更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠IL-6及骨密度影响的实验研究

张帆，武创新，齐帅英，曾灵，易华娅

1.贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳 550003 2.贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002

更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠IL-6及骨密度影响的实验研究

张帆1，武创新2，齐帅英2，曾灵1，易华娅2

1.贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳 550003 2.贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002

目的：观察更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠白细胞介素（IL）-6及骨密度的影响，探讨其机制。方法：80只11～12月龄自然围绝经期SD大鼠为研究对象，随机分为更年汤组、教材方组、利维爱组、模型组，每组20只；4月龄、18月龄雌性大鼠分别作为对照组，每组各20只。结果：与青年组比较，模型组、老年组、更年汤组、教材方组、利维爱组的血清IL-6含量较高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较，更年汤组、教材方组、利维爱组的血清IL-6含量较低（P＜0.05），老年组的血清IL-6含量较高（P＜0.05）。各组大鼠骨密度比较，差异有统计学意义（P＜0.05），模型组较青年组骨密度有下降（P＜0.05），模型组与更年汤组、教材方组、利维爱组比较，差异也有统计学意义（P＜0.05）。利维爱组与教材汤组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），与更年汤组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。更年汤组与教材汤比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：更年汤能降低肾阳虚型模型大鼠血清IL-6含量，提高骨密度水平。

围绝经期；肾阳虚；更年汤；白细胞介素（IL）-6；骨密度；大鼠

围绝经期是妇女绝经前后，由于肾气、天癸、冲任二脉、精血、脏腑等逐渐虚衰、将竭、虚损、不足、失于濡养，使机体阴阳平衡失调而出现的生理时期。如若妇女体质较弱，以及受多种因素的影响，可使脏腑功能失于调节，涉及心、肝、脾等多脏腑而发生病理改变。其病位在肾，治疗主要以滋阴补肾为主。这段时期发生的相关临床症状被称为绝经综合征又名绝经前后诸证，它是围绝经期妇女的常见和好发疾病。更年汤是治疗该病的复方合剂，临床疗效显著，前期初步研究证实对人体骨密度的变化有影响[1]，故进一步探讨其对血清白细胞介素-6(IL-6)和骨密度的影响。

1 材料与方法

1.1 动物分组及处理 选用雌性SD大鼠：11～12月龄80只，体重280～300 g；4月龄20只，体重180～200 g，作为青年组；18月龄20只，体重420～450 g，作为老年组。以上动物均由重庆市中药研究院动物室提供[许可证号：scxk(渝) 2012-0003]，微生物控制等级为I级。选用11～12月龄大鼠建立围绝经期大鼠模型。采用自然老化型围绝经期模型。适应性喂养1周后，选取11～12月龄大鼠逐只进行阴道脱落细胞涂片、苏木精-伊红染色(HE染色)。每天于09：30由专人取片1次，连续观察3个动情期(15天)，观察到底层细胞均在50%以上，涂片呈现为动情周期紊乱、动情间期延长为围绝经期模型成功[2]。围绝经期模型成功后，每天常规消毒后左右交替于模型大鼠臀部肌肉丰厚的部位注射氢化可的松0.5 mL/100 g(相当于氢化可的松25 mg/kg)，连续肌注9天。见动物出现持续性萎靡不振，反应迟钝、扎堆，拱背少动，毛不光洁，竖毛时则认为肾阳虚型模型造模成功。根据脏腑辨证的标准，肌注氢化可的松所造成实验动物的反应与中医肾阳虚证的临床表现相符合。提示成功造模肾阳虚围绝经期大鼠[3]。并每天同时予青年组和老年组肌注等量生理盐水；造模成功的大鼠分为更年汤组、教材方组、利维爱组及模型组4组，每组20只。给药15天，更年汤组给予更年汤溶液4 mL(含生药量1.8 g/mL，约每天18 g/kg生药量)灌胃。教材方组给予教材方溶液4 mL(含生药量1.6 g/mL，约每天16 g/kg生药量)灌胃。利维爱组给予利维爱溶液4 mL(含药量0.0294 mg/mL，约每天0.294 mg/kg药量)灌胃。生理盐水组、青年组、老年组：用生理盐水4 mL灌胃。

1.2 试剂与药品 注射用氢化可的松：规格：50 mg/支，湖北人民制药有限公司，批准文号：国药准字号：H20058653。更年汤(来源于笔者临床经验方)：熟地黄、山药、山茱萸、仙茅、淫羊藿、巴戟天、女贞子、旱莲草、桑寄生、当归、桂枝、独活、防风、细辛、炙甘草。教材方(来源于全国高等中医药院校教材：欧阳惠卿主编《中医妇科学》)：熟地黄、仙茅、淫羊藿、山药、杜仲、山茱萸、菟丝子、知母、黄柏、当归、炙甘草、肉桂。生药均由北京同仁堂大药房提供。于贵阳中医学院中心实验室煎制，药液在4℃冰箱保存备用。利维爱：规格：2.5 mg/片，南京欧加农制药有限公司生产，批准文号：国药准字号：H20051085。0.9%氯化钠注射液(生理盐水)：规格：250 mL/2.25 g，贵州省科伦药业有限公司生产，批准文号：国药准字号：H20033939。

1.3 仪器与设备 生物显微图像分析仪(5.30-06064)，摄影生物显微镜(XSZ-HS3)，电热鼓风干燥箱(GZX-9030)，4℃冰箱(Sc-Z19A)(青岛海尔集团)，AnkeTGL-16G高速离心机(北京时代北利公司)，L600台式低速自动离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)；由贵阳中医学院中心实验室提供。美国Hologic QDR2000plus型双能X线骨密度仪，贵阳医学院附属医院提供。

1.4 阴道脱落细胞图片检查 于末次给药24 h后，先用20%乌拉坦按0.5 mL/100 g给药麻醉，确认麻醉生效后，取阴道脱落细胞。一人左手背位固定大鼠，另一人右手持提前消毒好的无菌棉签，将棉签沾适量生理盐水(0.9%氯化钠注射液)，轻轻插入大鼠阴道内，在阴道侧壁上1/3处轻轻旋转2～3圈后取出，将棉签上的标本均匀地涂在标记好的载玻玻片上，放入玻片架备用。逐只进行阴道涂片检查。自然风干后，将标本放入95%乙醇固定液内固定15 min。将固定好的标本送入贵阳中医学院第二附属医院病理科检查。

1.5 IL-6检测 大鼠采用股动脉放血收集血清，血清IL-6采用酶联免疫测定法测定，由贵阳中医学院第二附属医院检验科根据试剂盒的说明书严格进行实验操作并完成。

1.6 骨密度 大鼠轻度麻醉后，固定于鼠板上，采用双能X线骨密度仪检测全身及腰椎骨密度。

1.7 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件，实验结果以()表示，各组间样本均数比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 各组大鼠血清IL-6比较 见表1。与青年组比较，模型组、老年组、更年汤组、教材方组、利维爱组的血清IL-6含量较高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较，更年汤组、教材方组、利维爱组的血清IL-6含量较低(P＜0.05)，老年组的血清IL-6含量较高(P＜0.05)。

表1 各组大鼠血清IL-6比较() pg/mL

表1 各组大鼠血清IL-6比较() pg/mL

与青年组比较，①P＜0.05；与模型组比较，②P＜0.05

组别更年汤组教材方组利维爱组模型组老年组青年组n 1 6 1 5 1 4 1 3 1 3 1 3 I L -6 7 9 . 6 2 ± 1 4 . 0 6 6①②7 9 . 7 3 ± 1 4 . 2 8 0①②7 9 . 5 7 ± 1 9 . 0 0 1①②9 8 . 7 7 ± 1 8 . 9 1 3①1 1 1 . 8 5 ± 1 3 . 6 8 6①②4 1 . 9 2 ± 1 3 . 2 3 2②

2.2 各组大鼠骨密度比较 见表2。各组大鼠骨密度比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，模型组较青年组骨密度有下降(P＜0.05)，模型组与更年汤组、教材方组、利维爱组比较，差异也有统计学意义(P＜0.05)。利维爱组与教材汤组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，与更年汤组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。更年汤组与教材汤比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表2 各组大鼠骨密度比较() g/cm2

表2 各组大鼠骨密度比较() g/cm2

与模型组比较，①P＜0.05；与利维爱组比较，②P＜0.05；与更年汤组比较，③P＜0.05

组别更年汤组教材方组利维爱组n 1 6 1 5 1 4全身0 . 1 9 8 ± 0 . 0 1 2①0 . 1 7 1 ± 0 . 0 1 3①②③0 . 1 9 9 ± 0 . 0 1 4①腰部0 . 1 9 8 ± 0 . 0 1 6①0 . 1 8 0 ± 0 . 0 2 6①②③0 . 2 0 7 ± 0 . 0 2 4①模型组老年组青年组1 3 1 3 1 3 0 . 1 4 3 ± 0 . 0 1 1 0 . 1 4 2 ± 0 . 0 1 3 0 . 1 9 3 ± 0 . 0 8 2①0 . 1 3 9 ± 0 . 0 1 0 0 . 1 4 2 ± 0 . 0 1 2 0 . 1 9 4 ± 0 . 0 1 3①

3 讨论

妇女从围绝经期开始，骨质吸收速度大于骨质的生成速度，促使骨质丢失而成骨质疏松。绝经早期的骨量丢失和关节的退行性变化均可导致妇女四肢关节不适，甚至疼痛，或腰背酸痛。更年汤组方以“补肾温阳、祛风散寒”为特点[4]，由二仙汤、二至丸和独活寄生汤化裁而成，在治疗绝经前后诸症中继承传统补肾之法，结合通络祛邪的长处，秉持因地制宜的理念。全方用药滋补肾阳，温通经脉，祛风胜湿散寒，缓解围绝经期症状，有效预防围绝经期患者骨质疏松的发生。

IL-6是骨吸收促进因子，为由活化的T细胞和成纤维细胞产生的促进原始骨髓源细胞生长和分化的淋巴因子，破骨、成骨、骨基质、单核巨噬等细胞不仅可分泌IL-6，其表面均有IL-6受体的表达，通过其受体作用于成骨细胞骨髓基质细胞，从而形成单位。它的主要作用是在骨质疏松中对破骨细胞及其前体产生数量及其功能的影响。本实验结果示，更年汤可以降低肾阳虚型围绝经期大鼠的IL-6，优于教材方组。

正常骨量的核心是保持破骨过程与成骨过程的相对平衡，如果破骨功能旺盛，成骨功能减退，这种平衡被打破，则诱发骨质疏松。目前骨质测量的“金标准”是测定骨密度，它被认为是研究骨质疏松和评价药效的有效手段[5]，骨密度改变是评价骨强度变化的指标[6]，尤冬春等[7]研究表明，补肾经典方虎潜丸和雌激素对去卵巢大鼠骨量的丢失，有一定的预防效果。对骨组织的影响方面，虎潜丸与雌激素组作用几乎一样，都能够提高去势大鼠的骨密度。独活寄生汤可缓解骨坏死，同时参与软骨下骨骨代谢[8]。本实验结果示，更年汤可以提高肾阳虚型围绝经期大鼠的骨密度，优于教材方组，与利维爱组相当。

[1]张帆，马卫东.自拟更年汤治疗肾阳虚型绝经前后诸证35例[J].辽宁中医杂志，2008，35(9)：1360.

[2]张帆，候聪.更年汤对围绝经期模型大鼠E2，LH，FSH，GnRH的干预作用研究[J].辽宁中医杂志，2012，39(9)：1850-1854.

[3]曾灵，张帆.自拟更年汤对围绝经期模型大鼠雌激素受体及细胞凋亡相关因子的影响和作用机理研究[D].贵阳：贵阳中医学院，2013：5-7.

[4]侯聪，张帆.张帆治疗肾阳虚型围绝经期综合征经验[J].辽宁中医杂志，2011，38(8)：1504-1505.

[5]遇呈祥，陈亮，宴铮剑，等.骨密度对骨质疏松性骨折的判断价值[J].中国骨质疏松杂志，2012，18(2)：127-129.

[6]胡斌丽，刘巍，黎英，等.大豆膳食对去卵巢大鼠骨密度及骨病理形态学作用的实验性研究[J].遵义医学院学报，2005，28(3)：222-224.

[7]尤冬春，谢义松，肖四旺，等.虎潜丸对去卵巢大鼠骨密度及骨组织形态学的影响[J].湖南中医药大学学报，2014，34(3)：19.

[8]陈成然.独活寄生汤现代药理及临床研究[J].现代中西医结合志，2004，13(21)：2926.

（责任编辑：骆欢欢）

R711.75

A

0256-7415（2016）02-0239-03

10.13457/j.cnki.jncm.2016.02.092

2015-06-23

国家自然科学基金项目（81160491）

张帆（1960-），女，主任医师，研究方向：中医药对围绝经期综合征的防治。