HPLC法同时测定马来酸依那普利与尼群地平的含量

王　星，王　琳，张廷剑，孟繁浩*

HPLC法同时测定马来酸依那普利与尼群地平的含量

王星a，王琳b，张廷剑b，孟繁浩b*

[摘要]目的建立以高效液相色谱法测定复方尼群地平片中马来酸依那普利与尼群地平含量的方法。方法色谱柱为Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-磷酸盐缓冲液(0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调pH值为3.0)(65∶35)为流动相，流速0.8 mL/min，检测波长为215 nm，柱温50 ℃，进样量为20 μL。结果马来酸依那普利在10.16~193.04 mg/L浓度范围内线性关系良好(R2=0.999 7)，平均加样回收率为100.28%；尼群地平在20.96~338.24 mg/L浓度范围内线性关系良好(R2=0.999 8)，平均加样回收率为99.54%。结论该方法可用于同时测定复方尼群地平片中马来酸依那普利、尼群地平的含量。

[关键词]高效液相色谱法；复方尼群地平片；马来酸依那普利；尼群地平；含量

[Abstract]ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of enalapril maleate and nitrendipine in compound nitrendipine tablet.MethodsSamples were determined on a Kromasil C18column (4.6 mm×250 mm,5 μm),the mobile phase consisted of methanol-phosphate buffer (0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution adjusted with phosphoric acid to a pH of 3.0) (65∶35) with flow rate at 0.8 mL/min,the UV detection wavelength was 215 nm,column temperature was 50 ℃,and sample size was 20 μL.ResultsThe linear range of enalapril maleate was 10.16~193.04 mg/L (R2=0.999 7),the average recovery rate was 100.28%;the linear range of nitrendipine was 20.96~338.24 mg/L (R2=0.999 8),the average recovery rate was 99.54%.ConclusionThe method is accurate for the simultaneous determination of enalapril maleate and nitrendipine in the compound nitrendipine tablet.

收稿日期：2015-04-18

通信作者*

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201512023

Content determination of enalapril maleate and nitrendipine by HPLCWANG Xinga,WANG Linb,ZHANG Ting-jianb,MENG Fan-haob*(a.Department of Central Laboratory,b.Department of Medicinal Chemistry,School of Pharmacy,China Medical University,Shenyang 110122,China)

Key words：HPLC;Compound nitrendipine tablets;Enalapril maleate;Nitrendipine;Content

0引言

复方尼群地平片为自制制剂，西班牙已于2002年批准Grupo Vita公司的复方产品ENEAS (Enalapril maleate/nitrendipine)上市，用于对单独用依那普利或尼群地平无应答的原发性高血压患者的治疗，提高患者顺应性，降低不良反应。国内合用马来酸依那普利和尼群地平的临床报道也较多[1-4]。马来酸依那普利(Enalapril maleate)对轻中度高血压效果较好，对于高血压患者具有良好的靶器官保护和心血管终点事件预防作用[5-7]。尼群地平(Nitrendipine)对心血管系统具有保护效应，脑卒中发生率较对照组降低40%，同时，心血管事件、癌症、出血等不良反应没有明显增加[8]。中国药典对处方中的单一成分制剂含量测定的方法均采用HPLC法[9]，国内文献报道多为HPLC法测定单一成分制剂或与其他成分组成制剂的含量[10-16]。为提高其质量标准，有效控制制剂质量，本文采用HPLC法对复方尼群地平片中马来酸依那普利和尼群地平进行含量测定，结果较为理想。

1仪器与试药

1.1仪器Agilent 1200系列高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)，Kromasil C18色谱柱(北京迪马科技公司)，CP214电子分析天平[奥豪斯国际贸易(上海)有限公司]，pH计(FE20K，梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2试药复方尼群地平片(批号：131001、131002、131003；规格：30 mg)，自制。马来酸依那普利对照品(批号：100705-201301)，尼群地平对照品(批号：100585-201301)，均为中国药品生物制品检定所提供。甲醇(色谱纯)、磷酸(分析纯)、磷酸二氢钾(分析纯)，均由山东禹王实业总公司化工厂提供。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液(0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调pH值为3.0)(65∶35)，检测波长：215 nm，流速：0.8 mL/min，柱温：50 ℃，进样量：20 μL。理论板数按尼群地平峰计算不低于3 000。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备避光操作。分别精密称取马来酸依那普利、尼群地平对照品适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，再精密量取适量加流动相定量制成每1 mL中约含0.2 mg马来酸依那普利和0.1 mg尼群地平。

2.2.2供试品溶液的制备避光操作。取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于马来酸依那普利100 mg，尼群地平50 mg)置50 mL量瓶中，加甲醇超声使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，加流动相溶解稀释至10 mL，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备按处方比例及制备工艺称取除主药以外的所有辅料，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.3专属性试验精密移取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μL，分别测定，结果阴性对照溶液在主成分峰处未见干扰。对照品、样品和阴性对照色谱图见图1。

2.4线性关系考察分别精密称取马来酸依那普利对照品与尼群地平对照品适量，加甲醇溶解并稀释至不同刻度，得峰面积(Y)与浓度(C)的回归方程：马来酸依那普利Y=25.673 C+120.75 (R2=0.999 7)、尼群地平Y=53.114 C+176.35 (R2=0.999 8)。线性回归方程表明，马来酸依那普利在20.16~383.04 mg/L浓度范围内、尼群地平在12.44~236.36 mg/L浓度范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.5精密度试验取马来酸依那普利与尼群地平对照溶液，按上述色谱条件，以20 μL进样，记录峰面积，连续进样5次，结果表明，马来酸依那普利的RSD为1.33%，尼群地平的RSD为1.00% (n=5)。

2.6重复性试验取样品(批号：131001)，制备6份供试品溶液，按上述色谱条件，以20 μL进样，记录峰面积，每个样品进样2次，结果表明，马来酸依那普利的RSD为1.15%，尼群地平的RSD为1.19% (n=6)。

图1　HPLC图谱

2.尼群地平

2.7稳定性试验取供试品溶液，按上述色谱条件，以20 μL进样，记录峰面积，每隔1 h进样1次，结果表明，供试品溶液在8 h内稳定(马来酸依那普利的RSD为0.50%，尼群地平的RSD为0.52%)。

2.8加样回收率试验按处方比例称取辅料数份，分别加入处方量80%、100%、120%的马来酸依那普利与尼群地平各3份，按上述供试品溶液制备方法制备并测定，结果见表1。

2.9样品测定分别取对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件，分别以20 μL进样，记录峰面积，以外标法计算供试品中马来酸依那普利和尼群地平的含量。结果见表2。

3讨论

3.1本文首次采用同一液相条件同时测定马来酸依那普利和尼群地平的含量，为体内药代动力学研究提供依据。

3.2在200~400 nm处用UV-2100紫外分光光度计扫描，马来酸依那普利和尼群地平在215 nm处有共同吸收峰，因此选择此波长作为检测波长。

表1　加样回收率试验结果

表2　样品含量测定结果(n=3)

3.3马来酸依那普利显酸性，用弱酸性流动相可抑制其电离，使峰型稳定，分离度好。本文对多组流动相系统进行了试验比较，最后选用甲醇-磷酸盐缓冲液(65∶35)为流动相；对多个pH值进行了试验比较，发现pH值为3.0时峰型较好且分离度良好。

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作者单位：荆州市第一人民医院a.药学部，b.神经外科，湖北 荆州434000