鹅病的血清学检验

殷剑 （重庆市长寿区凤城街道畜牧兽医站 401220)

鹅病的血清学检验

殷剑 （重庆市长寿区凤城街道畜牧兽医站 401220)

鹅病的血清学检验也是兽医临床工作中常采用的实验室诊断技术。包括凝集试验、琼脂扩散试验、血凝试验和血凝抑制试验等。

1 凝集试验

凝集反应具有重要的实践意义，利用已知抗原 （称为凝集原）检查未知抗体 （称为凝集素）；也可用已知抗体诊断未知抗原 （如被检病料中分离的未知病菌），从而达到鉴定抗体 （或抗原）和诊断疾病的目的。

1.1 玻板凝集试验

以大肠杆菌为例，用吸管吸取大肠杆菌相应的抗体1滴（0.05ml），滴在玻板上。用接种环通过无菌方法挑取待检大肠杆菌少许，放在玻板上，与抗体混匀。在2min内判定结果，同时做阳性、阴性对照。结果判定：2min内出现颗粒状或块状凝集者为阳性反应；在2min内不出现凝集者为阴性反应。

1.2 凝集试验用于细菌的血清群和型的鉴定

以检测沙门氏菌为例。

1.2.1 分群

取一张洁净玻片，取1滴 （0.05ml）沙门氏菌多价O血清 （A～F群）至玻片上。再用接种环挑取疑为沙门氏菌的纯培养物少许，与玻片上的多价O血清混匀，再稍动玻片。若在2min内出现凝集现象，即可初步确定该菌为沙门氏菌。同时，用生理盐水做对照，以免由于细菌的自凝而判断错误。被A～F多价O血清凝集者，依次用O4、O3、O10、O7、O8、O9、O2和O11因子血清做凝集试验。视其被哪一群O因子血清所凝集，则确定被检沙门氏菌为该群的沙门氏菌。

1.2.2 定型

菌群决定后，用该群所含的各种O因子血清和被检菌做玻片凝集试验，以确定其含哪些O抗原。同理确定其H抗原。根据检出的O和H抗原列出被检菌的抗原式，查对抗原表即可知被检菌为哪种沙门氏菌。例如，某一菌的O抗原为O1、O4、O5、O12，而H抗原为i：1，2，其抗原结构式为1，4，5，12：i：1，2，查知这个菌为鼠伤寒沙门氏菌。

2 血凝试验与血凝抑制试验

某些病毒表面具有凝集动物红细胞的物质，称之为血凝素。兽医临床上能凝集动物红细胞的病毒有鹅副黏病毒、流感病毒等。对新分离的这些病毒材料，可用血凝试验和血凝抑制试验、血细胞吸附和吸附抑制试验、中和试验、空斑减数试验和荧光抗体技术等方法加以鉴定。但迄今为止，血凝试验 （HA）和血凝抑制试验 （HI）仍是一种快速准确的传统实验室手段。

以鹅副黏病毒为例介绍血凝试验与血凝抑制试验的操作方法，使用的器材为V形96孔血凝板。

2.1 血凝试验 （HA)

鹅副黏病毒可以凝集多种动物红细胞，但有的凝集性能不够稳定，故通常多采用鸡的红细胞。被检材料可用含毒鸡胚尿囊液，或含毒细胞培养液 （要冻融2～3次，使细胞破裂释出病毒）。操作方法：将各种试验材料加入各孔中，混合均匀，置于室温 （20～30℃）或37℃10min。每5分钟观察一次，以对照孔的红细胞完全沉淀为准，开始判定结果。或置于18～22℃中45～60min后观察结果。能够使鸡红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，称为该病毒的血凝滴度。能够使鸡红细胞完全凝集的最高稀释倍数的病毒液作为一个血凝单位。在做血凝抑制试验时，病毒液需含4个血凝单位量的病毒。

2.2 血凝抑制试验 （HI)

要检测抗副黏病毒血清的效价，必须在利用血凝试验测定出4个血凝单位病毒的基础上进行血凝抑制试验。血凝抑制试验的操作方法与血凝试验操作方法类似。凡能使4个血凝单位的病毒凝集红细胞的作用完全受到抑制的血清最高稀释倍数，称为血凝抑制价 （血凝抑制滴度）。由于血凝抑制试验通常用2倍比法进行稀释，因此其结果可以表示成以2为底数的负对数。如阳性血清的效价为6lg2，是指在稀释到第6孔可以完全抑制4个血凝 （HA）单位病毒的凝集作用；也可表示阳性血清的血凝抑制 （HI）效价为1:64。

1%鸡红细胞的制备：①用灭菌注射器通过翅静脉采抗凝血1ml（抗凝剂使用3.8%枸橼酸盐）；②将抗凝血放入离心管中，并加入10ml灭菌生理盐水，轻轻混匀，切勿用力吹打，以免红细胞破裂；③用低速离心机以1500转/min离心3min后，小心地吸去上清液；④管底的红细胞用10ml灭菌生理盐水轻轻混匀，再离心，如此重复3次，用生理盐水配制成1%的红细胞悬液，使用前应轻轻吹打混匀。