 552200;2.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025;3.贵州省盘县草地畜牧业发展中心，贵州 盘县 553500)

不同稀释液对猪精液常温保存效果的影响

吴大江1，王家海2，张 彬2，张 勋3*

(1.贵州省习水县农牧局，贵州 习水 552200;2.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025;3.贵州省盘县草地畜牧业发展中心，贵州 盘县 553500)

试验利用北京信邦稀释液(试验Ⅰ组)和台湾精旺稀释液(试验Ⅱ组)对猪精液进行常温保存，测定精子活率、有效存活时间、生存指数、pH值。试验结果:试验Ⅱ组稀释后第4天，精液的pH值显著高于试验Ⅰ组(P＜0.05)，试验Ⅱ组的精液pH值始终高于试验Ⅰ组;试验Ⅱ组稀释后精子活率在第4天显著高于试验Ⅰ组(P＜0.05)，试验Ⅱ组精子的有效存活时间与试验Ⅰ组差异不显著(P＞0.05)。试验结果表明，试验Ⅱ组采用的台湾精旺稀释液更有利于精液的保存，适宜大规模推广应用。

猪精液;稀释液;效果

猪的人工授精技术不仅可提高优良公猪的利用价值，改善商品猪的质量，提高母猪的受胎率和产仔数，而且可以降低生产成本，减少生殖道疾病的传播，从而提高养猪生产的经济效益［1］。与冷冻精液相比，常温液态保存的精液具有受胎率高、窝产仔数高、费用低、操作程序简单等优点。因此，常温保存更有利于提高良种公猪遗传资源的利用率。

近年来，随着猪人工授精技术的不断完善，常温保存精液在集约化、规模化养猪场中的推广与应用愈来愈广泛。在常温保存时，猪精液稀释液配方尤为关键，稀释液不但能为精子补充能量，还能减少精子自身能量消耗，延长精子存活时间，提高精子的受精能力。

目前猪精液常温保存的稀释液配方种类很多，但由于猪品种和配方的差异，部分稀释液存在效果不稳定、成本高、母猪的受胎率较低、产仔数少等缺点，严重制约了猪人工授精技术的推广。为探讨不同精液常温保存液的效果，保证良种公猪精液的高效利用，试验选用2种目前较常用的猪精液常温保存稀释液对黔北黑猪的精液进行常温保存，分析精子活率、有效存活时间、生存指数、pH值等指标，探讨不同常温保存稀释液在保存期间对猪精子活力的影响。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 精液的采集:选择3～5岁、体重100 kg左右、体质健康、强壮的黔北黑猪种公猪3头。手握法采精，收集中段浓缩部分，经滤纸过滤后保存于保温杯中，1 h内带回实验室。经过初步检查，选择色泽和气味正常，精子活率在0.8以上，密度为3×108～5×108个/mL的精液用于试验研究。

1.1.2 精液的稀释和分装:将每次采集的精液分成3份，按照2∶1的比例缓慢将等温稀释液加入精液中，轻轻摇晃混匀。然后用10层纱布包裹缓慢降温5～10 min，使精液的温度降至17℃，置于17℃精液保存箱中保存。每隔12 h摇动精液1次，每隔24 h检测精子活率1次，直至精子活率低于 0.50。

1.1.3 精液稀释液的选择:从种猪场常用的稀释液中选择性能比较稳定、价格较低、使用效果较好的北京信邦稀释液(pH 7.5)和台湾精旺稀释液(pH 7.34)进行试验。

1.1.4 主要仪器设备:恒温冰箱、显微镜、精密温度计、烧杯、精液保存袋、稀释精液保存瓶、盖玻片、恒温电热板、玻璃棒、双蒸馏水、保温盒、恒温水浴锅、原精液250 mL以上2份、输精瓶28个、稀释粉3种、标签纸40枚以上、记号笔、暂时保温箱1个、计数板1块、计数器等。

1.2 试验设计 选择种猪场常用的北京信邦稀释液和台湾精旺稀释液，测定稀释后的精子活率、有效存活时间、生存指数、精液的pH值等。试验Ⅰ组采用北京信邦稀释液，试验Ⅱ组采用台湾精旺稀释液。

1.3 检测指标

1.3.1 精子活率:精子活率的测定采用目测法。每隔12 h测定2种稀释液和生理盐水保存的精子活率。从恒温箱中取出常温保存精液，用移液枪吸取30 μL置于载玻片上，盖上盖玻片后立即在200～400倍光学显微镜下观察。每个样品随机观察3个视野，检测视野中直线前进运动的精子数占总精子数的比例，求其平均值作为精子活率。

1.3.2 精子有效存活时间:精子活率不低于0.50的保存时间。

1.3.3 精子生存指数:生存指数=(上次精子活率+下次精子活率)×2/间隔时间。精子生存时间越长，生存指数越大，说明精子活率越强，品质越好。

1.3.4 精液pH值:利用酸度仪分别检测原精液、稀释液以及稀释后精液的pH值。每天检测1次，观察其变化规律。

1.4 统计分析 每组至少重复3次，所有数据均采用“平均数±标准差”表示。采用SPSS 17.0统计软件对相关指标进行差异显著性检验。

2 结果与分析

2.1 不同稀释液稀释后精液pH值的变化 从表1可知，试验Ⅱ组稀释后第4天，精液的pH值显著高于试验Ⅰ组(P＜0.05)。稀释后，试验Ⅱ组的精液pH值始终高于试验Ⅰ组。原精、稀释剂以及稀释后精液pH值偏碱性，稀释液的pH值随着时间下降，最后趋于稳定在7.11。

表1 不同常温保存稀释液稀释后不同保存时间精液的pH

2.2 不同稀释液稀释后精子存活时间和生存指数的影响 由表2可知，试验Ⅱ组稀释后精子活率在第4天显著高于试验Ⅰ组(P＜0.05)，试验Ⅱ组精子的有效存活时间与试验Ⅰ组差异不显著(P＞0.05)。另外，试验Ⅱ组精子的生存指数高于试验Ⅰ组。从精子生存指数分析，试验Ⅱ组用的台湾精旺稀释液对黔北黑猪的精液常温保存的效果较好。

表2 不同常温保存稀释液稀释后对精子存活时间和生存指数的影响

3 讨论

3.1 不同常温保存稀释液对猪精液pH值的影响

Kuster等［2］认为弱酸环境可抑制精子的代谢和活动，能量消耗降低，体外存活时间相应延长。稀释液pH值为5.5～6.5，稀释后精液 pH 值在6.5～7.0时对延长精子寿命效果显著，弱酸环境被认为是精液保存的理想环境。但戈新等［3］认为，精液在保存过程中会产生酸性代谢产物，碱性稀释液能够中和一部分酸性物质，防止稀释液过酸造成精子死亡。高飞等［4］研究发现，为了维持精液pH值的相对稳定，在稀释液中添加碳酸氢钠、柠檬酸钠等缓冲剂可平衡精子和细菌的代谢产物，维持精子生存环境的相对稳定，同样起到保护精子的作用，更利于精子的长期保存。本次试验结果显示，试验Ⅱ组用的台湾精旺稀释液更有利于精子的保存，这可能是由于稀释液中含有碳酸氢钠、柠檬酸钠、TRIS等缓冲液，较好地维持了精子生存环境的稳定，从而有利于保存精子。本研究发现2种稀释液均呈弱碱性，与戈新等的研究结果一致。这可能是因为弱碱性的稀释液在稀释精液时对精子的刺激小，更符合精子的生存环境，且在精液保存的过程中弱碱性的稀释液可以中和精子代谢产生的酸性产物，防止精液pH值过酸造成精子死亡，延长了精子保存时间，提高了精液保存效果。

3.2 不同常温保存稀释液对猪精子生存指数影响

在猪精液保存时，稀释液成分对精液的保存效果至关重要。精液稀释后不仅可以扩大容积，还可以为精子代谢提供所需的能量物质［5］。因此，稀释液中含有营养物质、抗氧化剂、酶和激素等各种成分，以维持或延长精子活率。据报道［4］，葡萄糖能为精子提供能量，在绝大多数配方中被使用;牛血清白蛋白可以稳定精子结构，中和精子有害代谢产物，有效延长精子保存时间，提高受精能力;乙二胺四乙酸能防止精子在保存过程中发生顶体反应，丧失受精能力。本次试验选用2种不同稀释液研究在温度、稀释倍数等条件相同情况下保存猪精液的效果，表明台湾精旺稀释液的保存效果较好，精子活率在保存5 d后还保持在0.61，且有效保存时间和生存指数均较高。这可能是因为台湾精旺稀释液中含有葡萄糖、BSA、EDTA等有效成分，不仅在体外保存期间为猪精子提供能量，还可以稳定精子结构，清除精液中的有害成分，从而提高了精液的保存效果。

试验结果表明，在黔北黑猪精液常温保存中，台湾精旺稀释液的效果要优于北京信邦稀释液，适宜大面积推广应用。因影响精液常温保存效果的因素很多，其作用机理也非常复杂，关于不同种类的稀释液以及稀释液中不同成分对精子的作用机理有待于进一步探讨。

［1］张守全，吴同山，李炳坤，等.人工授精与本交对引进品种母猪繁殖表现的影响［J］.养猪，1999，(4):14～15.

［2］Kuster C E，Althouse G C.The fecundity of porcine semen stored for 2 to 6 days in Androhep and Xcelitm extenders［J］.Therigenology，1999，(52):365～376.

［3］戈新，张宝殉，王建华，等.带精浆直接稀释法探讨猪精液低温保存的可能性［J］.广西农业生物科学，2006，(25):23～30.

［4］高飞，岳奎忠，杨增明.猪精液液态保存的研究进展［J］.中国畜牧杂志，2004，40(6):46～49.

［5］荆汝顶.猪长效精液稀释剂的研制及临床应用研究［D］.武汉:华中农业大学，2010.

Effect of Different Diluent on the Preservation of Pig Semen at Room Temperature

Wu Dajiang1，Wang Jiahai2，Zhang Bin2，Zhang Xun3*
(1.Guizhou Xishui County Agriculture and Animal Husbandry Bureau，Xishui Guizhou 552200，China;2.College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang Guizhou 550025，China;3.Panxian Grassland Animal Husbandry Development Center，Panxian Guizhou 553537，China)

This experiment using Beijing sinbon dilution(group Ⅰ)and Taiwan＇s fine Wang dilution(test group Ⅱ)on porcine semen at room temperature preservation，determination of sperm live rate，survival time and survival index and pH value.The results showed that 4 days after the experiment groupⅡ dilution，semen pH value was significantly higher than that of experiment groupⅠ (P＜ 0.05)and experiment groupⅡ of the semen pH value is always higher than that of experimental groupⅠ;experiment groupⅡdiluted sperm live rate at day 4 was significantly higher than that of groupⅠ(P ＜ 0.05)，test groupⅡ sperm effective survival time and testⅠ group，the difference was not significant(P ＞ 0.05).The results showed that the Taiwan sperm dilution solution used in the test group was more favorable for the preservation of semen，which was suitable for large－scale popularization and application.

Diluent;Pig Semen;Effect

S828.3+4

A

1007－1474(2016)01－0011－03

2015－10－13

吴大江(1970—)，男，畜牧师，主要从事畜牧工作。E －mail:207318085@qq.com

*通讯作者:E－mail:1415021447@qq.com