LC/MS检定前列舒乐胶囊中的淫羊藿苷的含量

汪秀月，卜其涛，张成中

(阜阳市食品药品检验检测中心，安徽 阜阳　236015)



LC/MS检定前列舒乐胶囊中的淫羊藿苷的含量

汪秀月，卜其涛，张成中

(阜阳市食品药品检验检测中心，安徽 阜阳236015)

摘要：目的建立前列舒胶囊中淫羊藿苷含量LC/MS测定方法。方法采用LC/MS测定前列舒乐胶囊中淫羊藿苷的含量，并比较其与HPLC法的优劣。结果LC/MS测定淫羊藿苷0.05～0.50 mg范围内线性关系良好，与标准方法比较相对偏差小于2%，符合药品标准的规定。结论LC/MS检测前列舒乐胶囊中的淫羊藿苷方法简便，快速，灵敏度高，可以进行定量分析。

关键词：淫羊藿苷；液质联用；含量测定

前列舒乐胶囊方由淫羊藿、黄芪、蒲黄、车前草、川牛膝等五味中药组成，具有补肾益气，化瘀通淋之功效，可用于肾脾双虚，气滞血瘀，前列腺增生，慢性前列腺炎等的治疗。方以淫羊藿为君药，淫羊藿中主要成分为淫羊藿苷，国家局药品标准采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量[1]，曾有文献报道也以HPLC法检测为主[2]，本文采用LC-MS测定其含量，并与HPLC检测结果比较，本法灵敏度高、重现性好、简便快速易行。

1仪器和材料

Agilent1290高效液相色谱仪串联6460三重四级杆质谱仪(美国Agilent公司)；色谱柱：ZORBAX SB-C18(600 Bar 2.1 mm×55 mm，1.8 μm)；岛津LC-20AT型高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器(日本岛津株式会社)；Elma E100H型数控超声波清洗器(德国Elma公司)； XP205电子分析天平(METTLER TOLEDO公司)。

淫羊藿苷(110737-200415)对照品，供含量测定用，购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈、甲酸为色谱纯(国药集团)；蒸馏水(广州屈臣氏食品饮料有限公司)；其他试剂均为分析纯。

2实验方法

2.1LC/MS条件流动相：甲醇-0.1%甲酸溶液(50∶50)；流速：0.4 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量1 μL，分析时长4 min；电喷雾离子源(ESI)，正离子模式；雾化器压力45 psi，干燥器温度300℃，干燥器流速：8.0 L·min-1，鞘气温度350℃，鞘气流速11 L·min-1；多重反应监测(MRM)：母离子677.2；子离子531.1、313.0(见表1、图1)。

表1　质谱条件

金丝桃苷，属于黄酮醇苷类化合物，具有解痉、消炎、利尿、降压、止咳、降低胆固醇，蛋白同化、局部和中枢镇疼以及对心、脑血管的保护作用等多种生理活性，是一种重要的天然产物[8]。本实验建立了HPLC法测定男宝胶囊中金丝桃苷含量，该方法稳定、简单、重复性好，且杂质干扰小，是一种较为理想的含量测定方法，可作为男宝胶囊的质量控制方法。但鉴于男宝胶囊成分复杂，是由31味药组成，金丝桃苷是其君药菟丝子中的有效成分之一。如何建立适合于男宝胶囊质量控制的完善方法，尚需进一步研究。

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会 编.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂[S].第十九册.北京:人民卫生出版社,1998:85.

[2]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社,2010:290-291.

[3]赵陆华 主编.中药高效液相色谱法应用[M].北京：中国医药科技出版社,2005:436.

[4]汪光林,王坚,吕哗.RP-HPLC法测定宁心红胶囊中金丝桃苷和绿原酸的含量[J].中国药房,2008,19(9):694-696.

[5]程笑宇,程序,贾天柱.HPLC法优选不同产地菟丝子[J].中国现代药物应用,2013,7(13):221-222.

[6]莫练春.HPLC法测定千柏鼻炎片中对金丝桃苷的含量[J].求医问药,2012,10(8):310-311.

[7]管群,吕圭源,俞静静,等.不同产地菟丝子总黄酮及金丝桃苷的含量测定[J].浙江中医药大学学报,2012,36(2)：184-186,191.

[8]林萍,易宏伟,张斐.金丝桃苷药理作用研究进展[J].中国现代中药,2012,14(10):23-26.

图1　淫羊藿苷MRM图谱及总离子流图

2.2对照品配制精密称取淫羊藿苷对照品 10.24 mg加甲醇溶解稀释成2.026 mg·L-1的标准储备液。

2.3样品处理准确称取重量差异项下前列舒胶囊内容物约0.3 g，精密加入70%乙醇25 mL，称定重量，超声处理30 min，再称定重量，用70%乙醇补足减失的量，过滤，滤液备用，必要时稀释至检测限度范围内。

2.4高效液相色谱测定条件以乙腈-水(25∶75)为流动相，柱温：35℃，进样量：10 μL,检测波长：270 nm。

3结果

3.1标准曲线将淫羊藿苷标准储备液稀释成为0.05、0.10、0.20、0.40、0.50 mg·L-1标准溶液，分别将不同浓度的淫羊藿苷标准溶液进样分析，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=100.076 302X-1 146.043 300(R2=0.999 7), 0.05～0.50 mg·L-1内线性关系良好。

3.2精密度试验精密吸取“3.1”项下浓度为0.1 mg·L-1的标准溶液连续进样5次，峰面积的RSD为2.5%，表明精密度良好。

3.3加样回收率试验精密称取同一批前列舒乐胶囊0.32 g,共6份，分别精密加入0.05 mg·L-1的对照品溶液各2 mL，按“2.3”项下方法制备样品溶液，进样测定，每个样品重复进样3次，按标准曲线计算含量，计算得平均回收率95.2%，RSD为1.7%。

3.4样品含量取不同厂家的3批前列舒乐胶囊，按“2.3”项下方法制备样品溶液，分别进样，多重反应监测测定，母离子677.2；子离子531.1定性、313.0定量，每批测定2个平行样品，根据标准曲线计算含量，与HPLC法测定结果比较，HPLC法采用国家食品药品监督管理局药品标准YBZ05102006所用标准(表2)。

表2　前列舒乐胶囊含量测定结果(n=3批×2)

4讨论

前列舒乐胶囊能明显抑制前列腺的增生,改善其病理形态[3]，具有较强的抗炎作用及一定的免疫调节作用[4]。淫羊藿是前列舒乐胶囊中的君药，具有补肾壮阳、祛风除湿、通淋之功效，其主要成分为淫羊藿苷，是本中成药质量控制的主要指标成分之一。淫羊藿苷质谱裂解母离子m/z 677.2[M+H]+，二级质谱可以得到碎片离子531.1[M+H-rha]+、369.2[M+H-rha-glc]+，313.0[M+H-rha-glc-C4H8]+等，本文以531.1作为含量测定的定性离子，313.0作为定量离子，采用LC/MS测定淫羊藿苷的含量。

采用LC/MS法测定淫羊藿苷的含量可以得到与HPLC一致的结果，定性定量更精确，检验时间较短，实验操作更快捷方便，所用试剂较少，因此，LC/MS法可以用于前列舒乐胶囊的含量测定。

[1]国家食品药品监督管理局.YBZ05102006[S].北京：化学工业出版社，2006：633.

[2]张培芳,史亚军.HPLC法测定前列舒乐胶囊中淫羊藿苷的含量[J].云南中医学院学报,2008,31(4):21-22,40.

[3]陶玲,沈祥春.王永林.等.前列舒乐胶囊对实验性动物前列腺增生的预防及治疗[J].时珍国医国药,2006,17(8):1469-1470.

[4]陶玲,王永林,黄能慧,等.前列舒乐胶囊的抗炎作用及对小鼠免疫功能的影响[J].中药药理与临床,2000,16(5):37-38.

收稿日期：(2015-06-23，修回日期：2015-10-17) (2015-09-11，修稿日期：2015-10-23)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.01.017