复方川紫方提取工艺研究

2016-02-10曹廷生胡海军庄让笑潘旭旺陈怡曹丽萍

浙江中西医结合杂志 2016年8期

曹廷生胡海军庄让笑潘旭旺陈怡曹丽萍

复方川紫方提取工艺研究

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复方川紫方；正交设计；提取工艺；阿魏酸；紫草素

复方川紫方是本院经验方，由川芎、紫草、羌活等十余味药组成，功能抗菌消炎、通络止痛、行气活血散瘀，临床以油剂外敷，用于治疗肩周炎、网球肘等，疗效较好。其采用油炸古法制作，在有效成分提取、用药安全等方面存在一定不足。为进一步提高产品质量，保证临床应用安全有效、稳定可控，我们采用正交设计对该复方的提取工艺进行考察，优选最佳提取条件，为产品的生产工艺改进提供依据。

1 材料

Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司）；UV-2550型紫外-可见分光光度计（日本SHIMADZU公司）；FA2004型分析天平（上海精科天平）；98-1-c型数字控温电热套（天津市泰斯特仪器有限公司）；RE-2000A旋转蒸发器（上海亚龙生化仪器厂）。实验所用川芎（Chuanxiong Rhizoma，141109）、紫草（Arnebiae Radix，141120）、羌活（Notoptergh Rhizoma Et Radix，141222）等药材均购自杭州华东中药饮片有限公司，经杭州市西溪医院潘旭旺主管中药师鉴定均为《中国药典》2010年版收载品种；对照品阿魏酸（批号110773-201313）由中国食品药品检定研究院提供，左旋紫草素（批号110769-200405）由中国药品生物制品检定所提供；甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 测定方法建立

2.1.1 HPLC法测定阿魏酸（1）色谱条件：ODSHypersil色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相3%冰醋酸：乙腈：甲醇（85：10：5），流速1.2mL/min，柱温20℃，检测波长320nm，进样量20μL。（2）对照品溶液的制备：阿魏酸对照品经五氧化二磷真空干燥12h以上。精密称取阿魏酸对照品0.00199g，至25mL量瓶中，用流动相溶解并定容，摇匀，即得。（3）供试样品溶液制备：量取提取物浓缩液25mL，用乙醚1：1萃取3次，合并萃取液，回收乙醚，残渣加流动相2mL溶解，18 000r/min，离心10min，取上清液1mL用流动相稀释，并定容至10mL，摇匀，即得。（4）线性关系考察：精密吸取对照品溶液1、2、4、6mL至10mL容量瓶并定容，摇匀，分别进样20μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积（A）对浓度（C，μg/mL）进行线性回归，得回归方程Y=52.31X-3.766.R2=1，线性范围7.96～79.6μg/mL。（5）精密度和稳定性考察：精密吸取浓度分别为7.96、31.84、79.6μg/mL的对照品溶液，连续进样测定5次，考察日内精密度，峰面积的RSD均＜1.0%；冷藏，隔日连续测定5次，考察日间精密度，峰面积的RSD均＜1.0%；将样品置于室温条件下，隔日连续测定5次，考察稳定性，峰面积的RSD均＜0.50%，表明该法精密度和稳定性良好。

2.1.2 UV测定紫草素（1）对照品溶液的配制：精密称取左旋紫草素对照品0.00261mg，置50mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1、2、4、6、8、10mL至10mL量瓶中，分别加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（2）供试品溶液的配制：量取提取物浓缩液25mL，用石油醚1：1萃取3次，合并萃取液，回收石油醚，残渣加无水乙醇4mL溶解，稀释至一定浓度，作为供试品。（3）线性关系考察：UV于516nm检测各浓度对照品吸光度，以吸光度（A）对浓度（C，μg/mL）进行线性回归，得回归方程Y=0.020X-0.006，R2=0.999，线性范围5.22～41.76μg/ mL。

2.2 复方川紫方回流提取方法按处方比例称取药材，于宽口圆底烧瓶中，加入一定浓度乙醇为提取溶媒，密闭浸泡0.5h，至电热套中回流提取至规定时间。

2.3 正交实验优化工艺根据文献[1-2]，确定提取溶剂为乙醇，浸泡时间为0.5h，确定以下4个因素作为考察对象，即乙醇浓度（A）、料液比（B）、提取时间（C）、提取温度（D），每个因素3个水平，根据正交设计原理，取L9（34）正交试验表进行试验，见表1。以紫草素（S1）和阿魏酸含量（S2）加权求和值S（S=S1+ S2）进行综合评分，优选最佳工艺条件，见表2。影响含量的主次顺序分别为乙醇浓度（A）、料液比（B）、提取温度（D）、提取时间（C），最佳制备工艺为A3B3C1D2，即90%乙醇，料液比1：12，提取时间1h，提取温度60℃。