HPLC法测定忍冬藤颗粒中牛蒡苷的含量*

2016-01-27徐世红李季文

中医研究 2016年4期

关键词：药效学含量测定

郭　敏，徐世红，李季文，姜　华

(甘肃省中医院，甘肃兰州 730050)

·药学研究·

HPLC法测定忍冬藤颗粒中牛蒡苷的含量*

郭敏，徐世红，李季文，姜华

(甘肃省中医院，甘肃兰州 730050)

摘要目的：建立忍冬藤颗粒中牛蒡苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-水(25∶75)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长280 nm，柱温30 ℃进行检测。结果：牛蒡苷的线性范围为15.00～300.00 mg/L (r=0.992 1)，平均加样回收率为99.75%(RSD=1.11%)。结论：该法稳定、快速、简便，结果准确、可靠，可用于忍冬藤颗粒中牛蒡苷的含量测定。

关键词忍冬藤颗粒/药效学；牛蒡苷；含量测定；HPLC

忍冬藤颗粒是由忍冬藤、牛蒡子、黄柏、木瓜、川芎、僵蚕、地龙、蒲公英、泽泻等9味中药组成，具有清热利湿、通络消肿之效，临床主要用于痛风性关节炎和急性炎症的治疗。其君药牛蒡子性味苦、寒，具有疏散风热、宣肺透疹、解毒利咽之效，用于治疗风热感冒、麻疹、风疹等[1]。现代药理研究显示，牛蒡子的主要化学成分为牛蒡苷[2-7]，是其抗炎、抗菌及免疫调节功能的有效成分[5]，故采用HPLC对忍冬藤颗粒中的牛蒡苷进行含量测定[8]。

1药品、试剂与仪器

忍冬藤颗粒(批号 140301，140302，140901，140902，141201，141202，141203，150401，150402，150403)，由甘肃省中医院中药研究所提供。牛蒡苷对照品，供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供，批号110819-200404；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。1525高效液相色谱仪，包括2487紫外可见检测器、1525自动进样器等，美国Waters公司产品； Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，美国Agilent 公司产品；B-220旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂产品；10-1112超声波清洗仪，宁波新芝生物科技股份有限公司产品；JY4001型电子天平，上海精密科学仪器有限公司产品；HHS21-4B电热恒温水浴锅，上海医疗器械五厂产品； DL-5-B台式离心机，上海安亭科学仪器厂产品。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-水(25∶75)，流速1.0 mL/min，进样体积10 μL，检测波长280 nm，柱温30 ℃。

2.2对照品溶液的制备

取牛蒡苷化学对照品适量，精密称定。用甲醇定容于25 mL棕色量瓶中，制成750 mg/L的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取忍冬藤颗粒适量，研细，混匀，取粉末约0.1 g，精密称定，加甲醇15 mL，超声提取2次，每次30 min，合并提取液，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解并定容到25 mL量瓶中，作为供试品溶液。

2.4提取溶剂考察

采用单因素考察的方法。取忍冬藤颗粒适量，研细，混匀，取粉末3份，每份约0.1 g，精密称定;分别加甲醇、乙醇、乙酸乙酯各15 mL，超声提取2次，每次30 min；合并提取液，滤过；滤液蒸干，残渣加甲醇溶解并定容到25 mL量瓶中，作为供试品溶液。按2.1项下色谱条件测定，记录色谱图，计算牛蒡苷含量，结果见表1。

2.5线性关系考察

精密吸取2.2项下对照品溶液0.2,0.5,1.0,2.0,4.0 mL，分别置10 mL棕色量瓶中，用甲醇定容，摇匀，按2.1项色谱条件，进样10 μL，测定，记录色谱图。以质量分数为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。得到回归方程为：Y=0.000 4X+0.01，r=0.992 1，线性范围为15.00～300.00 mg/L。结果表明：牛蒡苷在此质量分数范围内线性关系良好。

2.6精密度试验

精密吸取质量分数为75 mg/L的牛蒡苷对照品溶液，连续进样5次，每次10 μL ；以2.1项下色谱条件测定，记录色谱图；牛蒡苷峰面积的RSD值为1.97%。结果表明：仪器进样精密度较好。

2.7专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液及按供试品溶液制备方法制备的缺牛蒡子阴性样品溶液，按2.1项色谱条件操作，记录色谱图。结果：供试品与对照品溶液均在相同保留时间出现吸收峰，缺牛蒡子阴性溶液无此峰，忍冬藤颗粒中除牛蒡子外其他药物对测定无干扰。本试验条件下牛蒡苷与其他组分可达基线分离，见图1。

2.8重现性试验

取批号为150401的忍冬藤颗粒，研细、混匀；取粉末6份，按2.3项下方法制备供试品溶液，测定，记录色谱图；计算牛蒡苷的平均含量为 26.96 mg/g，RSD值为1.66 %。结果表明：方法重现性良好。

2.9回收率试验

取批号为150401的忍冬藤颗粒(牛蒡苷含量按26.96 mg/g计)，研细，混匀；取粉末约50 mg，精密称定，精密加入750.00 mg/L的牛蒡苷对照品溶液0.9，1.8，3.6 mL，按2.1项下方法，每个质量分数制备3份加样回收供试品溶液。按2.1项下色谱条件测定，记录色谱图，计算回收率。结果见表2。

2.10样品含量测定

取10批忍冬藤颗粒，研细，混匀，取粉末适量，精密称定，按2.3项方法制备供试品溶液，测定，计算10批样品中牛蒡苷的平均含量为26.90 mg/g，RSD值为0.05%。结果见表3。

3小结

本研究在选择提取溶剂时，采用单因素考察的方法，比较了甲醇、乙醇、乙酸乙酯的提取效果，结果甲醇提取率高，牛蒡苷与其他成分分离较好，故选用甲醇作为牛蒡苷含量测定的提取溶剂。本实验结果表明，以本文方法进行忍冬藤颗粒中牛蒡苷的含量测定，方法简单可靠，重复性好，可以用于该制剂的质量控制。

4参考文献

[1]中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010：179.

[2]王海燕.牛蒡子化学成分的研究[J].药学学报,1993,28(12):911-911.

[3]辛贵忠,钱正明,周建良,等. 忍冬藤质量标准研究[J].中国药学杂志，2009,44(1):52-54.

[4]胥爱丽,李素梅,李养学,等.忍冬藤配方颗粒的HPLC指纹图谱研究[J].江西中医药,2012，43(3):64-66.

[5]王潞,赵烽，刘珂.牛蒡子苷及牛蒡子苷元的药理作用研究进展[J].中草药,2008,39 (3): 467-470.

[6]高阳,董雪,康廷国,等.牛蒡子苷元体外抗流感病毒活性[J].中草药,2002,33( 8): 724-726.

[7]杨子峰,刘妮,黄碧松,等.牛蒡子苷元体内抗甲Ⅰ 型流感病毒作用的研究[J].中药材,2005,28( 11): 1012-1014.