HPLC法测定平喘抗炎胶囊中槲皮素与山柰酚的含量

杨玲霞　朱旭江　马怡荣

甘肃省药品检验研究院，甘肃　兰州　730070



HPLC法测定平喘抗炎胶囊中槲皮素与山柰酚的含量

杨玲霞朱旭江马怡荣

甘肃省药品检验研究院，甘肃兰州730070

【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定平喘抗炎胶囊中槲皮素和山柰酚含量的方法。方法：色谱柱为Kromasil C18柱(4.0mm×250mm，5.0μm)；甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长360nm；检测温度：室温。结果：槲皮素、山柰酚分别在0.0634 ～1.268μg 和0.0307 ～0.614μg范围内具有良好线性关系，平均回收率分别为98.14%(RSD=2.15%)和97.03%(RSD=1.08%)。结论：该法准确、灵敏，可用于平喘抗炎胶囊中槲皮素和山柰酚的含量测定。

【关键词】平喘抗炎胶囊；槲皮素；山柰酚；高效液相色谱法

平喘抗炎胶囊收载于《中成药地方标准上升国家标准内科肺系(二)分册》，由桃儿七、桔梗、苦杏仁等组成，具有降气化痰、止咳平喘的功效。临床用于痰浊阻肺证，症见咽喉肿痛、咳嗽气喘、胸满痰多、脘腹胀痛及气管炎见以上证候者。原质量标准收载了苦杏仁中苦杏仁苷的含量测定方法，对方中君药桃儿七只收载了槲皮素的薄层色谱鉴别，未收载含量控制方法。桃儿七具有祛痰止咳的功能，但由于其生长缓慢，对环境要求苛刻，分布范围狭窄，1992年被《中国植物红皮书》收录，是我国濒危珍稀药用植物。桃儿七主要化学成分为木脂素类及黄酮类，其中黄酮类成分主要为槲皮素和山柰酚，具有很好的抗氧化、抗菌、祛痰及镇咳作用，为临床治疗气管炎的有效成分[1-3]。因此制定桃儿七中黄酮类成分的含量检测方法对控制平喘抗炎胶囊的内在质量具有很重要的意义。研究采用高效液相色谱法同时测定平喘抗炎胶囊中槲皮素和山柰酚的含量，为平喘抗炎胶囊的的质量控制提供实验依据。

1仪器与材料

1.1仪器LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；梅特勒XS205DU电子天平(瑞士Mettler toledo公司)。B3200S-T型超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)，MILLI Q超纯水系统(美国Millipore公司)。

1.2材料槲皮素对照品(批号：100081-200406)、山柰酚对照品(批号：110861-2004050)购自中国食品药品生物制品检定院；平喘抗炎胶囊(批号：1401066501、1401066301、1301066901，奇正藏药制药股份有限公司)。甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备分别精密称取槲皮素6.34mg、山柰酚3.07mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液(槲皮素为0.1268 mg/ml，山柰酚为0.0614 mg/ml)。精密吸取对照品储备溶液10 ml，加甲醇定容至50ml，即得对照品溶液。

2.2供试品溶液的制备取本品内容物约2.5g,精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.46μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

另按处方比例及制备工艺，配制不含桃儿七的阴性样品，按照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.3色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱(4.0mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(50∶50)；检测波长：360nm；流速：1.0ml/min；温度：室温；进样量：10μl。

2.4系统适用性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μl，按“2.3”项下色谱条件进样测定，色谱图见图1。

结果表明在此色谱条件下，槲皮素和山柰酚均与样品中其他组分色谱峰基线分离，理论塔板数按槲皮素峰计算为8235，按山柰酚计算为5567。

2.5线性关系的考察精密量取对照品贮备液0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，用0.46μm的微孔滤膜滤过，依次进样10μl。以槲皮素、山柰酚峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行回归计算，槲皮素的回归方程为A=4129136C+55461，r=1.0000，槲皮素的线性范围为0.0634～1.268μg；山柰酚的回归方程为A=3864867C+122331，r=0.9999，山柰酚的线性范围为0.0307～0.614μg。结果表明在给定的范围内槲皮素和山柰酚线性关系良好。

2.6精密度试验精密吸取对照品溶液，按“2.3”色谱条件重复进样5次，每次10μl，分别计算得槲皮素峰面积的RSD为1.14%、山柰酚峰面积的RSD为1.68%，表明精密度良好。

2.7重复性试验精密称取平喘抗炎胶囊内容物(批号：1401066301)5份，按照2.2项下的方法制备供试品溶液，按照“2.3”项下的方法依次进样测定，结果槲皮素平均含量的RSD为1.74%，山柰酚平均含量的RSD为2.09%，表明本法重复性良好。

2.8稳定性试验取供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、16、24h进样10μl，测定槲皮素和山柰酚的峰面积，结果槲皮素峰面积的RSD为2.37%，山柰酚峰面积的RSD为2.06%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.9加样回收率实验取已知含量的平喘抗炎胶囊样品(批号：1401066301，槲皮素和山柰酚含量分别为0.28mg/g和0.11 mg/g)6份，精密称定，分别精密加入对照品贮备溶液适量，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表1、表2。结果表明该方法具有良好的准确性。

表1　槲皮素的加样回收率试验结果　 (n=6)

表2　山柰酚的加样回收率试验结果　(n=6)

2.10样品测定结果采用本实验所建立的方法对3批样品中槲皮素和山柰酚含量进行测定，计算含量，结果见表3。

表3　样品测定结果 　(n=3)

3讨论

桃儿七主要化学成分为木脂素类及黄酮类，其中木脂素类成分如鬼臼毒素等具有抗癌活性而研究较多，有关桃儿七及其制剂的质量分析研究也集中在木脂素类成分[4-7]，对桃儿七中黄酮类成分则少有报道。而黄酮类如槲皮素、山柰酚及其苷类具有祛痰、平喘等功效[1-3]，与平喘抗炎胶囊等临床作用一致，因此制定制剂中黄酮类化合物的定量测定方法很有必要。

研究建立了高效液相色谱测定平喘抗炎胶囊中槲皮素和山柰酚含量的方法，实验结果表明该法准确、灵敏，重现性好，结果可靠，为有效控制制剂的质量提供了科学依据。

参考文献

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[3]区智,屈燕.桃儿七国内外研究进展[J].北方园艺,2013, (18): 183-185.

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Quantitative Determination of Quercetin and Kaempferol in Pingchuan Kangyan Capsules by HPLC

YANG LingxiaZHU XujiangMA Yirong

Gansu Institute for Drug Control, Lanzhou 730070, China.

Abstract:Objective To establish a HPLC method for the simultaneously determination of quercetin and kaempferol in pingchuan kangyan capsules.Methods The HPLC analysis was carried out on Kromasil C18( 250 mm × 4.6 mm，5 μm) with a mixture of methanol -0.1% phosphate (50∶50)as the mobile phase. The determination wavelength was set at 360nm with the flow rate of 1.0ml·min-1. The column temperature was set at room temperature.Result The quercetin and kaempferol showed good linearity in the range of 0.0634-1.268μg and 0.0307-0.614μg respectively. The average recovery rate of quercetin and kaempferol were 98.14%(RSD=2.15%) and 97.03%(RSD=1.08%)respectively.Conclusions The method is simple and accurate. It can be used for the content determination of quercetin and kaempferol in pingchuan kangyan capsules.

Key words:pingchuan kangyan capsules; Quercetin; Kaempferol; HPLC

(收稿日期：2015.09.28)

【中图分类号】R284.1

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)01-0021-02

作者简介：杨玲霞，副主任药师，主要从事中药化学及药品质量标准研究。E-mail:43223743@qq.com