金鸡颗粒中药材的鉴别与盐酸小檗碱的测定

张翠兰马 荣

（1 徐州市铜山区中医院药剂科，江苏 徐州 221116；2 江苏颐海药业化验室，江苏 徐州 221116）



金鸡颗粒中药材的鉴别与盐酸小檗碱的测定

张翠兰1马 荣2

（1 徐州市铜山区中医院药剂科，江苏 徐州 221116；2 江苏颐海药业化验室，江苏 徐州 221116）

【摘要】目的 探讨金鸡颗粒中药材的鉴别与盐酸小檗碱的测定。方法 制备金鸡颗粒处方，选择TLC法对处方中功劳木、金樱根以及穿心莲进行鉴别，选择HPLC方法对功劳木中含有的盐酸小檗碱进行测定，对测定结果以及鉴别效果进行分析。结果 金鸡颗粒的薄层鉴别方法具有良好的分离度，且专属性比较强，简单方便；0.0197～0.1471 μg（r=0.9998）是盐酸小檗碱的线性范围，计算平均回收率为99.7%，RSD=0.9%。结论 所选择的方法适用于金鸡颗粒的质量控制，可广泛推广使用。

【关键词】盐酸小檗碱；薄层鉴别；金鸡颗粒

金鸡颗粒主要是由功劳木、鸡血藤、金樱根、穿心莲、两面针等中药材中提取出来的，具有健脾利湿、活血通络、清热解毒的重要功效，针对湿热下注导致的子宫内膜炎、盆腔炎、附件炎等具有良好的治疗效果［1］。为成品质量有所保障，本文采用HPLC法对功劳木中的盐酸小檗碱进行测定，同时采用TLC法对穿心莲、金樱根、功劳木等中药材进行鉴别。上述方法重复使用性较强，可充分保证产品质量控制［2］。

1 实验操作部分

1.1 仪器准备和试药方法：采用Waters1515型高效液相色谱仪系统以及北京普析通用仪器有限责任公司生产的TU-1901双波束紫外分光光度仪作为本次实验的设备［3］。盐酸小檗碱对照品和穿心莲、金樱根、功劳木等有关对照药材；分析纯作为试剂；水选择重蒸馏水；乙晴作为色谱纯。

1.2 金鸡颗粒的基础方以及制备的基本方法。金鸡颗粒基础方：鸡血藤1000 g，穿心莲150 g，蔗糖粉2000 g，功劳木525 g，千斤拔525 g，两面针200 g，金樱根525 g。上述药材称好之后，以水煎煮4 h左右，待合并滤液之后，将其浓缩至适量，向其中加乙醇，直至含醇量高达60%后方可停止，搅拌均匀，安静放置24 h后，进行再次过滤，将乙醇回收，并将其浓缩至温度在40～50 ℃的相对密度为1.3～1.4的浸膏，加入2000 g蔗糖进行充分混合，利用制粒机将其制作成只能通过1-2号的筛网颗粒状，并将其放置在温度在60 ℃以下的烘箱之中进行干燥，采用1-3号对整粒进行筛选，待分装结束后即可得到实验中需要的样品。

1.3 薄层鉴别情况

1.3.1 鉴别穿心莲：将作为对照组药材的穿心莲取1 g进行实验，在其中加入15 mL甲醇，对其进行回流加热15 min左右，待滤液完全蒸干之后，取出残渣并在其中加入1 mL甲醇，确保其充分溶解之后，将得到的溶液直接作为对照药材溶液。参照《中国药典》附录ⅥB薄层色谱法实验［4］，将10 μL供试品溶液取出之后，直接将其点在规定的硅胶G薄层板上面，展开剂采用氯访-甲醇，逐渐展开、取出并充分晾干之后，喷上2%二硝基苯甲酸乙醇溶液同时混合5%氢氧化钠乙醇溶液。在供品色谱中，在和对照药材色谱与之相应的位置之上，会呈现紫红色斑点。

1.3.2 鉴别功劳木：选择一定量的金鸡颗粒研制成细末状，取出3 g细末并与30 mL甲醇充分融合，对其进行15 min加热回流，待过滤之后将滤液完全蒸干，选择其中的20 mL残渣和浓度为2%的盐酸溶液进行充分融合，进而进行过滤。采用分液漏斗作为滤液的装置，使用浓氨试液将其调制成pH=10，同样经过氯仿加以提取，待其完全与氯仿融合之后将溶液取出，进行蒸干，取其残渣和1 mL甲醛融合，以将其作为实验需要的供试品溶液。另外还需要取0.4 g功劳木当做对照药材，加入甲醇15 mL，加热回流15 min，进而过滤，将滤液蒸干之后取残渣加入1 mL甲醛溶解，以此作为对照药材溶液。取盐酸小檗碱对照品，在其中加入甲醛之后使之成为实验需要的对照品溶液。严格按照《中国药典》附录ⅥB薄层色谱法实验中的相关要求选取其中的10 μL作为供试品溶液之一，直接将其点在规定的硅胶G薄层板上面，展开剂采用丁醇-冰醋酸水，逐渐展开、取出并充分晾干之后，将其直接放置在紫外光灯下，然后进行检视。通过和试品色谱进行对比分析，并在于该试品色谱中与之相对应的位置上面，会体现出黄色的荧光斑点。

1.3.3 鉴别金樱根：取适量金鸡颗粒，将其研成细末状，取3 g融合30 mL甲醇，利用超声进行处理，并将得到的滤液进行蒸干，取适量残渣后和20 mL氢氧化钠溶液进行融合，通过微热的方式使之完全溶解，在其中放入乙醚10 mL，振摇之后进行提取，然后放弃乙醚提取液，继续采用乙酸乙酯10 mL再次进行振药提取，进而提取1 mL醋酸乙酯浓缩液，并将其作为实验需要的供试品溶液。另外要提取对照药材2.5 g，制作方法和上述方法相一致。参照《中国药典》附录ⅥB薄层色谱法实验，吸取10 μL供试品溶液，将其分别点在同一硅胶G薄层板之上，采用氯仿-甲醇作为展开剂，依次展开、取出、晾干之后，喷上10%硫酸乙醇溶液，将其放置在105 ℃加热，直至斑点清楚显色为止。在试品色谱中，在和对照药材色谱与之相应的位置之上，会呈现紫红色斑点。

1.4 测定盐酸小檗碱

1.4.1 确定色谱需要条件：色谱柱是Diamonsil C18（4.6 mm×150 mm， 5 μm），流动相设置为0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈（70∶30），检测波长为345 nm；流速1 mL/min，柱温为30 ℃［4］。

1.4.2 制备溶液：精密称取适量盐酸小檗碱对照品，加入乙醇制成10 μg/mL对照溶液。采用相同工艺将其制备成金鸡颗粒（不含功劳木），以同样的方法制成阴性对照品溶液。取适量金鸡颗粒，将其研成细粉，过100目筛，以精密称取的方式称取0.2 g，放置在25 mL量瓶中，加入20 mL盐酸-甲醇溶液，采用超声处理20 min，放冷之后加入甲醇定容，经过滤之后取续滤液进行离心，进而得到供试品溶液。

1.4.3 方法专属性分析：严格按照上述色谱条件，分别对阴性对照、盐酸小檗碱以及供试品对照溶液进行测定。若看见色谱基线未发生任何异常，分离度基本保持良好，则充分表示阴性对照情况并没有受到严重干扰。

1.4.4 对线性关系进行分析：准确量取盐酸小檗碱，将剂量为10 μg/mL甲醇融入制成溶液进行对照，之后针对对照品溶液进行精密吸入，控制剂量为2 μL、8 μL、12 μL以及15 μL。对上述色谱条件进行详细研究，针对峰面积进行准确测定。最终将得出的峰面积当作纵坐标，选择μg当作横坐标，实施线性回归分析，最终回归方程为：Y=7.117 ×106X-1.483×104（r=0.9998），最终结果表明，盐酸小檗碱线性范围为0.0197～0.1471 μg（r=0.9998），同峰面积之间表现出显著的线性关系。

1.4.5 对重复性实验情况进行分析：选择供试品共计6份，对其进行精密称定之后，通过上述方法测定其中含有的盐酸小檗碱数量，其平均值界定为1.4.1 mg/g，RSD=1.8%，这足以说明本实验中采用的分析方法精密度符合良好标准，无异常。

1.4.6 稳定性实验情况：精密吸取10 μL制定好的供试品溶液，在0、2、4、8、16 h时进样，对盐酸小檗碱峰的面积进行测定，RSD=1.6%，这充分表明供试品溶液在16 h内至少比较稳定。

2 结 果

金鸡颗粒的薄层鉴别方法具有良好的分离度，且专属性比较强，简单方便；0.0197～0.1471 μg（r=0.9998）是盐酸小檗碱的线性范围，计算平均回收率为99.7%，RSD=0.9%。

3 讨 论

金鸡颗粒原标准中已经相应的记录了有关功劳木、穿心莲等TLC鉴别以及与之相关的理化鉴别，但对含量控制却并没有多少报道。若想使成品质量得到保障并充分保证其临床使用性能的安全可靠性，就需要改变原质量标准。本文不仅对功劳木、穿心莲进行鉴别，同时还增加了对金樱根的TLC鉴别，将盐酸小檗碱作为其中的重要指标之一，使用HPLC法对其含量进行测定，所采用的方法具有良好的重复性，可将其推广为金鸡颗粒质量控制的有效方法［5-6］。

参考文献

［1］ 谢纪珍，梁瑞雪.薄层扫描法测定脑通灵颗粒中盐酸小檗碱的含量［J］.齐鲁药事，2008，38（7）:407-409.

［2］ 王静，袁子民，张振秋.黄连、吴茱萸药对中盐酸小檗碱在大鼠体内的药代动力学研究［J］.药物分析杂志，2009，14（5）:755-759.

［3］ 郭时金，王艳萍，周春凤，等.HPLC法测定清瘟败毒颗粒中盐酸小檗碱的含量研究［J］.家畜生态学报，2013，32（4）:37-40.

［4］ 庞宇，梁健钦.HPLC法同时测定一清颗粒中盐酸小檗碱、盐酸药根碱和盐酸巴马汀的含量［J］.中药材，2012，11（8）:1868-1871.

［5］ 郭俊浩，杜光，王萍韬等.高效液相色谱法测定足宁颗粒中盐酸小檗碱含量［J］.医药导报，2012，31（8）:1057-1058.

［6］ 余志刚，程培秀.金鸡颗粒中药材的鉴别与盐酸小檗碱的测定［J］.华西药学杂志，2010，25（1）:90-92.

中图分类号：R282.710.3

文献标识码：B

文章编号：1671-8194（2016）03-0045-02