桦树皮甲醇提取物的体外抗氧化活性研究

寇智斌　徐凤玲　何林林　夏晓慧　林奇泗

徐州医学院药学院，江苏　徐州　221004



桦树皮甲醇提取物的体外抗氧化活性研究

寇智斌徐凤玲何林林夏晓慧林奇泗*

徐州医学院药学院，江苏徐州221004

【摘要】目的：测定桦树皮甲醇提取物的体外抗氧化活性。方法：以2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和维生素C 为对照，测定桦树皮甲醇提取物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)的清除率，并用铁离子还原法(FRAP)分析了桦树皮甲醇提取物的抗氧化活性。结果：桦树皮甲醇提取物、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和维生素C对DPPH的IC50分别为0.43、0.09和0.21mg/ml，FRAP值分别为1.54±0.012、4.54±0.028.和5.76±0.041mmol/g。结论：桦树皮甲醇提取物对DPPH自由基有良好的清除作用，对铁离子的还原性较强，具有良好的抗氧化活性。

【关键词】桦树皮；抗氧化； 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼法；铁离子还原法

桦树皮为桦树科植物白桦(BetulaplatyphyllaSuk)的柔软树皮，具有清热利湿、解毒的功效[1]。以往报道鲜见桦树皮的抗氧化活性研究，因此研究桦树皮甲醇提取物的抗氧化活性，为进一步探讨桦树皮药理作用奠定基础[2-3]。天然药物的抗氧化能力评价主要采用化学测定法和细胞测定两类方法[4-5]。研究采用FRAP法和DPPH法分别对桦树皮甲醇提取物进行体外抗氧化活性检测，为桦树皮的抗氧化活性及相关应用开发提供实验基础。

1仪器与试剂

1.1仪器UV-MODEL752型可见-紫外分光光度计(上海现科分光仪器有限公司)；SB-5200D超声波清洗器； N-1100V-WD型旋转蒸发仪；四两装高速中药粉碎机；PL203电子分析天平；OSB-2100水浴锅。

1.2试剂桦树皮药材购自大兴安岭，粉碎后过二号筛干燥备用；水为双蒸水；甲醇、乙醇均为分析纯，购自科特试剂有限公司；TPTZ(2,4,6-反式2-吡啶基三嗪)、BHT(2,6-二叔丁基对甲酚)和VC等均购自上海柏卡试剂有限公司。

2实验方法

2.1桦树皮提取物的制备取干燥的桦树皮5g，用甲醇200ml于索氏提器中水浴恒温85℃提取60min，过滤，液滤浓缩干燥成浸膏。

2.2对DPPH自由基的清除作用将“2.1”项下桦树皮提取物用乙醇溶解，并配制为一系列不同浓度提取物乙醇溶液。分别平行移取3.0ml的两份。其中，一份与3.0ml 0.2mmol/L的DPPH乙醇溶液混合均匀，于暗处静置30min后取出，用紫外分光光度计于516nm处测定吸光度(A1)；另一份与3.0ml乙醇混合均匀，于暗处静置30min后取出，同法测定其吸光度(A2)。另取一份3.0ml 0.2mmol/l DPPH 溶液与3.0ml乙醇溶液同法操作，混合反应30min后测定其吸光度(A3)。每样测定3次取平均值。按公式计算清除率，以浓度(mg/ml)为横坐标，清除率为纵坐标绘制标准曲线。当清除率达到50%时的供试品浓度即为半数抑制率(IC50)。同法以VC和BHT水溶液为阳性对照。

DPPH 自由基清除率(%)=[1-(A1-A2)/A3]×100%

2.3FRAP值的测定

2.3.1TPTZ 溶液的配制取一定量的TPTZ，以40mmol/L盐酸溶解配置成10mmol/L溶液，取5ml上述溶液，加入5ml 20mmol/L三氯化铁和50ml 0.3mmol/L的醋酸缓冲液(pH3.6)混合即得。

2.3.2FeSO4标准曲线的绘制分别取不同浓度的FeSO4溶液100μl，分别加入6.0ml“2.3.1”项下配制的TPTZ溶液，于37℃水浴加热30min后，用紫外可见分光光度计于596nm处测定其吸光度。以FeSO4的质量浓度(mmol/g)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程y=0.186x+0.012(r=0.9993)。

2.3.3样品抗氧化能力的测定准确吸取“2.2”项下桦树皮乙醇溶液100μl，加入6.0ml“2.3.1”项下配制的TPTZ溶液，于37℃水浴加热30min后，用紫外可见分光光度计于596nm处测定其吸光度。将吸光度代入“2.3.2”项下的回归方程计算其FRAP值，FRAP值表示为每克该供试品消耗的Fe2+毫摩尔数(mmol/g)。

3结果与讨论

3.1对DPPH自由基的清除作用以VC和BHT为对照，分别测出桦树皮一系列不同浓度提取物吸光度A1，A2，A3，根据公式计算相应的自由基清除率，以清除率为纵坐标，以质量浓度(mg/ml)为横坐标，结果见图1。从图1可看出，随着桦树皮提取物浓度的增加，自由基清除率也相应增加，且增长的趋势由快变慢。从初期提取物浓度的增加，清除的DPPH自由基也越来越多，之后供试品溶液逐渐达到饱和状态，清除率的增长也逐渐趋于缓慢。

计算供试品及对照品的IC50，结果桦树皮甲醇提取物(以甲醇提取物的浓度计)、BHT和VC的IC50分别为0.43、0.09、0.21mg/ml。

3.2.2FRAP法测定以FeSO4为对照品确定还原能力的回归方程为y=0.186x+0.012(r=0.9993)。将桦树皮甲醇提取物(以甲醇提取物的浓度计)、BHT和VC分别测定吸光度并代入回归方程，测得三种溶液的FRAP值分别为1.54±0.012、4.54±0.028.、5.76±0.041mmol/g。

由上述实验可知，桦树皮甲醇提取物对DPPH自由基有良好的清除作用，对铁离子的还原性较强，具有良好的抗氧化活性。

参考文献

[1]李敬芬,王旭,周淑晶．桦树皮化学成分研究[J]．中药材,1998,21(2 )：83-85.

[2]Qisi Lin, Ling Zhang, Dongzhi Yang. Contribution of Phenolics and Essential Oils to the Antioxidant and Antimicrobial Properties ofDisporopsisPernyi(Hua) Diels[J]. Journal of Medicinal Food, 2014,17(6):714-722.

[3]Qisi Lin, Miao Wang, Jinghua Li, et al.Studies of Antioxidant and Antimicrobial Activities forRecineckeaCarneaandTupistraChinensisfrom the Guizhou Province[J]. Journal of Medicinal Food,2014,17(2):236-243.

[4]Aruoma, O. I.. Methodological considerations for characterizing potential antioxidant actions of bioactive components in plant foods[J]. Mutation Research, Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis, 2003, (523-524): 9-20.

[5]杨锦华,李博,籍保平. 我国常见食用和药用植物的抗氧化性研究[J].食品科学, 2006,27(6):87-91.

(收稿日期：2015.09.22)

【中图分类号】R285.1

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)01-0026-02

通信作者：林奇泗(1980-)，男，汉族，博士，副教授。 E-mail: qslin074@126.com

基金项目：徐州医学院教育教学研究立项课题(Xjy201419)。