2009至2015年度辽宁省锦州市流感样病例和病原学特征分析

尤佳，单颖

(1.辽宁医学院，辽宁锦州121000;2.锦州市疾病预防控制中心，辽宁锦州121000)

2009至2015年度辽宁省锦州市流感样病例和病原学特征分析

尤佳1，2，单颖1*

(1.辽宁医学院，辽宁锦州121000;2.锦州市疾病预防控制中心，辽宁锦州121000)

了解辽宁省锦州市2009至2015年度流感流行特征及优势毒株的分布情况，为流感的预警和防治提供依据。统计锦州市2009至2015年度流感样病例(ILI)监测数据及病原学结果，分析ILI百分比(ILI%)、病毒分离率及各亚型的变化规律。共监测ILI 51 277例，ILI%为2.28%，主要集中于0～15岁年龄段，占56.72%;采集8 254份ILI咽拭子标本，其中阳性467份，病毒分离率为5.66%，其中新甲型H1N1型192份、季节性H3型186份、B型Yamagata系37份、B型Victoria系52份。2009年和2013年以新甲型H1N1 (55.73%，83.33%)为主，2011年以BY(74.42%)为主，其他年份以季节性H3型为流感优势毒株，BV在人群中流行趋势减弱，新甲型H1N1、BY在人群中偶有检出。2010至2015年各月份ILI%均显著低于2009年，提示2009年后流感病毒活动相对稳定;ILI%与病毒分离率呈正相关(rs=0.347;P=0.039)，ILI%的变化能够较好地反映当地流感病毒的活动情况。新甲型H1N1型、季节性H3型、B型混合存在，季节性H1型消失。

流感;流感样病例;流感病毒分离率;监测

流行性感冒(influenza)简称流感，是流感病毒引起的急性呼吸道疾病，具有传染性强、传播速度快等特点，是世界上第一个实行全球监控的传染病［1］。流感病毒的流行主要取决于毒株抗原性及类型的变异、人群的免疫程度、环境及社会因素等［2］。辽宁省锦州市在2005年开展了流感监测工作，2009年纳入国家流感监测网，现对2009至2015年度锦州市流感样病例(influenza-like illness，ILI)时间分布和人群分布的监测，分析锦州市流感样病例的变化特征，为流感的防控提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 资料来源

数据来源于辽宁省锦州市疾病预防控制中心和锦州市中心医院、辽宁医学院附属第一医院的流感监测工作。由“中国疾病预防控制信息系统”中的“中国流感监测信息系统”直接导出资料，含锦州市2009至2015年度流感流行病学和病原学数据。哨点医院上报ILI 51 277例，门诊和急诊就诊总数2 248 991例，实验室分离467株流感病毒。

1.2 监测内容与方法

1.2.1 器材和试剂CO2培养箱，倒置显微镜，H1、H3、B型流感病毒的抗血清，H1、H3、B型流感病毒的标准抗原，0.25%EDTA-胰酶，含10%胎牛血清DMEM细胞培养液。

1.2.2 ILI监测哨点医院的发热门诊、内科诊室和感染性疾病科开展监测工作。按照ILI定义:体温≥38℃，伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其他实验室确定诊断依据的急性呼吸道感染病例。每天按科室登记各年龄组的ILI数和病例就诊总数，根据各诊室的登记表录入“中国流感监测信息系统”。

1.2.3 标本采集两家哨点医院在每年4至9月采集5～15份/月ILI病例标本，10月至次年3月采集10～15份/周ILI病例标本。ILI病例标本采集呼吸道标本(多为咽拭子)。采集时，医生左手持压舌板压病人舌头，右手用拭子擦咽扁桃体及咽后壁，后放于采样液中，反复挤压拭子头部，折断拭子尾部。标本采集后在4℃条件下48 h内送市CDC流感网络实验室。

1.2.4 病毒的分离实验室收到样品后分装成3份，用于MDCK细胞接种、鸡胚接种、－80℃保存待复核。用犬肾传代细胞(MDCK)进行病毒分离:用移液管吸去细胞培养瓶中Hank’s液。吸疑似标本1 mL于细胞培养瓶中。摇动数次后放于37℃5%CO2培养箱中吸附1～2 h。倒出液体，用6 mL Hank’s液清洗细胞2遍，再向细胞培养瓶中加入6 mL生长液。置于33～35℃培养箱培养。细胞出现75%～100%病变时收获细胞培养物。再进行血凝试验方法(HA):对于HA≥8的细胞培养液，采用血凝抑制试验(HI)对病毒进行分型。

1.2.5 病毒的鉴定将收获的细胞培养物进行血凝试验(HA)。将微量板横向放置:垂直A1～H1为第1列，平行A1～A12为A行。8道加样器加样，吸取PBS 50 μL加入微量板第2列，依次加入至最后一列。待检病毒液100 μL加入第1列对应的孔中。用8道加样器从第1列取50 μL病毒液，加到第二列相应各孔，混匀。依此倍比稀释法。最后加50 μL 1%的红细胞悬液于微量板中，混合。室温30～60 min，观察红细胞凝集现象。以出现完全凝集的最高稀释度为终点，其倒数即为病毒HA滴度。对于HA≥8的细胞培养液，采用血凝抑制试验(HI)对病毒进行分型。红细胞凝集素抗原与特异性抗体(抗A(H1N1)亚型、抗A(H3N2)亚型、抗B Yamagata、抗B Victoria)结合抑制病毒引起的红细胞凝集。HI效价是指抑制红细胞凝集的最高稀释度倒数。

1.2.6 数据统计Excel 2003和SPSS 13.0软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 流感监测概况

2009至2015年两家哨点医院共监测ILI51 277例，占门急诊就诊总数比例(ILI%)2.28%。2011至2015年度ILI%变化趋势较为平稳。2009至2015年度ILI%差异无统计学意义(χ2=3.079，P=0.799)，见表1。

2.2 ILI年龄构成特征

2009年0～14岁年龄组ILI比例为34.10%，而其他各年度均在60.00%左右;15～24岁年龄组比例为40.87%，是2009年ILI的主要构成人群，而其他各年度均在8.00%左右;2009～2015年度25岁以上人群构成比例差异不大。见表2。

表1 2009至2015年度锦州市ILI发病数及ILI%情况Table 1The ILI incidence and case ILI%in Jinzhou from 2009 to 2015

表2 2009至2015年度锦州市ILI年龄分布Table 2The age distribution of case ILI%in Jinzhou from 2009 to 2015

2.3 流感季节性分布特征

对2009至2015年度按周ILI%差异进行统计，差异具有统计学意义(χ2=234.32，P =0.000)。2009年41至48周ILI%较高，其中第42周的ILI%为9.3%;2011至2015年度各月份ILI%较比2010年呈下降趋势，提示2011至2015年度的流感病毒活动较2010年有所减弱。见图1。

图1 2009至2015年度锦州市ILI%周次分布Fig.1The Weekly distribution of ILI%in Jinzhou from 2009 to 2015

2.4 实验室病原学检测情况

2009至2015年度锦州市流感监测网络实验室共检测ILI标本8 254份，分离出流感病毒467株，阳性率为5.66%，其中新甲型H1N1型192份，占41.11%;季节性H3型186份，占39.83%; B型Yamagata系37份，占7.92%;B型Victoria系52份，占11.13%。2009年和2013年以新甲型H1N1(55.73%，83.33%)为主，2011年以BY (74.42%)为主，其他年份以季节性H3型为流感优势毒株，BV在人群中流行逐渐减弱，新甲型H1N1、BY在人群中偶可检出。见表3、图2、图3。流感病毒分离阳性率峰值出现在每年11月至次年2月份，与ILI%高峰期相符合，两者呈正相关(rs=0.347;P=0.039)。

表3 2009至2015年度锦州市流感病原学监测结果及分型Table 3The pathogenic results and classification of influenza monitoring in Jinzhou from 2009 to 2015

图2 2009至2015年度各年锦州市流感病原学检测结果Fig.2The pathogenic results of influenza monitoring in Jinzhou from 2009 to 2015

图3 2009至2015年度各月锦州市流感病原学检测结果Fig.3The pathogenic results of influenza monitoring each month in Jinzhou from 2009 to 2015

3 讨论

国内外研究发现，症状监测依据特定临床症候群进行非特异监测，此监测方式不依赖特定的诊断，具有敏感度高和实时性强等特点。目前，应用最为广泛的症状监测方法是流感样病例监测［3］。Vanhems等［4］研究表明流感样病例监测较实验室监测结果，可提早2周预测出流感的流行。

本研究结果显示，锦州市2009和2010年度ILI%较高，2011至2015年度ILI%变化趋势较为平稳。2009年ILI%的波动范围较大，为1.0%～9.3%。从数据中分析可知，2009年10月流感在锦州市处于强势活动期，ILI%超过历年同期水平。2010年ILI数较多主要是受到2009年新甲型H1N1流行的余波影响。2011至2015年ILI%在0.8%～4.3%范围内波动，且各周ILI%较2010年呈下降趋势，提示2011至2015年度的流感病毒活动较2010年有所减弱。2009年流感病例主要集中于15～24岁组，与2011至2015年度相比年龄构成发生了变化，其以0～15岁人群为(56.72%)。此结果与李静等［5］、苏杨等［6］报告数据基本相同。这与儿童年龄小，机体免疫力较差，多为在校学生或托幼机构儿童，容易发生交叉感染有关。结果提示15岁以下儿童是流感预防的主要人群，应对其进行重点监测。史恒越［7］对辽宁省阜新市2010至2014年度流行性感冒监测结果显示，0～4岁幼儿是流感的高发人群，其次是15岁以下的儿童。

每年的ILI季节性变化规律除2009年第42周出现高峰外，其他各年变化规律基本一致，为第52周至次年的1～6周ILI%较高，提示流感主要发生于冬春季节，这与锦州市位于中国的北方，冬春季气候寒冷，流感病毒可在环境中存活较长时间有关。我市ILI%相对较低的原因，可能是两家监测哨点医院儿科监测科室设置相对较少，而儿科诊室ILI%明显高于内科诊室［8］。

从流感病毒病原学监测情况分析，7个监测年度，新甲型H1N1、季节性H3N2和B型流感病毒在锦州市先后引起不同程度流行，呈现交替或混合流行的态势。2009年和2013年以新甲型H1N1(55.73%，83.33%)为主，且2009年的毒株分离率最高(15.87%)，由新甲型H1N1病毒亚型引起，人群无免疫力，导致传染性强，传播迅速，极易发生大范围流行［9］。2011年以BY(74.42%)为主，究其原因可能是自2010年起，WHO将新甲型H1N1流感毒株作为推荐株应用于季节性流感疫苗的生产，故2011年一部分人群对其已经有了免疫力。其他年份以季节性H3型为流感优势毒株，BV在人群当中流行逐渐减弱，新甲型H1N1、BY在人群中偶可检出。此结果与王宇报道的基本一致［10］。由此可见，锦州市甲流疫情结束后，2010年甲型流感病毒主要以新甲型H1N1与季节性H3N2两种优势株存在，后转为BY为优势毒株，之后各年以新甲型H1N1、季节性H3N2及B型交替流行，B型流行趋势较弱。从流感毒株各年的变化趋势分析，每年春季流感的流行株将成为当年冬季流感流行的优势株，据此可初步预测2016年度流感流行优势株为BV亚型。不同年份优势毒株有所不同，这与流感病毒的亚型复杂，品种繁多，存在不同的优势毒株，受环境因素的影响，病毒优势毒株随着年份、季节的不同而不同有关［11］。司虹等［12］监测报告显示2010至2014年度大连市流感的流行趋势是季节性H3N2、B型、新甲型H1N1混合存在，主要发生在冬春两季。而葛爱华等［13］在分析江苏省2009至2012年流感情况时发现毒株以B型和季节性H3N2交替出现为主，偶有新甲型H1N1散发，冬季1至2月和夏季8月是两个小流行高峰。郎中凯等［14］报道重庆市2010至2015年以新甲型H1N1、B型、季节性H3N2型混合流行，出现冬夏季流行高峰。由此可见，在优势毒株的分布情况方面，北方与南方结果相一致;而流行高峰期南方与北方地区略有不同，推其原因可能是南北气候的差异所致。本研究病原学结果与ILI%呈正相关。欧才好等［15］监测结果显示流感样病例的百分比(ILI%)与H1N1流感病毒存在相关性，这说明可以用流感样病例监测数据来预测流感的流行趋势。

综上所述，ILI和病原学监测是防控流感的有效方法。ILI是呼吸道疾病流行的预警信号，病原学监测为及早发现变异株、推荐疫苗组分、确定流行株及疫情预测、预警提供基础。

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Analysis of Influenza-Like Cases＆the Aetiology Features in Jinzhou，Liaoning 2009－2015

YOU Jia1，2，SHAN Ying1
(1.Liaoning Medical Coll.，Jinzhou 121001;2.Jinzhou Ctr.for Disease Ctrl.＆Prevent＇n，Jinzhou 121001)

In order to understand the epidemiological features of influenza and the distribution of the dominant strain of influenza in Jinzhou，so as to provide scientific evidence for the early warning and control influenza epidemic effectively.The analysis was conducted on the surveillance and aetiological detection data of influenza like illness(ILI)，monitoring proportion of ILI cases in outpatient visits，the rate of virus isolation and variation of influenza virus subtypes.A total of 51 277 ILI cases were reported in Jinzhou from 2009 through 2015.The ILI cases accounted for 2.28%of the total outpatient visits，mainly in the group of 0 to 15 ages，accounting for 56.72%.Among the 8 254 swabs detected during this period，467 were positive for influenza viruses，including 192 cases of influenza A (H1N1)，186 cases of seasonal H3N2 subtype，37 cases of type B influenza(Yamagata)，and 52 cases of type B influenza(Victoria).The average rate of virus isolation was 5.66%.Pandemic strain of influenza was influenza A (H1N1)in 2009 and 2013.Type B Yamagata lineage was prevalent in 2011，accounting for 74.42%.In other years seasonal H3N2 was the predominant strain，showing a downward trend of type B Victoria lineage，and influenza A (H1N1)，type B Yamagata lineage can be detected occasionally.The monthly ILI proportion from 2010 to 2015 was lower than that in 2009，suggesting that the influenza activity was relatively stable after 2009.The ILI proportion waspositively correlated with the virus isolation rate(rs=0.347;P=0.039).ILI proportion can truly reflect the degree of local influenza activity.The influenza A(H1N1)，seasonal H3N2 subtype and type B influenza were present mixed，and seasonal H1N1 subtype disappeared.

influenza;influenza-like cases;influenza virus isolation rate;monitor

Q939.93;R511.7

A

1005－7021(2016)04－0053－05

10.3969/j.issn.1005－7021.2016.04.009

辽宁省科技厅联合基金项目(2015020354)

尤佳女，主管检验师，硕士。研究方向为流感病原学检测。Tel:0416-2332132，E-mail:250050302@qq.com

*通讯作者。女，教授，博士，硕士生导师。研究方向为抗感染免疫。E-mail:1822518917@qq.com

2016-03-04;

2016-05-02