脐血肾上腺髓质素及胎盘滋养细胞凋亡与FGR的相关性分析

谢晖，刘红艳，陈军

(安康市妇幼保健医院妇产科1、检验科2，陕西 安康 725000)

脐血肾上腺髓质素及胎盘滋养细胞凋亡与FGR的相关性分析

谢晖1，刘红艳1，陈军2

(安康市妇幼保健医院妇产科1、检验科2，陕西 安康 725000)

目的研究脐血肾上腺髓质素(ADM)、胎盘滋养细胞凋亡与胎儿生长受限(FGR)的相关性。方法选择2012年1月至2014年12月在我院分娩的生长受限的胎儿76例，记为观察组，再选择同期在我院分娩的适龄儿76例，记为对照组。对比两组胎儿的一般情况，然后进行ADM、胎盘滋养细胞凋亡指数、Bc1-1蛋白以及Caspase-3蛋白水平的检测对比，最后进行相关性分析。结果观察组胎儿的体重、身长、坐高以及头围均明显小于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)；观察组ADM、凋亡指数分别为(64.27±17.32)pg/ml、(34.82±9.47)%，均明显高于对照组的(48.93±12.11)pg/ml、(8.04±2.46)%，并且观察组Bc1-1蛋白水平低于对照组，而Caspase-3蛋白水平高于对照组，以上各项指标比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；ADM与Bc1-1表达水平呈明显的负相关(r=-0.461，P=0.000)，与Caspase-3蛋白表达水平呈正相关(r=0.783，P=0.000)，而凋亡指数与ADM、Bc1-1蛋白均无显著相关性(r=0.283，P=0.827；r=0.362，P=0.103)，与Caspase-3蛋白呈正相关(r=0.821，P=0.000)。结论脐血ADM与滋养细胞相关凋亡蛋白Bc1-1蛋白以及Caspase-3蛋白的共同作用下形成FGR。ADM与胎盘滋养细胞的凋亡水平与FGR的发生存在显著的相关性。

胎儿生长受限；脐血；肾上腺髓质素；胎盘滋养细胞；凋亡；相关性

初生儿的生长发育受多种因素影响，其中胎儿期吸收的营养在很大程度上决定了后期的生长发育，尤其是相关激素的调节在一定程度上代表了代谢水平，因此影响身体质量。而激素等作用的效果受激素量的多少、作用时间长短的影响，因此，不同胎龄的初生儿在体格方面显示出较大的差别，其中胎儿生长受限(FGR)就是在一定程度上无法达到适龄儿的生长情况的新生儿，对其深入研究显得尤为重要[1-2]。脐血肾上腺髓质素(ADM)能扩张脐血管，同时具有氧气及物质的供给，而胎盘滋养细胞提供主要的营养，两者相关水平的波动对胎儿的生长影响深远[3]。鉴于此，本文通过对我院FGR与适龄儿的ADM、胎盘滋养细胞水平进行对比并探究其中的相关性，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年1月至2014年12月在我院分娩的生长受限的胎儿76例作为观察组，其中男婴41例，女婴35例；胎龄36.4～40.4周，平均(38.6±2.18)周。选择同期在我院分娩的适龄儿76例作为对照组，其中男婴40例，女婴36例；胎龄37.1～41.3周，平均(39.3±2.23)周。两组胎儿的性别、胎龄等基本资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 (1)脐血在胎儿出生后断脐取静脉脐血4 ml，在分离后于-70℃的环境下保存。采用放射免疫法检测ADM水平，其中试剂盒来自北京华埠力特生物技术研究所。(2)胎盘是在分娩后在胎盘母体面取得体积约为8 cm3的正方体组织块，然后加用10%甲醛溶液固定并通过石蜡包埋后得到4 μm的切片。采用免疫组织化学法对胎盘组织中的 Bcl-1和Caspase-3蛋白水平进行测定，然后通过镜检得到相关水平。(3)最后是胎盘滋养细胞凋亡检测：采用原位末端标记法检测，试剂盒来自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 观察指标[3-5](1)经染色后呈现为棕黄至棕褐色的滋养细胞为阳性细胞，以此计算Bc1-1和Caspase-3蛋白水平；(2)经染色为黑色的胎盘滋养细胞为凋亡细胞，然后计算凋亡指数。其中凋亡指数=凋亡细胞数/细胞总数×100%。

1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，相关分析采用Pearson相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组受检者的体格发育情况比较 观察组患者的体重、身长、坐高以及头围均明显小于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组受检者的体格发育情况比较(±s)

表1 两组受检者的体格发育情况比较(±s)

例数组别 体重(g)身长(cm)坐高(cm)头围(cm) 76 76观察组对照组t值P值3.09±0.17 3.27±0.21 5.809 0.000 50.12±2.12 50.93±2.20 2.311 0.022 33.68±1.29 34.12±1.34 2.062 0.041 33.47±1.17 33.98±1.29 2.553 0.012

2.2 两组受检者的ADM及凋亡指数比较 观察组患者的ADM及凋亡指数均明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 两组受检者的ADM及凋亡指数比较(±s)

表2 两组受检者的ADM及凋亡指数比较(±s)

组别 例数ADM（pg/ml） 凋亡指数(%)观察组对照组t值P值76 76 64.27±17.32 48.93±12.11 6.328 0.000 34.82±9.47 8.04±2.46 23.861 0.000

2.3 两组受检者的胎盘滋养细胞Bcl-1和Caspase-3蛋白水平比较 观察组受检者的Bcl-1蛋白水平低于对照组，而Caspase-3蛋白水平高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 两组受检者的胎盘滋养细胞Bcl-1和Caspase-3蛋白水平比较(±s)

表3 两组受检者的胎盘滋养细胞Bcl-1和Caspase-3蛋白水平比较(±s)

组别 例数Bcl-1蛋白(U/ml)Caspase-3蛋白(U/L)观察组对照组t值P值76 76 3.68±1.02 4.73±1.34 5.436 0.000 18.94±3.47 8.34±1.23 25.100 0.000

2.4 ADM、凋亡指数与滋养细胞 Bc1-1、Caspase-3蛋白的相关性 ADM与Bc1-1表达水平呈明显的负相关，与Caspase-3蛋白表达水平呈正相关。而凋亡指数与ADM、Bc1-1蛋白均无显著相关性，与Caspase-3蛋白呈正相关，见表4。

表4 ADM、凋亡指数与滋养细胞Bc1-2、Caspase-3蛋白相关性

3 讨 论

临床上，FGR是指胎儿生长情况弱于适龄儿的新生儿，可能会受到遗传因素以及胎盘情况影响[6-7]。FGR是一种严重危害胎儿健康的主要并发症之一，对围产儿死亡率的影响也较大，在胎儿逐渐成长的过程中还会对其心智及体能造成不同程度的影响，并且使成年人具有较高的合并冠心病、糖尿病的概率。本研究通过对FGR与适龄儿出生情况进行统计对比发现，观察组体重、身长、坐高以及头围均显著小于对照组，在ilhan等[8]和刘亚军等[9]的报道中也有类似结论。说明一般情况下FGR生长发育小于适龄儿，在体格上存在明显的表现差异。原因可能是因为FGR的发病机制相对复杂，但也可能与ADM、胎盘细胞的凋亡存在较大的关系。

本文结果发现，观察组ADM、凋亡指数以及Caspase-3蛋白水平均显著高于对照组，而Bc1-1蛋白水平低于对照组。通过相关性分析得到ADM与Bc1-1表达水平呈明显的负相关，与Caspase-3蛋白表达水平呈正相关，而凋亡指数与Caspase-3蛋白也呈正相关，与文献报道一致[10-12]。ADM是主要在相关生殖系统中表达的多肽，尤其在卵巢、胎盘以及脐静脉等有高水平表达。处于妊娠期时母体及胎盘均会合成ADM，并在妊娠的较早期开始分泌参与受精卵着床直到分娩的整个过程。ADM通过相关酶的作用使得血管舒张，从而对胎儿中相关激素起到一定的调节作用。而FGR出现ADM水平上升主要可能因为胎儿的整个循环过程出现了损伤，进而需要更多的氧气及营养物质需要供应。ADM出现代偿反应，尽可能使得脐血管出现扩张以保证最大程度的氧气及营养物质的供应。而胎儿的正常发育在一定程度上主要取决于胎盘，尤其是为胎儿提供充足氧气及营养的滋养细胞。出现特殊情况时，如孕妇吸烟、贫血等导致其处于缺氧状态，进而对滋养细胞造成一定的损伤。在此种情况下可能引起胎盘功能异常，从而引发FGR。

正常情况下细胞的凋亡是仅仅是一种生理现象，对机体的维持作用很明显，其中Bc1-1蛋白是最主要的抗凋亡因子，通过激活Caspase-3蛋白来共同作用于细胞凋亡的控制过程，在FGR中Bc1-1蛋白开始低水平表达，这就直接抑制了Caspase-3蛋白的转化[13]。两者之间的表达存在显著的负相关，这就导致正常的凋亡过程无法实现，从而出现不正常凋亡或者过度凋亡，在极大程度上抑制胎儿的正常发育。当胎盘出现供应不足的时候导致缺氧、营养缺乏等主要现象，这就对ADM mRNA相关转录的水平及蛋白水平有明显增加的趋势，进而加大了ADM水平，从而提示两者可能共同作用参与了FGR的发生。

综上所述，FGR的发生与ADM水平升高、胎盘滋养细胞凋亡以及相关凋亡蛋白的水平波动存在明显的相关性，这为临床对FGR的诊断及治疗提供更多的指导依据，具有较高的临床应用价值。

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Correlation analysis of the relationship between adrenomedullin,apoptosis of placental trophoblast cells and fetal growth restriction.

XIE Hui1,LIU Hong-yan1,CHEN Jun2.Department of Gynaecology and Obstetrics1,Department of Clinical Laboratory2,Maternal and Child Health Hospital of Ankang City,Ankang 725000,Shaanxi,CHINA

Objective To explore the relationship between adrenomedullin(ADM)of umbilical cord blood,the apoptosis of placental trophoblast cells and fetal growth restriction(FGR).MethodsSeventy-six fetuses of fetal growth restriction in our hospital from January 2012 to December 2014 were selected as the observation group,and 76 fetuses delivered in our hospital in the same period were enrolled as the control group.The general conditions,ADM, apoptosis index of placental trophoblast cells,Bc1-1 protein and Caspase-3 protein levels were compared between the two groups.Finally,correlation analysis was performed.ResultsThe weight,height,sitting height and head circumference of the fetuses in the observation group were significantly lower than those in the control group(P＜0.05).The ADM and apoptosis index of the observation group were(64.27±17.32)pg/ml,(34.82±9.47)%,respectively,which were significantly higher than those in the control group of(48.93±12.11)pg/ml,(8.04±2.46)%.The level of Bc1-1 protein in the observation group was significantly lower than that in the control group,while the level of Caspase-3 protein was significantly higher than that in the control group.The differences were all statistically significant(P＜0.05).Correlation analysis showed that the expression level of ADM was negatively correlated with the expression level of Bc1-1(r=-0.461,P= 0.000),and positively correlated with the expression level of Caspase-3 protein(r=0.783,P=0.000).The apoptotic index and ADM,Bc1-1 protein expression showed no significant correlation(r=0.283,P=0.827;r=0.362,P=0.103),whileapoptotic index showed positive correlation with Caspase-3 protein(r=0.821,P=0.000).ConclusionADM of umbilical cord blood and apoptosis proteins of placental trophoblast cells(Bcl-1 and Caspase-3)jointly result in the formation of FGR,andADM,apoptosis of placental trophoblastic cells are significantly correlated with FGR.

Fetal growth restriction(FGR);Umbilical cord blood;Adrenomedullin(ADM);Placental trophoblast cells;Apoptosis;Correlation

R714.51

A

1003—6350（2016）05—0703—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.05.005

2015-07-21)

谢晖。E-mail：1093853804@qq.com